IC50曲线测试实验流程

IC50 曲线的测定

IC50即半抑制率, 标准曲线就是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度,半数抑制越低,说明药物对细胞的毒性越高。

实验操作步骤如下:

1. 细胞准备:

A．细胞状态检测:从培养箱中取出细胞,显微镜下观察。

状态描述:

观察结果,细胞汇合度:

B．细胞处理:

将细胞培养基吸出后,加入2ml PBS缓冲液洗一次,加入1ml 0、25% Trypsin-EDTA,放入培养箱中静置数分钟,直至细胞完全离壁悬浮,加入5ml 含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活,混匀后液体转移至15ml离心管,1000rpm 离心3min,弃去液体。

C．细胞计数:

于15ml离心管中加入1ml 含10%FBS的培养基 (无抗生素),充分混匀。取40ul计数,公式如下:

曲柄销细胞浓度(数/ml)=(4大方格细胞数之与/4)×104×稀释倍数

最终得到的细胞密度填入下表,根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。

D．稀释细胞

2. 将稀释好的细胞用排加至96 / 384孔板:

置于培养箱37℃ 5%CO2条件下培养24小时,待细胞贴壁后加药。

集热罩

3. 药物稀释:

将药物进行3倍倍比稀释。

4. 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上,37℃ 5%CO2培养箱培养72h。

5. 荧光素酶检测:

将Celltiter-Glo与ddH20 以1:1混合,加入细胞板(96板:20ul/well; 384板:10ul/well),静置10min后,TECAN infinite F200酶标仪读值。

6. 分析数据,绘制IC50曲线,寻IC30,IC50等值。

7. 验证IC50:

根据IC50曲线出IC50理论值,分别取1/2 倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。

附录:

Materials for Experiment

Reagents for Experiment

线棒涂布

Instruments for Experiment

本文发布于:2024-09-23 02:29:38，感谢您对本站的认可！

标签：细胞浓度加入曲线药物培养箱

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