Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？
Tris：三羟甲基氨基甲烷
三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 分离式导电滑环 Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。 由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换
成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。 用途：有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。
1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法：
1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度 1.5 MTris-HCl 配制量 1 L 配制方法
1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.用浓HCl调节pH值至8.8。 4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
TE即Tris-EDTA buffer（10mM Tris，1mM EDTA，pH7.4 pH7.6 pH8.0）。
团队监控常用分子生物学试剂，用于DNA的溶解等。 配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)
组份浓度： 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量： 1 L 配制方法：
IL-40
1. 量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0) 100 ml 500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4.室温保存。
Β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（β-Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸基本信息介绍
也称为二磷酸吡啶核苷酸（DPN），或辅脱氢酶（codehydrogenase）I或辅酶I，是一种转递质子（更准确说是氢离子）的辅酶，它出现在细胞很多代谢反应中。NADH（更准确写法：NADH + H+）是其还原形式。
隐框窗
CAS：53-84-9 分子式：C21H27N7O14P2 EINECS：-200-184-4 分子量：663.425 g·mol−1 比旋光度：[α]23
D -34.8° (1%，水)；
NAD极易吸湿，储存温度-20℃。其固体在干燥器内0℃或室温时稳定；在中性或微酸性溶液（pH3～7)中，0℃时可稳定2周以上；在碱性溶液中极易变质；加热易分解。NAD溶于水（50mg/mL），不溶于丙酮等有机溶剂；pH7.5时最大吸收波长259nm(ε 17800)，最小吸收波长230nm(ε 8000)。
NAD+是脱氢酶的辅酶，如乙醇脱氢酶（ADH），在糖酵解、糖异生、三羧酸循环及呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH + H+。而NADH + H+则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。
NAD的氧化和还原 NAD的吸光曲线
账户管理在吸光方面，NADH+H+在260nm和340nm处各有一吸收峰，而NAD+
则只有260nm一处吸收峰，这是区别两者的重要属性。这同时也是很多代谢试验中，测量代谢率的物理依据。NAD在260nm的吸光系数为1.78*104 L /(mol*cm)，而NADH在340nm的吸光系数为6.2*10³ L/(mol*cm)。 制备方法
目前工业中大量的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸产品主要为从酵母中提取分离获得。该过程虽然工艺成熟，但是耗费能源和材料巨大，产品昂贵，限制了的生产和其后续应用过程的开发。
流程：
新鲜压榨酵母 [破壁，提取] 提取液 [分离] 滤液 [一次吸附][洗脱] 一次洗脱液 [中和] [二次吸附][洗脱][三次吸附][洗脱] 三次洗脱液 [沉淀][过滤][干燥] 辅酶I 1、破壁、提取、分离 将新鲜压榨酵母搅拌下加入等量沸水，加热至95℃保温5min，迅速加入两倍酵母质量的冰块，过滤，滤饼用水洗涤2次，合并滤液和洗液，加入强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7(717)，搅拌16h，过滤，收集滤液。 2、吸附、洗脱
滤液用浓盐酸调pH=2-2.5，经弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂122柱吸附，用无热原水洗至流出液澄清为止，再用0.3mol/L氢氧化铵溶液洗脱，当流出液呈淡咖啡，经340nm分光光度计测定吸光度大于0.05时，开始收集，流出液呈淡黄时停止，得一次洗脱液。 3、中和、吸附、洗脱
led线形投光灯将强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(732)加至洗脱液中，搅拌测pH=5-7，过滤，滤饼用无热原水洗涤，合并洗液和滤液，加稀氨水调pH值至7(约15%)，再用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7 (717)50-60目柱进行吸附，用无热原水洗至流出液澄清无为止。
将766型活性炭60-80目柱与201×7树脂柱串联，用0.1mol/L氯化钾溶液洗脱，洗脱液立即流经活性炭柱进行吸附，吸附完后解除两柱串联，用pH9的无热原水洗涤，再用pH8的4%乙醇洗涤，最后用无热原水洗至中性，用体积比为丙酮：乙酸乙酯：水：浓氨水=4：1：5：0.02的混合液
洗脱，当洗脱液加3倍丙酮产生白浑浊时，收集洗脱液。 4、沉淀、过滤、干燥
洗脱液在搅拌下加30%-40%硝酸调pH=2-2.5，过滤，冰库过夜，过滤，95%的冷丙酮洗涤，真空干燥，得成品。 生物催化法：
申请号：CN 102605026 A
发明名称：一种氧化型辅酶工的制备方法 申请人：苏州汉酶生物技术有限公司 技术方案：
一种氧化型辅酶工的制备方法，该方法使烟酰胺核苷(NR)和三磷酸腺苷二钠盐(ATP-Na2)在pH为5. 0}8. 0的缓冲溶液中，在烟酰胺核苷激酶(NRK)的催化作用下以及二价金属离子存在下，在温度30℃-40℃下反应得到氧化型辅酶I(NAD十)。本发明采用生物催化的方法，利用烟酰胺核苷激酶一锅法制备氧化型辅酶，反应体系简单，条件温和，具备良好的产业化应用前景。 具体实施方式：
在20 mL三口烧瓶中加入10 mL Tris-HCl缓冲溶液(100 mM,pH为7. 5)，依次加入烟酰胺核苷（J,Med. Chem 2007, 50, 0458-0401) 50 mg，三磷酸腺苷二钠盐55 mg，烟酰胺核苷激酶(PLOS Biology, 2007, 5 (10), 2220- 2230)10 mg,氯化镁20 mM，于37℃下，200rpm搅拌反应，利用液相谱一质谱联用监测反应的转化率，经过6小时反应后，检测三磷酸腺苷已经消耗完毕，停止反应。通过进一步的过滤，HZ-818型大孔树脂吸附，冻干，乙醇和水重结晶即可获得氧化型辅酶I产品，收率70%。
ATP试剂配置
1．标准物质配置
1.1取1mgATP标准物质溶解于1.81ml水中配置成：nATP=0.001g /551.1 g/mol=0.0018145527m mol cATP=0.0018145527m mol/1.81ml=0.0010025mol/L=1m mol/L 1.2 取1ml 的（1.1） cATP=1m mol /L加入100ml容量瓶，然后加水加至刻度线，配置成cATP =10u mol/L=10000n mol/L
1.3 取1ml 的（1.2） cATP=10u mol/L加入100ml容量瓶，然后加水加至刻度线，配置成cATP =100n mol/L 2. 检测试剂的配置
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