生物安全实验室技术规范——万融实验

⽣物安全实验室技术规范——万融实验大肠杆菌培养基
实验室伤害以及与⼯作有关的感染主要是由于⼈为失误﹑不良实验技术以及仪器使⽤不当造成的。本章概要介绍了避免或尽量减少这类常见问题的技术和⽅法。
实验室中标本的安全操作
实验室标本的收集、运输和处理不当,会带来使相关⼈员感染的危险。
标本容器
标本容器可以是玻璃的,但最好使⽤塑料制品。标本容器应当坚固,正确地⽤盖⼦或塞⼦盖好后应⽆泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地粘贴标签以便于识别。标本的要求或说明书不能够卷在容器外⾯,⽽是要分开放置,最好放置在防⽔的袋⼦⾥。
标本在设施内的传递
为了避免意外泄漏或溢出,应当使⽤盒⼦等⼆级容器,并将其固定在架⼦上使装有标本的容器保持直⽴。⼆级容器可以是⾦属或塑料制品,应该可以耐⾼压灭菌或耐受化学消毒剂的作⽤。密封⼝最好有⼀个垫圈,要定期清除污染。
标本接收
需要接收⼤量标本的实验室应当安排专门的房间或空间。
打开包装
接收和打开标本的⼈员应当了解标本对⾝体健康的潜在危害,并接受过如何采⽤标准防护⽅法的培训,尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。标本的内层容器要在⽣物安全柜内打开,并准备好消毒剂。
移液管和移液辅助器的使⽤
1、应使⽤移液辅助器,严禁⽤⼝吸取。
2、所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。
3、不能向含有感染性物质的溶液中吹⼊⽓体。
4、感染性物质不能使⽤移液管反复吹吸混合。
5、不能将液体从移液管内⽤⼒吹出。
6、刻度对应(Mark-to-mark)移液管不需要排出最后⼀滴液体,因此最好使⽤这种移液管。
7、污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进⾏处理。
8、盛放废弃移液管的容器不能放在外⾯,应当放在⽣物安全柜内。
9、有固定⽪下注射针头的注射器不能够⽤于移液。
10、在打开隔膜封⼝的瓶⼦时,应使⽤可以使⽤移液管的⼯具,⽽避免使⽤⽪下注射针头和注射器。
11、为了避免感染性物质从移液管中滴出⽽扩散,在⼯作台⾯应当放置⼀块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸,使⽤后将其按感染性废弃物处理。
避免感染性物质的扩散
避免感染性物质的扩散
1、为了避免被接种物洒落,微⽣物接种环的直径应为2~3mm 并完全封闭,柄的长度应⼩于6cm 以减⼩抖动。
2、使⽤封闭式微型电加热器消毒接种环,能够避免在本⽣灯的明⽕上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使⽤不需要再进⾏消毒的⼀次性接种环。
3、⼲燥痰液标本时要注意避免⽣成⽓溶胶。哺乳衣
4、准备⾼压灭菌和/或将被处理的废弃标本和培养物应当放置在防漏的容器内(如实验室废弃物袋)。在丢弃到废弃物盛器中以前,顶部要固定好(如采⽤⾼压灭菌胶带)。
5、在每⼀阶段⼯作结束后,必须采⽤适当的消毒剂清除⼯作区的污染。
江苏万融实验设备有限公司专注于整体实验室设计与建设,官⽹:www.wanronglab
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装有冻⼲感染性物质安瓿的开启
应该⼩⼼打开装有冻⼲物的安瓿,因为其内部可能处于负压,突然冲⼊的空⽓可能使⼀些物质扩散进⼊空⽓。安瓿应该在⽣物安全柜内打开,建议按下列步骤打开安瓿:
1、⾸先清除安瓿外表⾯的污染。
2、如果管内有棉花或纤维塞,可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉⼀痕迹。
3、⽤⼀团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双⼿,然后⼿持安瓿从标记的锉痕处打开。
4、将顶部⼩⼼移去并按污染材料处理。
5、如果塞⼦仍然在安瓿上,⽤消毒镊⼦除去。
6、缓慢向安瓿中加⼊液体来重悬冻⼲物,避免出现泡沫。
装有感染性物质安瓿的储存
装有感染性物质的安瓿不能浸⼊液氮中,因为这样会造成有裂痕或密封不严的安瓿在取出时破碎或爆炸。如果需要低温保存,安瓿应当储存在液氮上⾯的⽓相中。此外,感染性物质应储存在低温冰箱或⼲冰中。当从冷藏处取出安瓿时,实验室⼯作⼈员应当进⾏眼睛和⼿的防护。以这种⽅式储存的安瓿在取出时应对外表⾯进⾏消毒。
对⾎液和其他体液、组织及排泄物的标准防护⽅法
设计标准防护⽅法(其中包括“常规预防措施”)以降低从已知或未知感染源的微⽣物传播危险。
标本的收集、标记和运输
1、始终遵循标准防护⽅法;所有操作均要戴⼿套。
2、应当由受过培训的⼈员来采集病⼈或动物的⾎样。
3、在静脉抽⾎时,应当使⽤⼀次性的安全真空采⾎管取代传统的针头和注射器,因为这样可以使⾎液直接采集到带塞的运输管和/或培养管中。⽤完后⾃动废弃针头。
4、装有标本的试管应置于适当容器中运⾄实验室(运输要求见第15 章),在实验室内部转运也应这样(见本章关于“在
4、装有标本的试管应置于适当容器中运⾄实验室(运输要求见第15 章),在实验室内部转运也应这样(见本章关于“在设施内转移标本”部分)。检验申请单应当分开放置在防⽔袋或信封内。
5、接收⼈员不应打开这些袋⼦。
打开标本管和取样
1、应当在⽣物安全柜内打开标本管。
2、必须戴⼿套,并建议对眼睛和黏膜进⾏保护(护⽬镜或⾯罩)。
3、在防护⾐外⾯要再穿上塑料围裙。
4、打开标本管时,应⽤纸或纱布抓住塞⼦以防⽌喷溅。
玻璃器⽫和“锐器”
玉米割晒机
1、尽可能⽤塑料制品代替玻璃制品。只能⽤实验室级别(硼硅酸盐)的玻璃,任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。
2、不能将⽪下注射针作为移液管使⽤(参见本章“避免感染性物质的接种”部分)。
⽤于显微镜观察的盖玻⽚和涂⽚
⽤于显微镜观察的⾎液、唾液和粪便标本在固定和染⾊时,不必杀死涂⽚上的所有微⽣物和病毒。应当⽤镊⼦拿取这些东西,妥善储存,并经清除污染和/或⾼压灭菌后再丢弃。
⾃动化仪器(超声处理器、涡旋混合器)
1、为了避免液滴和⽓溶胶的扩散,这些仪器应采⽤封闭型的。
2、排出物应当收集在封闭的容器内进⼀步⾼压灭菌和/或废弃。
3、在每⼀步完成后应根据操作指南对仪器进⾏消毒。
组织
1、组织标本应⽤福尔马林固定。
2、应当避免冰冻切⽚。如果必须进⾏冰冻切⽚,应当罩住冰冻机,操作者要戴安全防护⾯罩。清除污染时,仪器的温度要升⾄20℃。
清除污染
建议使⽤次氯酸盐和⾼级别的消毒剂来清除污染。⼀般情况可使⽤新鲜配制的含有效氯1g/L的次氯酸盐溶液,处理溢出的⾎液时,有效氯浓度应达到5g/L。戊⼆醛可以⽤于清除表⾯污染。
对可能含有朊蛋⽩物质的防护
朊蛋⽩(prion,也称作为“慢病毒”)与许多疾病相关,包括某些传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)、克雅病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD;包括新的变异
型)、格-施-沙综合征(Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome)、⼈类致死性家族性失眠症和库鲁病、绵⽺和⼭⽺的瘙痒病、家畜的⽜海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE),以及⿅、糜⿅及貂的传染性脑病。尽管克雅病已经传播到了⼈类,但是还没有证据证实发⽣过由这些病原体所引起的实验室感染。不过,在操作已感染或潜在感染的⼈或动物材料时,还是应当谨慎注意防护。当进⾏与传染性海绵状脑病有关材料的⼯作时,应根据微⽣物因⼦和所研究标本的特征来选择⽣物安全⽔平,并向国内权威机构咨询后进⾏。在中枢神经系统组织中发现有最⾼浓度的朊蛋⽩,动物研究还表
来选择⽣物安全⽔平,并向国内权威机构咨询后进⾏。在中枢神经系统组织中发现有最⾼浓度的朊蛋⽩,动物研究还表明在脾脏、胸腺、淋巴结和肺内可能也有⾼浓度的朊蛋⽩。最近的研究表明,⾆和⾻骼肌组织也存在潜在朊蛋⽩感染的危险。
由于很难彻底灭活朊蛋⽩,因此尽可能地使⽤⼀次性器具,在⽣物安全柜的⼯作台⾯使⽤⼀次性防护罩,这些措施都⾮常重要。
热压设备
主要应该预防的是避免污染材料的⾷⼊或实验室⼯作⼈员的⽪肤刺伤。由于朊蛋⽩不能被普通的实验室消毒和灭菌⽅法所灭活,故应当遵循以下防护措施:
1、强烈建议使⽤专⽤仪器设备,亦即不与其他实验室共⽤仪器。
2、必须穿戴⼀次性防护服(隔离⾐和围裙)和⼿套(对病理学家⽽⾔,要在两层橡胶⼿套间戴钢丝⽹⼿套)。
3、强烈建议使⽤⼀次性塑料制品,它们可按⼲废弃物处理并丢弃。
4、由于灭菌的问题不能使⽤组织处理机(tissue processors),应当使⽤⼴⼝瓶或烧杯(塑料材质)替代。
5、所有操作必须在⽣物安全柜中进⾏。
6、必须特别⼩⼼以避免产⽣⽓溶胶、意外⾷⼊、划伤或刺伤⽪肤。
7、福尔马林固定的组织,即使在长时间福尔马林的浸泡后,仍应视作具有感染性。
8、含有朊蛋⽩的组织标本暴露于96%甲酸1 h 可以基本失活。
9、实验台垃圾,包括⼀次性⼿套、隔离⾐和围裙,均应当采⽤多孔负荷蒸汽灭菌器在134~137℃⾼压灭菌18 min ⼀个循环,或⾼压灭菌3 min 六个循环,然后再焚烧。
10、钢丝⽹⼿套或Kevlar ⼿套等⾮⼀次性⽤具,均必须收集起来清除污染。
11、污染有朊蛋⽩的感染性废液应当⽤含20g/L(2%)有效氯的次氯酸钠(终浓度)处理1h。
12、多聚甲醛熏蒸的⽅法不能降低朊蛋⽩的滴度,朊蛋⽩对紫外线照射也具有抵抗⼒。但是,安全柜仍必须⽤标准⽅法来清除污染(如甲醛蒸⽓),以灭活可能存在的其他微⽣物因⼦。
13、朊蛋⽩污染的⽣物安全柜和其他表⾯可以采⽤含20g/L(2%)有效氯的次氯酸钠处理1h来清除污染。
14、HEPA过滤器摘除后需要在⾄少1000℃的温度下焚烧。在焚烧之前推荐进⾏下述处理:
a. 在摘除前⽤喷漆喷头给过滤器的裸露表⾯喷雾,
信号灯作5G
b. 在摘除过程中将过滤器“装袋”,以及
c. 从⼯作柜中除去HEPA过滤器,这样可以不污染难以操作的安全柜压⼒排风系统。
15、⽤具应当⽤含20g/L(2%)有效氯的次氯酸钠浸泡1 h,然后⽤⽔彻底清洗再进⾏⾼压灭菌。
16、不能⾼压灭菌的⽤具可以反复⽤含20g/L(2%)有效氯的次氯酸钠润湿超过1h 来进⾏清洁,并要求⽤⽔冲洗以清除残留的次氯酸钠。

本文发布于:2024-09-24 01:24:40,感谢您对本站的认可!

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