医学
△［通讯作者］Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇ
ｘｉａｏｈｕａ２２２２＠１６３．ｃｏｍＤＯＩ：１０．１６０９６／Ｊ．ｃｎｋｉ．ｎｍｇｙ
ｘｚｚ．２０２０．５２．１１．００５孕早期胚胎停育染体数目异常的比较和分析 白瑞芳，侯东霞，董 弘，周 燕，马 科，王晓华△，冀小平（内蒙古自治区妇幼保健院遗传优生科，内蒙古呼和浩特 ０１００２０
）［摘要］目的 分析不同年龄、不同流产次数情况下，孕早期胚胎停育染体异常情况。方法 应用荧
光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）检测胚胎停育绒毛组织的１３／１６／１８／２１／２２／Ｘ／Ｙ染体数目，对比不同年龄段、不同流产次数的染体异常。结果 共检测３４９例孕早期胚胎停育绒毛组织，染体异常１４９例，
检出率为４２．７％，其中１６三体占比最高，为３１．５４％（４７／１４９）。高龄与低龄对比显示高龄组胚胎停育染体总异常率高于低龄组，但无统计学差异；其中２１－三体在高龄组异常占比更高，而１６－三体在低龄组中占比更高。
不同流产次数对比显示一次、两次和三次及三次以上流产的染体异常率无差异。结论 染体数目异常是胚胎停育的主要病因，不同染体异常在高龄组与低龄组中的分布存在差异。ＦＩＳＨ技术应用于胚胎停育的病因诊断实用而有效。
［关键词］胚胎停育；高龄；染体数目异常；荧光原位杂交技术
［中图分类号］Ｒ５９６．１ ［文献标识码］Ａ ［论文编号］１００４－０９５１（２０２０）１１－１２９４－
０３ 自然流产是人类的一种重要优生选择机制，排除宫内感染、免疫反应、外界因素等，染体异常为其主要原因。胚胎停育病因的５０％～６０％由染
体异常导致的，其中染体数目异常可占８６％［１］。因此，研究孕早期胚胎停育染体数目异常，可极大
程度明确病因，
指导患者夫妻双方下一胎妊娠，从而降低胚胎停育给患者心理造成的不良影响。胚胎停育或流产的染体检查常用技术有细胞培养法（染
体核型分析）、染体微阵列分析（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｍｉｃｒｏａｒｒａｙ
ａｎａｌｙｓｉｓ，ＣＭＡ）、新一代测序技术（ｎｅｘｔｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
，ＮＧＳ）和荧光原位杂交技术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）。染体核型分析作为染体疾病诊断金标准有培养周期长、操作复杂、成功率低等缺点。ＣＭＡ和ＮＧＳ作为高通量测序技术被应用于临床，对于染体组微
小缺失、
重复等不平衡重排具有优势［２］
防喷网
，但是价格昂贵，一定程度上加重患者的经济负担。ＦＩＳＨ作为
一种生物学诊断技术已被广泛应用，较染体核型分析实验周期短，
较高通量基因测序费用低，可以对染体非整倍体进行快速准确地检测。本次实验采用ＦＩＳＨ技术对例胚胎停育绒毛组织的染体数目异常进行研究。
１ 材料与方法１．１ 研究对象 选择我院２０１７～２０１８年流产后新鲜绒毛组织３４９例，患者年龄２３～４２岁，
孕１～５次，产０～２次，流产１～５次，流产孕周６～１３＋６
缘114周。以上标本来源均经患者签署知情同意书，流产后组织可用于科研，可进行相关染体检查，符合伦理相关规定。
１．２ 方 法１．２．１ 样本处理 取黄豆大小绒毛组织剪碎成绒毛支，加５ ｍｌ ６０％冰乙酸溶液充分混匀消化，５ ｍｉｎ后加入５
ｍｌ固定液（甲醇：冰醋酸＝３：１）轻轻混匀，进行预固定。然后将预固定后的组织悬液１ ５００转离心１０ ｍｉｎ，去上清，加１０
ｍｌ固定液固定，重复以上操作再固定２遍。将固定好的样本离心，去上清加一定量固定液作为滴片样本。在载玻片上滴加
５０～１００μｌ滴片样本，光学显微镜低倍镜下观察细胞量达到３０～４０个／视野以上。制好的玻片在烤片
机上烘烤２ ｈ以上。１．２．２ 玻片样本处理及杂交探针 本实验采用金
菩嘉１３／１６／１８／２１／２２／Ｘ／Ｙ染体数目试剂盒，
根据产品说明书对玻片样本进行漂洗、消化、再漂洗、梯度脱水处理，晾干后，加探针变性，３７度过夜杂交。杂交过后用快洗的方法进行玻片洗脱，加ＤＡ－ＰＩ复染后荧光显微镜下观察。１．２．３ 结果判读 在背景浅信号杂交均匀不影响判读的区域内，选择各通道信号清晰可辨的细胞。随机计数５０个细胞，９０％以上细胞显示正常信号为正常样本，６０％以上细胞显示异常信号为异常样本。
内蒙古医学杂志Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇ
ｏｌｉａ Ｍｅｄ Ｊ ２０２０年第５２卷第１１期
如果无法判读时加大计数至１００个细胞。
获取信息的方法
１．３ 统计学分析 采用ＳＰＳＳ １７．０统计学软件进行数据处理。计数比较采用卡方检验。Ｐ＜０．０５为有统计学差异。
２ 结 果
２．１ ＦＩＳＨ检测 共选取３４９例胚胎停育孕妇，年龄范围为２３～３７岁，孕周为６～１２＋６周。应用ＦＩＳＨ技术共检出染体数目异常１４９，检出率为４２．７％。其中，常染体三体最为常见（９０／１４９，６０．４％），包括：１３－三体９例（９／１４９，６．０４％）、
１６－三体４７例（４７／１４９，３１．５４％）、２１－三体１１例（１１／１４９，７．３８％）、２２－三体１９例（１９／１４９，１２．７５％）；１８－三体４例（４／１４９，２．６８％）；性染体异常次之，发现Ｘ单体４１例（４１／１４９，２７．５２％）；多倍体１８例，占（１８／１４９，１２．０８％），其中三倍体１７例（１７／１４９，１１．４１％），四倍体１例（１／１４９，０．６７％）。见表１。
表１ ＦＩＳＨ检测胚胎停育流产组织染体
异常结果（ｎ，％）
染体数目异常ｎ检出率阳性占比１３－三体９ ２．５８（９／３４９）６．０４（９／１４９）１６－三体４７ １３．４７（４７／３４９）３１．５４（４７／１４９）２１－三体１１ ３．１５（１１／３４９）７．３８（１１／１４９）２２－三体１９ ５．４４（１９／３４９）１２．７５（１９／１４９）１８－三体４ １．１５（４／３４９）２．６８（４／１４９）
Ｘ单体４１ １１．７５（４１／３４９）２７．５２（４１／１４９）
多倍体１８ ５．１６（１８／３４９）１２．０８（１８／１４９）
合计１４９ ４２．７ １００
２．２ 分年龄比较染体异常 将３４９例胚胎停育病例分为高龄组和低龄组。高龄组为预产年龄≥３５岁，共４２例；低龄组为预产年龄＜３５岁，共３０７例。比较结果见表２。高龄组检出异常２３例，总检出率为５４．７６％（２３／４２）；低龄组检出异常１２６例，总检出率为４１．０４％（１２６／３０４）；高龄组与低龄组比较无统计学差异（χ２＝２．８４２，Ｐ＝０．０９２）。分析各染体异常在高龄组和低龄组中的分布显示，２１－三体异常率高龄组（１７．３９％）大于低龄组（５．５６％），（χ２＝４．１０３，Ｐ＝０．０４３）有统计学意义。１６－三体异常率高龄组（２１．７４％）小于低龄组（３３．３３％），（χ２＝１６．３２２，Ｐ＝０．０００）有显著差异。其他染体异常在高低龄组无统计学意义。
２．３ 不同流产次数染体异常 将３４９例胚胎停育病例按流产次数分为３组，分别为流产１次（Ａ组）、流产２次（Ｂ组）和流产≥３次（Ｃ组），各组染体异常检出情况见表３。Ａ组共１８１例，８０例异常，异常比例为４４．２％；Ｂ组共１０７例，异常３７例，异常比例为３４．６％；Ｃ组共６１例，异常２２例，异常比例为３６．７％。Ａ组异常比例＞Ｂ组，Ｂ组与Ｃ组染体异常相差不大，差异无统计学意义（χ２＝３．０３３，Ｐ＝０．２１９）。
表２ 高龄组与低龄组不同染体
数目异常的比较（ｎ，％）
染体异常类型高龄组（ｎ＝２３）低龄组（ｎ＝１２６）χ２值Ｐ值２１－三体４（１７．３９）７（５．５６）４．１０３ ０．０４３１３－三体３（１３．０４）６（４．７６）２．３５０ ０．１２５１６－三体５（２１．７４）４２（３３．３３）１６．３２２ ０．０００２２－三体４（１７．３９）１５（１１．９０）０．５２６ ０．４６８１８－三体０（０．０）４（３．１７）０．７５０ ０．３８６性染体异常４（１７．３９）３７（２９．３７）１．３９８ ０．２３７多倍体３（１３．０４）１５（１１．９０）０．０２４ ０．８７８
合计２３（１００）１２６（１００）
表３ 不同流产次数染体异常的比较（ｎ，％）
组 别流产ｎ异常结果异常比例Ａ １ １８１ ８０ ４４．２
Ｂ ２ １０７ ３７ ３４．６
Ｃ≥３ ６１ ２２ ３６．０７
环卫扫路刷３ 讨 论
胚胎停育是孕早期胚胎发育的病理过程，主要表现为胎儿发育自然终止，及胎儿丢失。通过Ｂ超检查
会发现孕囊内胎芽或胎儿形态不完整，无胎心搏动管或未见胎芽［３］。临床表现一般为妊娠反应消失，阴道出血，且部分孕妇会有下腹痛等症状，如不及时处理会出现感染、不孕等并发症，其不良后果会对孕妇及其家庭造成巨大的伤害。造成胚胎停育的因素有很多，包括染体异常、免疫因素、内分泌因素、感染因素、生殖器官畸形、全身疾病、环境、行为及生活习惯等，除此之外，目前仍有５０％患者病因尚不明确［４］。根据研究显示遗传因素为胚胎停育的重要病因，染体检查对明确患者病因及指导患者下一胎生育有重要意义［５］。特别是在早期胚胎停育流产中，半数以上是由于胚胎染体异常所致，其中以染体的数目异常居多，染体结构异常的发生率大约为２％～５％［６］。染体数目异常中，由１３、１６、１８、２１、２２、Ｘ和Ｙ７种染体的非整倍体所致在染体异常占９０％以上［７］。本研究应用ＦＩＳＨ对孕早期胚胎停育进行染体数目异常的研究。
ＦＩＳＨ作为一种生物学诊断技术，是用荧光素标记已知核酸序列为探针，与靶细胞的ＤＮＡ片段进行杂交，在荧光显微镜下观察靶细胞杂交信号，从
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而对其中的核酸进行定性、定位分析，已被广泛应用。包括在产前诊断、产后遗传病、心血管疾病及
多种癌症检查等。本文检测３４９例孕早期胚胎停育绒毛组织，针对１３／１６／１８／２１／２２／Ｘ／Ｙ号染体数目异常检出率为４２．７％。文献报道在胚胎停育绒毛中染体异常的检出率为５５％～６６％，本实验结果略低于文献报道［８，９］，主要是因为文献中所用检测技术为染体核型分析，能检测所有染体数目异常，而本实验方法为ＦＩＳＨ，仅可检测７条染体数目异常，方法学有局限性。本文染体数目异常病例中：１６－三体占３１．５４％，发生率最高，与文献报道１６－三体占比高达２０％～３０％［１０］相似。其余染体数目异常发生率依次为性染体异常、多倍体、２２－三体。
本研究对孕早期胚胎停育孕妇中高龄与低龄进行对比。由于随着孕妇年龄增加，卵细胞老化从而导致染体在减数分裂过程中出现了不正确分离，进而引起染体异常［１１］。高龄孕妇染体数目异常包括：１６－三体５例占１１．９％，２１－三体、２２－三体、性染体异常各４例占９．５２％，１３－三体、多倍体各３例占７．１４％，染体数目异常没有明显差异。低龄孕妇染体数目异常包括：１６－三体４２例占１３．６８％，性染体异常３７例占１２．０５％，多倍体、１３－三体、２１－三体、１８－三体依次递减［１２］。虽然高龄与低龄在染体总体异常率上无差异，但２１－三体在高龄组异常占比更高，１６－三体在低龄组异常占比更高。２１－三体与孕妇年龄相关［１３］，１６－三体是孕早期高致死性。
流产次数与染体数目异常的关系中，不同流产次数的染体异常发生率并无差异。刘玉昆、Ｏｇａ
城市表层土壤重金属污染分析
ｓａｗａｒａ Ｍ等报道称一次流产染体异常的发生率明显高于反复流产［１４，１５］，他们的研究表明一次流产与胚胎停育染体异常相关性较大。而对有多次流产史的孕妇，反复流产的主要因素不是胚胎染体异常，可能与宫内感染、免疫反应等相关性更大［１６］。这与本研究得出的结论不一致，可能受限于本研究所用的检测方法和样本量。
综上所述，染体数目异常是胚胎停育主要原因，以染体三体居多，１６－三体最常见。２１－三体在高龄孕妇胚胎停育中的染体异常率高于低龄孕妇，低龄孕妇胚胎停育染体异常以１６－三体居多。不同流产次数胚胎染体异常的发生率无差异。ＦＩＳＨ是胚胎停育染体检查的主要手段，如文献报道有较高的检出率［１７］。为了明确胚胎停育的原因，指导患者再生育，建议胚胎停育患者行染体检查。
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