蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法及产品和用途

1.本发明涉及一种蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法、该方法制备的产品及用途。

背景技术：

2.蒙药玛努-4汤为蒙医临床常用保肝验方，由甘草、芍药、龙胆、山柰等四味药物组成。现有针对该处方的研究表明，蒙药清肝玛努-4中总环烯醚萜、总皂苷及总苷为保肝的主要有效部位。现有的玛努-4汤以水煎或生粉方式应用于临床，在玛努-4生粉中，总环烯醚萜、总皂苷及总苷有效组分含量较低，这些成分的总含量只有0.2％～0.4％不等，水煎液中含量则更低。
3.目前关于蒙药玛努-4汤的有效成分提取分离方面的研究较少。
4103833806a公开了一种中药化学成分制备方法，具体涉及一种从甘草药材中提取制备得到高纯度甘草苷的制备方法，包括：取甘草药材粉加入适量的稀乙醇提取，提取液或渗漉液浓缩，加入适量水溶解，过滤，经大孔吸附树脂分离，得到甘草苷粗品，加入适量的溶剂，加热溶解，过滤，放置结晶，过滤，干燥，得高纯度甘草苷。该专利文献仅涉及从甘草提取制备甘草苷的方法。
5113248555a公开了一种高纯度龙胆苦苷的制备方法，包括：将龙胆属植物在溶剂提取后，经大孔树脂层析富集，纯化后的料液经氧化铝或酸性氧化铝精制，精制液经浓缩回收酒精、浸膏干燥，甲醇结晶，离心分离结晶沉淀，干燥，得到纯度较高的龙胆苦苷。该专利文献仅涉及从龙胆属植物提取制备龙胆苦苷的方法。
6102258588a公开了一种芍药总苷的制备方法，包括将白芍或赤芍用亲水性溶剂浸泡；所述亲水性溶剂是水或含醇量低于30％的甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇水溶液；浸泡后低温渗漉；渗漉液浓缩，过滤，得提取液，提取液过大孔树脂精制。该专利文献仅涉及从白芍或赤芍中提取制备芍药总苷的方法。
7.目前为止，尚未见关于同时从蒙药玛努-4汤中提取纯化总环烯醚萜、总皂苷及总苷这三类化学成分并将三者纯化至较高纯度的方法的报道。

技术实现要素：

8.有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法，该方法制备得到总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量较高的产品。进一步地，本发明的制备方法工艺稳定，重现性好。
9.本发明的另一个目的在于提供所述制备方法制得的产品。
10.本发明的再一个目的在于提供所述制备方法制得的产品的用途。
11.本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
12.本发明提供一种蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
13.1)将质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰混合，用75～85vol％的乙醇回流
提取1～2次，将提取液合并，浓缩，得到初提取物；
14.2)将初提取物调节ph值为4～6，得到上样液；将上样液上样于大孔树脂柱；吸附完成后，先用水洗脱除杂；然后用85～95vol％乙醇洗脱，洗脱流速为0.4～0.6bv/h，洗脱体积为3～4.6bv，收集乙醇洗脱液并浓缩，得到蒙药玛努-4汤有效部位产物。
15.根据本发明所述的制备方法，优选地，步骤1)中，每次提取时，所用75～85vol％的乙醇的体积为甘草、芍药、龙胆和山柰质量之和的5～15倍。
16.根据本发明所述的制备方法，优选地，步骤1)中，每次提取时间为1～4h。
17.根据本发明所述的制备方法，优选地，步骤2)中，大孔树脂柱为ab-8树脂柱。
18.根据本发明所述的制备方法，优选地，所述大孔树脂柱的径高比为1:4～6。
19.根据本发明所述的制备方法，优选地，将初提取物的ph值调节为4～5，得到上样液；所述上样液的浓度为0.03～0.04g生药/ml；所述上样液的流速为0.4～0.7bv/h。
20.根据本发明所述的制备方法，优选地，吸附完成后，先用去离子水或蒸馏水洗脱除杂；去离子水或蒸馏水的用量为3.2～4.5bv。
21.根据本发明所述的制备方法，优选地，步骤2)中，用85～90vol％乙醇洗脱。
22.根据如上所述的制备方法制得的产品，所得蒙药玛努-4汤有效部位产物中，总环烯醚萜的含量大于等于40wt％，总皂苷的含量大于等于15wt％，总苷的含量大于等于25wt％。
23.根据如上所述制备方法制得的所述的产品用于制备保肝药物或保健品的用途。
24.本发明的制备方法主要通过对提取及纯化步骤和参数的精准调控，同时富集得到总环烯醚萜、总皂苷、总苷这三类有效部位，并减少三类有效部位的损失量，提高原药材利用率，最终得到三类有效部位的含量均较高的产品。进一步地，本发明的制备方法稳定可靠，重现性好。根据本发明的制备方法制得的产品中，总环烯醚萜的含量大于等于40wt％，总皂苷的含量大于等于15wt％，总苷的含量大于等于25wt％，三者总含量大于80wt％。由于这三类成分为蒙药玛努-4汤的主要保肝成分，实验证明，本发明的制备方法制得的产品具有更好的保肝效果。
具体实施方式
25.下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
26.本发明中，甘草、芍药、龙胆和山柰均为本领域常规药材，且均符合中国药典2020年版一部规定。其中，所述芍药为白芍或赤芍，并优选为白芍。
27.本发明所述的蒙药玛努-4汤指的是蒙药清肝玛努-4汤，其处方由甘草、芍药、龙胆和山柰按照质量比1:1:1:1组成。需要强调的是，本发明所述蒙药玛努-4汤仅仅指该处方，而非指所述四味药物的水煎液。
28.现有技术中，多见四味药物单独提取纯化某些有些部位的方法，但尚未见对于蒙药玛努-4汤的纯化研究。本发明通过大量实验研究，最终发现了能够同时从蒙药玛努-4汤中获得较高含量的总环烯醚萜、总皂苷和总苷这三类有效部位的方法。
29.本发明的蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法包括如下步骤：1)初步提取步骤；2)大孔树脂纯化步骤。下面进行详细描述。
30.＜初步提取步骤＞
31.在本发明中，可以将甘草、芍药、龙胆和山柰混合后粉碎，也可以分别粉碎后再进行混合，得到混合药材粉末。
32.在某些实施方案中，分别将甘草、芍药、龙胆和山柰药材粉碎至50～80目，优选为60～80目，更优选为过60目筛，然后将过筛后的各粉末按照质量比为1:1:1:1混合，得到混合药材粉末。
33.将所得混合药材粉末用75～85vol％的乙醇回流提取1～2次，将提取液合并，浓缩，得到初提取物。这样得到的初提取物中，总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量较高。
34.所用乙醇的浓度可以为75～85vol％，优选为75～80vol％，更优选为78～80vol％。提取次数为1～2次，优选为提取1次。
35.在本发明中，每次提取时，乙醇的用量为混合药材粉末重量的5～15倍，优选为10～15倍。每次提取时间为1～4h，优选为1～3h，更优选为2～3h。
36.将提取液合并，并过滤，将过滤后的提取液浓缩，可以浓缩至基本无溶剂。在本发明中，过滤可以为减压抽滤。浓缩可以为减压浓缩。
37.＜大孔树脂纯化步骤＞
38.大孔树脂纯化步骤包括：获得上样液步骤；上样步骤；除杂步骤；纯化和浓缩步骤。这样有利于提高所得有效部位纯化产物中总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量。
39.获得上样液步骤
40.将初提取物调节ph值为4～6，得到上样液。
41.在本发明中，优选采用盐酸调节初提取物的ph值。盐酸浓度可以为5～20wt％，优选为5～15wt％，更优选为10～13wt％。可以将初提取物调节ph值为4～6，优选为4～5。本发明惊喜地发现，这样有利于降低总环烯醚萜、总皂苷和总苷的泄漏率。
42.上样步骤
43.将上样液上样于大孔树脂柱，并完成吸附。
44.在本发明中，大孔树脂柱可以选用多种常用型号，如ab-8、hp-20、nka-9或hpd600大孔树脂，但最优选为ab-8树脂柱。ab-8树脂的预处理：将树脂浸泡于95～96vol％乙醇中20～24h，使其充分膨胀，蒸馏水冲洗至无味，再用5～7wt％盐酸溶液浸泡2～3h,后用4～4.5倍5～7wt％盐酸溶液冲洗，蒸馏水冲洗至ph为中性，再用5～6wt％氢氧化钠溶液浸泡2.5～3h，后用4～4.5倍5～6wt％氢氧化钠溶液冲洗，蒸馏水冲洗至ph为中性，再用95～97vol％乙醇冲洗，最后用蒸馏水冲洗至无味，备用。根据本发明的一个具体实施方式，ab-8树脂的预处理如下：将树脂浸泡于95vol％乙醇中24h，使其充分膨胀，蒸馏水冲洗至无味，再用5wt％盐酸溶液浸泡3h，后用4倍5wt％盐酸溶液冲洗，蒸馏水冲洗至ph为中性，再用5wt％氢氧化钠溶液浸泡3h，后用4倍5wt％氢氧化钠溶液冲洗，蒸馏水冲洗至ph为中性，再用95vol％乙醇冲洗，最后用蒸馏水冲洗至无味，备用。
45.本发明中，大孔树脂柱的径高比为1:4～6，优选为1:4～5。这样有利于提高树脂利用率，提高分离效率，提高总环烯醚萜、总皂苷、总苷的转移率，提高所得有效部位纯化产物中总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量。与hp-20、nka-9大孔树脂柱和hpd600大孔树脂柱相比，ab-8大孔树脂柱可以同时获得更高的总环烯醚萜、总皂苷、总苷的吸附-解吸率。
46.上样液的浓度可以为0.03～0.04g生药/ml，优选为0.03～0.036g生药/ml，更优选
为0.032～0.035g生药/ml。上样液的浓度为按照生药量与树脂体积比作为基准。上样液的流速可以为0.4～0.7bv/h，优选为0.4～0.6bv/h，更优选为0.45～0.55bv/h。上样液的体积可以为0.5～0.75bv，优选为0.5～0.7bv，更优选为0.55～0.65bv，再优选为0.57～0.61bv。这样，总环烯醚萜、总皂苷、总苷的泄漏率较低，所得有效部位纯化产物中总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量较高。
47.除杂步骤
48.吸附完成后，用水洗脱除杂。优选地，先用去离子水或蒸馏水洗脱除杂。水的用量为3.2～4.5bv，优选为3.5～4.3bv，更优选为3.6～4.1bv，例如3.82bv。水的用量不可过多或过少，本发明惊奇地发现，这样一方面可以有效除去杂质成分，同时总环烯醚萜、总皂苷、总苷的泄漏率非常低。
49.纯化和浓缩步骤
50.在本发明中，用水除杂后，再用85～95vol％乙醇洗脱，优选地，用85～90vol％乙醇洗脱，更优选地，用87～90vol％乙醇洗脱。洗脱流速可以为0.4～0.6bv/h，优选为0.45～0.6bv/h，更优选为0.47～0.52bv/h，进一步优选为0.5～0.52bv/h。洗脱体积可以为3～4.6bv，优选为3.3～4.3bv，更优选为3.5～3.8bv。本发明经过大量研究和实验发现，采用本发明的特定浓度的乙醇洗脱液以及特定的洗脱流速和洗脱体积，能够将总环烯醚萜、总皂苷、总苷类成分有效洗脱下来，得到较高的转移率，同时除这三类成分以外的杂质成分洗脱较少，所得产品纯度较高。
51.在本发明中，将乙醇洗脱液收集，并浓缩至基本无溶剂，得到蒙药玛努-4汤有效部位产物。
52.产品
53.本发明所述产品即上述制备方法所得的蒙药玛努-4汤有效部位产物，该产物中总环烯醚萜的含量大于等于40wt％，优选为大于等于43wt％，更优选为大于等于45wt％；总皂苷的含量大于等于15wt％，优选为大于等于15.5wt％；总苷的含量大于等于25wt％，优选为大于等于25.5wt％，更优选为大于等于26wt％。三者总含量大于等于80wt％以上。
54.根据本发明优选的实施方式，所得蒙药玛努-4汤有效部位产物中，总环烯醚萜的含量大于等于45wt％，总皂苷的含量大于等于15.5wt％，总苷的含量大于等于26wt％；且同时，指标性成分龙胆苦苷的含量大于等于7.8wt％，甘草苷的含量大于等于2.2wt％，芍药苷的含量大于等于4.7wt％，甘草酸铵的含量大于等于4.8wt％。
55.用途
56.本发明所得有效部位产物可以明显抑制d-glan造成的小鼠血清中alt、ast水平的升高，具有明确的保肝效果。其可以应用于制备保肝药物或保健品。
57.以下制备例、实施例和比较例中，含量测定方法如下：
58.一、采用高效液相谱(hplc)特征图谱技术，结合对照品指认出特征峰，初步完成蒙药玛努-4汤有效组分化学成分的指征。
59.1.1谱条件：
60.谱柱：agilent eclipse xdb-c
18
(4.6mm
×
250mm，5μm)；
61.流动相为乙腈(b)-0.1％的磷酸水(a)，梯度洗脱(0～5min，14～19％b；5～10min，19％～21％b；10～15min，21％～32％b；15～20min，32％～33％b；20～25min，33％～35％
b；25～30min，35％～39％b；30～35min，39％～45％b；35～40min，45％～49％b；40～45min，49％～53％b；45～50min，53％～58％b；50～55min，58％～85％b；55～60min，85％～100％b)；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长254nm；进样体积10μl。
62.1.2溶液的制备：
63.1.2.1对照品溶液：分别精密移取龙胆苦苷对照品溶液(0.6984mg/ml)、芍药苷对照品溶液(0.807mg/ml)、甘草苷对照品溶液(0.836mg/ml)、甘草酸铵对照品溶液(0.884mg/ml)、胡椒碱对照品溶液(0.4252mg/ml)0.9ml、0.139ml、0.62ml、0.84ml、0.43ml配制成混合对照品溶液，摇匀，即得。
64.1.2.2供试品溶液：取蒙药玛努-4汤有效部位产物0.1g于10ml量瓶中，精密加入适量甲醇，超声30min，放凉，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取滤液过微孔滤膜，即得。
65.1.2.3特征图谱的建立和相似度评价
66.取10批不同时间过层析柱的蒙药玛努-4汤有效部位产物，按2.2项下方法制备供试品溶液，按1项谱条件下进样，并将所测的数据导入中药谱指纹图谱相似度计算软件(2012版)，s1号样品谱图中谱峰形、分离度良好，基线平整，故选择其作为参照图谱，进行相似度计算，结果相似度均在0.957～1.000。经多点校正后自动匹配生成的对照特征图谱，共获得109个共有峰，通过比较样品和对照品谱分析保留时间，确定龙胆苦苷、芍药苷、甘草苷、甘草酸铵、胡椒碱等5种共有成分。
67.二、初步提取步骤中，总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量的测定方法包括如下步骤：
68.2.1形成标准曲线。总环烯醚萜含量的测定：以龙胆苦苷为对照品在271nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制备标准曲线。总皂苷含量的测定：以甘草酸铵为对照品在589nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制备标准曲线。总苷含量的测定：以苯甲酸(苯甲酸与芍药苷母核相同，所以可以直接采用苯甲酸作为对照品)为对照品在228nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制备标准曲线。
69.2.2配制样品溶液。精密称取初提取物0.10g，置25ml容量瓶中，加适量甲醇，超声30min，加甲醇至刻度，摇匀，过滤。
70.2.3测定。精密移取不同浓度的样品溶液，置于25ml量瓶中，依次加显剂显，于271nm处测定总环烯醚萜含量；于589nm处测定总皂苷含量；于228nm处测定总苷含量。
71.制备例1
72.将甘草、芍药、龙胆和山柰分别粉碎，过60目筛；将过筛后的的甘草、芍药、龙胆和山柰以质量比为1:1:1:1混合，采用10倍体积的80vol％的乙醇回流提取1次，提取时间为1h，将提取液过滤，浓缩，得到初提取物。并检测初提取物中总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表1。
73.制备例2
74.与制备例1的区别仅在于，制备例2采用75vol％的乙醇提取。检测初提取物中总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表1。
75.比较制备例1～3
76.与制备例1的区别仅在于，比较制备例1采用30vol％的乙醇提取；比较制备例2采用50vol％的乙醇提取；比较制备例3采用60vol％的乙醇提取。检测初提取物中总环烯醚
萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表1。
77.表1
[0078][0079]
注：所述药材重指的是初步提取步骤中所用的以质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰混合药材粉末的重量。
[0080]
制备例3
[0081]
与制备例1的区别在于，采用15倍体积的80vol％的乙醇回流提取1次，提取时间为2h。并重复两次。并检测初提取物中总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表2。
[0082]
表2
[0083][0084]
注：所述药材重指的是初步提取步骤中所用的以质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰混合药材粉末的重量。
[0085]
制备例4-初步提取工艺放大
[0086]
与制备例3的区别仅在于，药材用量不同。并重复两次。结果见表3。
[0087]
表3
[0088][0089]
实施例1
[0090]
将初提取物采用10wt％盐酸调节ph值为4；上样液以0.032g生药/ml的上样浓度上样于ab-8大孔树脂柱(径高比为1:4)，上样液的流速为0.5bv/h；上样完毕后，用3.82bv的蒸馏水洗脱除杂，然后用90vol％的乙醇洗脱，洗脱流速为0.5bv/h，洗脱体积为3.67bv，收集乙醇洗脱液并浓缩，得到蒙药玛努-4汤有效部位产物。
[0091]
实施例2和比较实施例1～2
[0092]
与实施例1的区别仅在于，实施例2的上样液ph值为6。比较实施例1的上样液ph值为2。比较实施例2的上样液ph值为8。检测所得产物中总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表4。
[0093]
表4
[0094][0095]
注：表中原液指的是上样液。
[0096]
实施例3和比较实施例3～4
[0097]
与实施例1的区别仅在于，实施例3中洗脱用溶剂为80vol％乙醇；比较实施例3洗脱用溶剂为60vol％乙醇；比较实施例4洗脱用溶剂为70vol％乙醇。检测所得产物中总环烯醚萜、总皂苷和总苷的含量。结果见表5。
[0098]
表5
[0099][0100]
注：表中原液指的是上样液。
[0101]
实施例4
[0102]
与实施例1的区别在于，实施例4为工艺放大实验。并重复两次。结果见表6和表7。
[0103]
表6
[0104][0105]
注：表中原液指的是上样液。
[0106]
表7
[0107][0108]
由表7可知，采用本发明的方法获得的蒙药玛努-4汤有效部位产物中，总环烯醚萜含量大于400mg/g，即大于40wt％；总皂苷含量大于150mg/g，即大于15wt％；总苷含量大于250mg/g，即大于25wt％。而且，本发明的方法稳定性、重现性好，适合工业化生产。
[0109]
进一步地，采用uhplc-q-orbitrap液质联用系统对蒙药玛努-4汤有效部位进一步验证。分析条件及测试样品制备如下：
[0110]
1.仪器
[0111]
uhplc-q-orbitrap液质联用系统：ultimate 3000型超高效液相谱仪(美国
dionex公司)串联thermo q exactive plus型高分辨质谱(美国thermo fisher scientific公司)；cd(compound discovery，3.3)化合物分析鉴定软件(美国thermo fisher scientific公司)
[0112]
2.谱条件
[0113]
谱柱：waters acquity uplc hss t3 c
18
(2.1mm
×
100mm，1.8μm；waters corporation，usa)；柱温：30℃,；流速：0.2ml
·
min-1；流动相：0.1％甲酸乙腈(a)-0.1％甲酸水(b)，梯度洗脱：0-10min，100％b；10-20min，100％-70％b；10-25min，70％-60％b；25-30min，60％-50％b；30-40min，50％-30％b；40-45min，30％-0％b；45-60min，0％b；60-60.1min，0％-100％b；60.1-70min，100％b。
[0114]
3.质谱条件
[0115]
离子源：加热电喷雾离子化源(hesi)；鞘气流量40arb，辅助气体流量15arb，毛细管温度320℃，辅助气体加热器温度350℃，正喷雾电压3.2kv,负喷雾电压3.0kv。ms的分辨率为70000，ms/ms的分辨率为17500，扫描方式为全扫模式，正、负离子模式分别检测，质谱扫描范围m/z 100-1500。未知化合物的鉴定采用compound discover3.3，mzcloud和mzvault数据库。
[0116]
4.供试品制备
[0117]
称取实施例4所得蒙药玛努-4汤有效部位产物适量，加入1ml80％甲醇，配置成10mg/ml，涡旋，超声10min，14000rpm离心10min，取上清0.8ml置于离心管中，再次离心，取上清置入进样瓶中，待uhplc-ms/ms分析。
[0118]
结果如下表8和表9。
[0119]
表8正离子模式下蒙药玛努-4汤有效部位分析
[0120][0121]
表9负离子模式下蒙药玛努-4汤有效部位分析
[0122][0123]
以及进一步地，采用液相谱对实施例4以及重复一(即一次重复实施例4)的蒙药
玛努-4汤有效部位产物中四个主要指标性成分进行定量分析。分析条件及测试样品制备如下：
[0124]
1.谱条件
[0125]
谱柱：agilent eclipse xdb-c
18
(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相为乙腈(b)-0.1％的磷酸水(a)，梯度洗脱(0～5min，14～18％b；5～10min，18％～20％b；10～15min，20％～27％b；15～20min，27％～39％b；20～25min，39％～45％b；25～30min，45％～100％b)；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长254nm；进样体积10μl。
[0126]
2.对照品溶液的制备
[0127]
分别精密称取龙胆苦苷对照品(7.296mg)、芍药苷对照品(8.35mg)、甘草苷对照品(8.45mg)、甘草酸铵对照品(8.86mg)置于10ml容量瓶中，加谱甲醇定容，配制成浓度分别为0.7296mg/ml、0.835mg/ml、0.845mg/ml、0.886mg/ml的混合对照品溶液，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过备用。
[0128]
3.供试品溶液的制备
[0129]
取实施例4以及重复一所得的蒙药玛努-4汤有效部位产物0.0555g于10ml量瓶中，精密加入适量甲醇，超声30min，放凉，甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。
[0130]
结果如下表10。
[0131]
表10四个主要指标性成分定量分析结果
[0132][0133]
由表10可知，指标性成分龙胆苦苷的含量大于7.8wt％，甘草苷的含量大于2.2wt％，芍药苷的含量大于4.7wt％，甘草酸铵的含量大于4.8wt％。
[0134]
实验例
[0135]
设置各组，每组中各采用10只小鼠。小鼠的体重为18～22g，来自于内蒙古医科大学实验动物中心。
[0136]
根据本领域的常用方法建立d-glan致小鼠急性肝损伤的模型。例如，可以采用该文献“金蝉花多糖对d-glan致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制，温萍，陈盛铎等，中国实验方剂学杂志，2018，24(6):108-113”中所述的方法。
[0137]
阳性组采用葵花牌护肝片(批号z20003336)。
[0138]
生粉低剂量组、生粉中剂量组和生粉高剂量组指的是采用质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰的混合药材粉末形成的各组。
[0139]
纯化物低剂量组、纯化物中剂量组和纯化物高剂量组指的是采用实施例4所得蒙药玛努-4汤有效部位产物而形成的各组。结果见表11。
[0140]
表11各组对d-glan致急性肝损伤小鼠血清中alt、ast指标的影响(n＝6)
[0141][0142]
注：与空白组比较#p《0.05,与模型组比较**p《0.05。
[0143]
由表可以看出，蒙药玛努-4汤有效部位产物可显著降低d-glan造成的小鼠血清中alt、ast水平的升高，具有明确的保肝作用。
[0144]
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

技术特征：

1.一种蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：1)将质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰混合，用75～85vol％的乙醇回流提取1～2次，将提取液合并，浓缩，得到初提取物；2)将初提取物调节ph值为4～6，得到上样液；将上样液上样于大孔树脂柱；吸附完成后，先用水洗脱除杂；然后用85～95vol％乙醇洗脱，洗脱流速为0.4～0.6bv/h，洗脱体积为3～4.6bv，收集乙醇洗脱液并浓缩，得到蒙药玛努-4汤有效部位产物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，每次提取时，所用75～85vol％的乙醇的体积为甘草、芍药、龙胆和山柰质量之和的5～15倍。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，每次提取时间为1～4h。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，大孔树脂柱为ab-8树脂柱。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂柱的径高比为1:4～6。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将初提取物的ph值调节为4～5，得到上样液；所述上样液的浓度为0.03～0.04g生药/ml；所述上样液的流速为0.4～0.7bv/h。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，吸附完成后，先用去离子水或蒸馏水洗脱除杂；去离子水或蒸馏水的用量为3.2～4.5bv。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，用85～90vol％乙醇洗脱。9.根据权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的产品，其特征在于，所得蒙药玛努-4汤有效部位产物中，总环烯醚萜的含量大于等于40wt％，总皂苷的含量大于等于15wt％，总苷的含量大于等于25wt％。10.根据权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的产品用于制备保肝药物或保健品的用途。

技术总结

本发明公开了一种蒙药玛努-4汤有效部位的制备方法及产品和用途，该制备方法包括如下步骤：1)将质量比为1:1:1:1的甘草、芍药、龙胆和山柰混合，用75～85vol％的乙醇回流提取1～2次，将提取液合并，浓缩，得到初提取物；2)将初提取物调节pH值为4～6，得到上样液；将上样液上样于大孔树脂柱；吸附完成后，先用水洗脱除杂；然后用85～95vol％乙醇洗脱，洗脱流速为0.4～0.6BV/h，洗脱体积为3～4.6BV，收集乙醇洗脱液并浓缩，得到蒙药玛努-4汤有效部位产物。采用本发明的制备方法所得蒙药玛努-4汤有效部位产物中的总环烯醚萜、总皂苷、总苷的含量较高。量较高。