第一部分 肉与肉制品化学指标测定实验
实验七 肉与肉制品中聚磷酸盐含量的测定
（一）测定原理
用三提取肉和肉制品的聚磷酸盐、提取液经乙醇、乙醚处理后，用微晶纤维素薄层层析板分离，通过喷雾显检验聚磷酸盐。
（二）仪器和材料
实验室常规仪器。绞肉机，孔径不超过4mm。实验室用匀浆器。涂0.25mm厚板的涂布器。玻璃板：10×20cm**2，5×20cm**2。层析缸。微量注射器。吹风机：有冷、热风挡。喷雾器。
（三）试剂
所用试剂均为分析纯，所用水为蒸馏水或相当纯度的水。
三。乙醚。95％乙醇。薄层板：用薄层用的微晶纤维素制备，或同样的预制板。可溶性淀粉。
标准参比混合液 在100mL水中溶解下列物质：磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）200mg，焦磷酸四钠（Na4P2O7·10H2O）300mg，三磷酸五钠（Na5P3O10）200mg，六偏磷酸钠(NaPO3) x宝商集团陕西辰济药业有限公司
（x＞10）200mg。 展开剂 将异丙醇140mL，浓度为135g/L的三，水溶液40mL，氢氧化铵， 0.6mL混合均匀，放入密闭瓶中。 显剂Ⅰ 将同体积的浓硝酸与浓度为75g/L的四水钼酸铵溶液混合，在100mL 上述溶液中溶解酒石酸10g（现用现配）。
显剂Ⅱ 在浓度为150g/ L焦亚硫酸钠溶液195mL与浓度为200g/L的亚硫酸钠溶液5mL的混合液中溶解1-氨基-2-萘-4-磺酸0.5g，再在此溶液中溶解结晶乙酸钠40g。溶液贮于密闭的棕瓶中，于冰箱保存，可存放一周。
（四）操作方法与步骤
1．取样
至少取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少绞两次使其均质化并混匀，贮于密闭容器中备用。 尽快分析试样，不得超过5h。
机械挖孔桩2．薄层板的制备
将可溶性淀粉0.3g溶解在90mL沸水中，冷却后加入微晶纤维素粉15g，用匀浆器均化1min。用涂布器把浆液涂在玻璃板上，铺成0.25mm厚的浆层，在室温下自然干燥1h，再在100℃烘箱中加热10min，取出立即放入干燥器中。也可以用予制的微晶纤维素板。
3．提取聚磷酸盐
将40～60℃的水15mL倒入装有50g试样的烧杯中，搅拌，不超过5min。加入三10g，彻底搅匀。迅速放入冰箱冷却1h后，取出，用扇形滤纸过滤。若滤液混浊，加固体积的乙醚摇动一次，用吸管吸出醚弃去，水相中加入同体积的乙醇振摇1min，静置几分钟，用扇形滤纸过滤。
4．薄层层析分离
将适量展开剂倒入层析缸中，使深度为5～10mm，盖上盖，避光静置30min。用微量注射器取提取液3μL，若是经过澄清处理的取6μL，点在距板底边约2cm处的师薄层板上， 尽量使点的直径很小。用吹风机的冷风档吹干。
注：
避免热风，防止磷酸盐水解。
用同法将标准参比液3μL点在同一块板上，距样品点1～1.5cm，距板底距离与样品点一致打开层析缸盖，迅速而小心地把点过样的薄层板放入缸中，盖上盖，避光在室温下展开。展开到溶剂前沿上升约10cm处，取出薄层板，放进烘箱中干燥10min（可在室温下干燥30min或用吹风机冷风档吹干）。
5．碳酸盐的检验
展开过的薄层板立在通风橱中，用喷雾器把显剂Ⅰ均匀地喷到板上，出现黄斑。用吹风机吹干簿层板，放进100℃烘箱至少烘1h，把硝酸全部除去。薄层板冷却至室温，再放入通风橱中，喷显剂Ⅱ，出现明显的蓝斑。
注：
不是绝对要喷显剂Ⅱ，但此显剂产生强烈的蓝斑可提高检测效果。
同一试样进行两次检验。
（五）结果的表示
将试样的斑点与磷酸盐标准参比混合液斑点移动距离相比较。
标准参比混合液磷酸盐的Rf值见下表
| zigbee模块通信 名 称 | | 正磷酸盐 | 焦磷酸盐 | 三聚磷酸盐 | 六偏磷酸盐 |
Rf | | 0.70～0.80 | 0.35～0.50 | 0.20～0.30 | 0 |
| | | | | |
一般在肉和肉制品中提取磷酸盐的Rf值偏低。
注：可用鲜肉的提取液校正磷酸盐的Rf值，鲜肉中只含正磷酸盐。
二、化学分析法
（一）原理：
测定磷酸盐时，先将不完全干燥的样品灰化，然后使磷酸盐水解为正盐，再以磷相酸喹啉形成离析出来。 首先，将磷酸盐生成磷铝酸（有柠檬酸盐存在时），然后磷铝酸再与碱、喹啉形成磷铝酸喹啉，柠檬酸能与铵离子结合，阻止磷锃酸铵沉淀的出现。 最初，测定时需要制备两种溶液，以生成磷铝酸喹啉沉淀，即柠檬酸——铝酸溶液和喹啉溶液，后来使用了丙酮，使这种溶液合二为一，即可用一种试剂作为沉淀剂，我们把该种沉淀剂称为喹铝柠酮试剂，它是由混合物中的铝酸盐，柠檬酸盐和丙酮的英文名字的字头命名的。
（二）仪器
① 古氏坩锅（coors4号）（布氏漏斗）；
② 玻璃纤维滤纸（圆周2.4cm）；
将备有玻璃纤维滤纸的古氏坩锅装在抽滤装置上，把滤纸放在板中央，并用50mL左右水洗涤，在通风烘箱内于125℃下干燥古氏坩锅30min，然后移入干燥器内冷却称重。
③ 坩锅；
④ 烘箱；
⑤ 茂福炉；
⑥ 500mL烧杯；
⑦ 100mL量桶；
⑧ 抽滤装置；
⑨ 干燥器。
（三）试剂
① 稀硝酸，加1体积浓硝酸于4体积水中。
② 喹铝柠酮试剂：在150mL水中溶解70g二水合铝酸钠，在85mL硝酸和150mL水的混合液中溶解60g柠檬酸并冷却，边搅拌边缓缓将铝酸钠溶液倒入柠檬酸——硝酸溶液中，溶解5mL合成喹啉于35mL浓硝酸和100mL的混合液中，不时搅拌，并缓缓将其加到锃酸一硝酸溶液中，混合均匀，放置24小时后过滤，向滤液中加280mL丙酮，并用水稀释至1升，混合，存于无的聚乙稀瓶中或深棕玻璃瓶中。
（四）实验步骤
① 准确称取2.5g样品（样品中P2O5的含量不超过25mg），不用于灰化的坩锅中，并在通风烘箱内于125℃下干燥30min，在550℃下灰化至成为白或接近白为止。
② 冷却，向灰化坩锅中加入25mL稀硝酸，在蒸汽浴中加热30min，过滤，收集滤液于400mL烧杯中，用蒸馏水清洗灰化坩锅和滤纸，使烧杯内收集的滤液总体积为100mL左右。
从这一步开始要用25mL稀硝酸和75mL蒸馏水做一试剂空白平行试验。加50mL喹铝柠酮试剂于盛滤液的烧杯中，盖上表面皿并煮沸1min（不要用明火）。悉心搅拌，冷却至室温。
铁橡栎
③ 将沉淀移入与抽滤装置相连的古氏坩锅内，并分别用25mL蒸馏水洗涤5次，每次洗涤水彻底排干后，再加下一部分水洗。
④ 在125℃下使古氏坩锅和锅内收集物干燥30min，移入干燥器中冷却，称重。
（五）计算：
磷含量（%）=
式中： A——样品沉淀物的重量
B——空白测定物重量
燃煤机C——样品重量
0.014（重量换算因数）=
00106——肉蛋白质中天然的磷含量的校正因数
下表为磷换算为磷酸盐的校正因数
名 称 | 化 学 式 | 校正因数 |
磷酸氢二钠 | Na2HPO4 | 4.58 |
六偏磷酸钠 | (NaPO3)6 | 如图是某水上打捞船3.29 |
三聚磷酸钠 | Na5PO10 | 3.96 |
焦磷酸 | Na4P2O7 | 4.29 |
磷酸二氢钠 | NaH2PO4 | 3.87 |
焦磷酸二氢钠 | NaH2P2O7 | 3.58 |
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