图2 黄金菊含片的HPLC图谱
F ig12 HPLC Chro ma togram of Huangj i n ju
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汽车空调电磁离合器3561
杨庆胜，张京健，张龙海，贾春华，樊小勇Ξ
(河南仲景保健药业有限公司，河南郑州 450001)
侧柏叶是柏科植物侧柏P la ty clad us orien ta lis (L1)F ranco的干燥嫩枝及叶，具有凉血止血、生发乌发之功效，用于吐血衄血、咯血、便血、崩漏下血、血热脱发、须发早白等症[1]。所含主要成分为黄酮类化合物、鞣质和挥发油类等，其中镇咳祛痰和止血主要有效成分为黄酮类化合物中的槲皮苷类[2,3]。
大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，具有吸附快、解附快、吸附容量大、易于再生等特点，已广泛应用于天然产物的分离和富集。侧柏叶中黄酮类成分结构比较复杂，一般方法较难将它们分开，目前侧柏叶总黄酮提取物常用的分析方法多为以芦丁为对照品采用紫外分光光度法测定总黄酮[4]，因芸香苷(芦丁)与侧柏叶中槲皮苷的结构上有所不同，在吸收波长上也有所差异，不能正确地反映出侧柏叶总黄酮提取物的内在质量。本实验选用高效液相谱法，以槲皮苷为指标，对用大孔树脂分离纯化侧柏叶总黄酮进行测定，以确定大孔树脂分离纯化的工艺条件。实验表明，该法准确、灵敏、快速简便，所选指标槲皮苷能够准确地反映侧柏叶总黄酮提取物的内在质量，所优选的工艺条件具有实际意义。
1 仪器与试剂
美国A gilen t1100型高效液相谱仪, H P1050 3D化学工作站；玻璃谱柱(280mm×20 mm)；吸附
树脂均购自南开大学化工厂；槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号1115382 200301)；谱分析用甲醇为谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水(自制)，侧柏叶药材购自河南省药材公司，经鉴定符合《中国药典》2005年版一部侧柏叶项下规定。
2 方法与结果
211 树脂的预处理：各吸附树脂经筛选后，用乙醇浸泡12h，倾倒掉上层乙醇，然后加入吸附柱中，待树脂装好后，用乙醇3BV h通过树脂层，至流出液加水不呈白浑浊为止，并用水以同样速度洗涤乙醇，然后用2BV2%HC l溶液以216mL m in通过树脂层，并浸泡4h后用水以同样速度洗至流出液pH值呈中性，最后用2BV2%N aO H溶液以216 mL m in通过树脂层，并浸泡4h后，用水以同样速度洗至流出液pH值呈中性，滤取，室温晾干，即得。以95%乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗至流出液乙醇2水(1∶5)不呈白为止，然后用蒸馏水洗至无醇味，备用。 212 上柱液的制备：取侧柏叶药材粗粉，用10倍70%乙醇提取2次，每次2h，药液滤过，合并，减压浓缩(每毫升药液相当于生药1g)。
过氧化氢含量的测定213 槲皮苷的H PL C法测定[1]
21311 谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇20101m o l L磷酸二
・
6
2
1
・中草药 Ch i nese Trad itiona l and Herba l D rugs 第37卷第7期2006年7月
Ξ收稿日期:2005210225
作者简介：杨庆胜(1969—)，男，郑州人，主管中药师，执业药师,1993年毕业于河南中医学院中药系，一直主要从事中药的新产品开发，发表科研论文10余篇。
氢钾溶液2冰醋酸(40∶60∶115)为流动相；体积流量:110mL m in ；检测波长:254nm ；柱温：室温；进样量10ΛL ；理论板数按槲皮苷峰计算应不低于2000。
21312 标准曲线的绘制：精密称取槲皮苷对照品1515m g ，置25mL 量瓶中，加乙醇溶解，并稀释至
刻度，摇匀，得0162m g mL 槲皮苷对照品储备液,
备用。分别精密量取储备液110、210、310、410、510mL ，置于25mL 量瓶中，用乙醇稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密量取对照品溶液10ΛL ，按上述H PL C 条件，进样分析。以进样量(X )与峰面积积分值(Y )绘制标准曲线。回归方程Y =3121×10-7X +0100616,r =019998，表明槲皮苷在0
1248～11240Λg 时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。21313 供试品溶液的制备及测定：先把液体样品定
容至适当体积，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL ，置于50mL 量瓶中，加95%乙醇至刻度，
摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液10ΛL ，按上述H PL C 条件，进样分析。谱图见图1。
32槲皮苷32quercetin
图1 槲皮苷对照品(A )和洗脱样品(B )的HPLC 图绑扎带
F ig 11 HPLC Chro ma togram s of querceti n references
substance (A )and desorption sam ple (B )
214 树脂型号的筛选：取50mL 药液，加至已处理
好的4种型号的大孔吸树脂上，药液反复吸附，水洗，再用300mL 70%乙醇洗脱。分别收集吸收后的药液、水洗液、醇洗液，定容，得各样品。检测槲皮苷，按下式计算各树脂的吸附量和洗脱率。结果见表1。
表1 4种树脂对槲皮苷的吸附和洗脱性能
Table 1 Adsorption and desorption properties
of four resi n s on querceti n
树脂型号
极 性吸附量
(m g ・g -1)洗脱率 %
D 2101非极性17156512D 2301非极性16176115AB 28弱极性26189016H PD 2600
极性
2213
7617
吸附量=(C -C e )×V A W
洗脱率=C D ×V D [(C -C e )×V A ]×100%
式中C 为吸附液起始质量浓度,C e 为吸附平衡质量浓度,V A 为吸附液体积,W 为树脂质量,C D 为洗脱液质量浓
度,V D 为洗脱液体积
可以看出，以AB 28树脂的吸附量较大、洗脱率较高，故选择AB 28树脂来分离和纯化侧柏叶中的槲皮苷。
215 洗脱剂及洗脱条件的条件
21511 洗脱体系的确定：最常用的洗脱剂是水、甲
醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯以及它们的混合液等。试验
结果(表2)显示，采用甲醇2水、乙醇2水、丙酮体系对槲皮苷均有较好的洗脱效果。考虑到甲醇的毒性，丙酮的易挥发性等因素，以及实际工作中的安全、成本等问题，确定以乙醇2水体系作为洗脱剂。先以大量水洗脱除去无机盐、蛋白质、多糖等杂质，再以不同体积分数的乙醇2水进行洗脱。
表2 洗脱剂体系对动态吸附性能的影响
Table 2 Effects of eluen t syste m on dynam ica l
adsorption property
单向离合器轴承
洗脱体系洗脱率 %
洗脱体系洗脱率 %
水116 醋酸乙酯6118 甲醇4211 70%甲醇9114 乙醇6318 70%乙醇
9118
丙酮
8915
21512 洗脱剂体积分数对树脂动态洗脱性能的影
响：对已经吸附样品的树脂用一系列不同体积分数的乙醇2水进行洗脱，测洗脱液浓度，计算洗脱率，结果见表3。可见,10%、30%乙醇洗脱率较低，而且洗
脱剂用量较大;50%乙醇洗脱，洗脱率不高;60%～90%乙醇的洗脱率较高，且洗脱剂用量少，起到了浓
缩的效果。考虑到随着洗脱剂体积分数的增加，洗脱液洗下脂溶性杂质也会增多，故选择70%乙醇作
为洗脱剂。
表3 洗脱剂浓度对动态吸附性能的影响
Table 3 Effects of eluen t concen tra tion on
dynam ica l eln tion peoperty
洗脱剂体积分数 %
洗脱体积 BV
洗脱率 %
洗脱剂体积分数 %
洗脱体积 BV
洗脱率 %
10%乙醇12311670%乙醇6911830%乙醇10421180%乙醇5921450%乙醇9631890%乙醇
5
9311
60%乙醇
8
8115
216 最佳脱附条件下的洗脱曲线：在常温下，用70%
乙醇做洗脱剂，以3～5mL m in 的洗脱速率对已吸附了样品的树脂进行洗脱，得到洗脱曲线，见图2。217 工艺验证及样品纯度的测定：取50mL 药液,
加至已处理好的AB 28型号的大孔吸附树脂上，药液反复吸附，水洗，再用330mL 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，除去溶剂，减压干燥，得槲皮苷初产
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7201・中草药 Ch i nese Trad itiona l and Herba l D rugs 第37卷第7期2006年7月
图2 槲皮苷洗脱曲线
F ig12 D esorption curve of querceti n
品，经H PL C测定分析，考察AB28型号树脂的吸附量，洗脱率以及样品中槲皮苷的质量分数。结果AB2 8树脂的吸附量为2618m g g，洗脱率为9116%，槲皮苷的质量分数为32118m g g。对上柱液也进行浓缩干燥处理，粗提物中槲皮苷的收率为1182%。
磁性刀架
3 讨论
一般说来，树脂吸附性能的优劣是有其化学和物理结构决定的，树脂的极性(功能基)和空间结构(孔径、比表面积、及孔容)是影响其吸附性能的重要因素。研究结果显示：极性的H PD2600大孔吸附树脂和弱极性的AB28型大孔吸附树脂对侧柏叶提取液中槲皮苷的吸附量均较大，可能与槲皮苷具有较强的极性有关。另一方面，在某些情况下吸附作用力强，解析起来也会困难一些，如H PD2600型大孔吸附树脂的吸附量大，但解析率较低。
实验表明,AB28型大孔吸附树脂对槲皮苷有较大静态吸附量，也容易解吸附，表现出较好的综合分离纯化能力；同时，其动态吸附、脱附性能也较好。吸附量达2618m g g;615倍床体积的70%乙醇可将吸附在树脂上的样品洗脱下来，解吸率达9116%。因此，本方法可以用来分离纯化侧柏叶中槲皮苷。References:
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RP-HPLC法测定金屏风胶囊中菊苣酸
邵国良，邵建峰Ξ
(正大青春宝药业有限公司，浙江杭州 310023)
紫锥菊E ch inacea p u rp u rea L1为紫菀科的全草，连续数年入选美国最畅销植物药行列[1]。近几年我国已从北美和欧洲引进了该药材。我公司为了市场需要已研制成含紫锥菊的制剂2金屏风胶囊。
金屏风胶囊系由紫锥菊、黄芪等药味组成的复方制剂，具有提高机体免疫的功能，对病毒性感冒有很好的预防作用，菊苣酸是主要生理活性成分，故选用菊苣酸作为质量控制指标。菊苣酸的测定主要采用高效液相谱法[2～5]。本实验采用乙腈2011%磷酸溶液为流动相与C18反相柱，选择紫外检测器，准确、快速地定量分析了金屏风胶囊中菊苣酸，结果可靠。
1 仪器和试剂
mmbbs A gilen t1100型系列高效液相谱仪，包括柱温箱、自动进样系统、紫外检测器，岛津U V—2401PC紫外可见分光光度计。乙腈为谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。菊苣酸对照品(自制，经浙江省药品检验所鉴定结构，质量分数≥96%)，金屏风胶囊(本公司产品，规格为015g 粒)。
2 方法与结果
211 对照品溶液的制备：精密称取菊苣酸对照品，加适量70%甲醇制成2018Λg mL的对照品溶液。212 供试品溶液的制备：取金屏风胶囊的内容物014g，精密称定，置50mL棕量瓶，加适量70%甲醇超声溶解，流水冷却至室温后,70%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，过0145Λm滤膜，即得。
213 测定波长的确定：取菊苣酸对照品溶液(2018Λg mL)，在200～450nm波长扫描，结果在330nm 处有最大吸收，故选择330nm作为菊苣酸的检测波长。
214 流动相的选择：比较了甲醇2水体系和乙腈2水
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