一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于介入性医疗器械领域，具体涉及一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊及其制备方法和应用

背景技术：

2.缺血性卒中是目前危害人类健康的重大疾病之一，其主要发病原因之一是动脉粥样硬化造成颅内动脉狭窄进而供血不足引发卒中。对于动脉粥样硬化，植入支架是最常用也是最主要的手段，使效率大为提高，但术后存在再狭窄、后期形成血栓等问题。
3.药物涂层球囊(dcb)是腔内的新兴手段，其原理是通过涂层中的活物抑制病变区域血管平滑肌细胞的过度增殖避免血管再狭窄。与药物支架相比，避免了药物持续接触所造成的内皮化障碍。其技术关键是药物的选择和涂层的制备，难点是解决药物的可控释放及患处组织对药物的快速吸收问题。
4.药物的可控释放需要把握药物涂层与球囊表面之间的粘结平衡。粘结力过小时，药物在球囊折叠过程中易脱落，或在置入病变处的输送过程及球囊膨胀过程中被高速流动的血液冲走；粘结力过大时，在球囊扩张的有限时间内，药物难以转移到患处组织达到目的。
5.为了实现药物的可控释放及患处组织对药物的快速吸收，本领域技术人员从药物涂层球囊的构造、涂层的组成、药物的微观形态等各个方向进行了改进，例如，cn208003247 u公开了一种药物球囊的制作方法，在球囊表面360
°
涂覆药物，利用特有的折叠方法，使得一部分药物被包裹在折翼内部，在输送过程中不与血管壁接触，减少了药物的损耗。
6103736154 a公开了一种药物涂层球囊导管，在载体中添加有机酸及多元醇，防止在球囊导管被置入到靶位点前药物过早释放，到达靶位点后促进药物从球囊表面快速释放并被靶组织吸收。
7113813449 a公开了一种纳米粒子载雷帕霉素药物涂层球囊制备方法，以聚乳酸-聚乙醇酸(plga)将载有雷帕霉素的介孔二氧化硅纳米粒子包袱在球囊表面，通过纳米粒子的渗透性、缓释性，提高了雷帕霉素的生物利用度。但二氧化硅纳米粒子是否在人体彻底降解是一个问题，不能彻底降解的二氧化硅纳米粒子可能会产生一定的周身毒性。
8112546414 a公开了一种载药医疗器械及其制备方法，活物包括大环内酯类药物，将药物制备成具有三条以上的棱的长柱体晶体，可有效提高药物至血管壁的转移能力，并延长组织药物的浓度。但同时，外形尖锐的晶体，本身就会对血管壁造成伤害，会引发一系列新的问题。
9.有技术人员将纳米粒子载药技术应用于药物涂层球囊领域，纳米粒子是一种微观胶质体系，其粒径一般＜1μm，可分为纳米微球和纳米微囊。纳米粒子可以穿过组织间隙、毛细血管，通过血脑屏障及组织内皮细胞，将药物在细胞或亚细胞水平上释放。
10.大多数细胞主要以内吞的方式对外源性纳米粒子进行摄取，而内吞主要分为网格
蛋白介导的内吞(clathrin-mediated endocytosis)、细胞膜穴样凹陷介导的内吞(caveolae-mediated endocytosis)、大胞饮和非网格蛋白-细胞膜穴样凹陷依赖的4种内吞。
11111973813 a公开了一种用于多孔球囊血管成形术的雷帕霉素纳米粒，涉及的雷帕霉素纳米粒包括聚合物内核和磷脂外壳，其中聚合物内核由雷帕霉素和生物可降解高分子聚合物组成。既实现了难溶物的体内的缓慢递送，又提高了纳米粒对病变部位组织的亲和能力。该方案制备工艺简单、快速，但形成的纳米粒子粒径不够均一，粒径过小载药量不足，粒径过大不易被细胞内吞。同时包封药物的种类较为单一，载药量有限。此外磷脂在国内的生产工艺不够成熟，批次重复性较差，价格较高，因此在规模化生产方面仍有较大难度。
12.因此，亟待开发一种粒径均一的类脂纳米囊作为药物载体，利用纳米载体的高通过性实现药物向组织的快速递送及在体内的缓释，可生物降解的材料避免了周身毒性问题。

技术实现要素：

13.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊及其制备方法和应用。本发明经特定工艺制备粒径均一的类脂纳米囊作为药物载体，利用纳米载体的高通过性实现药物向组织的快速递送及在体内的缓释，可生物降解的材料避免了周身毒性问题。
14.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
15.第一方面，本发明提供一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
16.(1)将非离子表面活性剂和水混合，得到溶液一；将胆固醇、大环内酯类药物和有机溶剂混合，得到溶液二；
17.(2)将步骤(1)得到的溶液二匀速滴加入溶液一中，进行超声乳化，得到乳液；
18.(3)将步骤(2)得到的乳液中的有机溶剂除去，得到纳米粒子悬液；
19.(4)将步骤(3)得到的纳米粒子悬液过滤，得到纳米粒子滤液；
20.(5)将步骤(4)得到的纳米粒子滤液透析，得到粒径均匀的悬液；
21.(6)将步骤(5)得到的粒径均匀的悬液离心，收集沉淀，得到所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子。
22.在本发明中，通过上述特定的工艺，制备得到粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子，类脂纳米囊是一种类似于脂质体的纳米结构，由油相、水相和非离子表面活性剂三部分组成。具有核-壳结构，可以将活性物质包裹于油相形成的内核中；该工艺制备得到的类脂纳米囊载药粒子具有以下优点：
①
非离子表面活性剂生物相容性和稳定性好，无毒无免疫原性，可生物降解；
②
包裹活性物范围广泛，亲水性、亲脂性物质均能包裹，且载药量相对于脂质体更大；
③
能被某些细胞特异性吞噬，如血管内皮细胞，起到靶向作用；
④
其尺寸、结构可以调节；
⑤
相对于脂质体中用到的磷脂成本较高且批次重复性较差，类脂纳米囊可以有效避免这些问题。
23.优选地，步骤(1)中，所述溶液一中非离子表面活性剂的浓度为1-15mg/ml，例如可
以是1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、8mg/ml、10mg/ml、12mg/ml、15mg/ml等。
24.优选地，步骤(1)中，所述溶液二中胆固醇的浓度为5-20mg/ml，例如可以是5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml等，大环内酯类药物的浓度为5-25mg/ml，例如可以是5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml等。
25.优选地，步骤(1)中，所述非离子表面活性剂选自吐温80、硬脂酸聚醚-21、鲸蜡醇聚醚-25、月桂醇聚醚-23、s40、olivem 800、olivem 700、十六十八烷基醇和葡糖苷、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、六聚单月桂酸酸酯甘油酯、十聚单肉豆蔻酸酯甘油酯、十聚单月桂酸酯甘油酯或六聚单肉豆蔻酸酯甘油酯中的任意一种或至少两种的组合。
26.优选地，步骤(1)中，所述大环内酯类药物选自雷帕霉素、依维莫司、佐他莫司、地塞米松、紫杉醇、多西他赛、普罗布考、秋水仙碱、肝素、阿司匹林或阿霉素中的任意一种或至少两种的组合，其中典型但非限制性的组合包括：雷帕霉素和依维莫司的组合，佐他莫司、地塞米松、紫杉醇和多西他赛的组合，多西他赛、普罗布考、秋水仙碱、肝素、阿司匹林和阿霉素的组合等。
27.优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂选择二氯甲烷、丙酮、或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合。
28.优选地，步骤(2)中，所述匀速滴加的过程中同时进行超声乳化。
29.优选地，步骤(2)中，所述匀速滴加采用微量注射泵进样，进样的速度范围为0.01-99.99ml/min，例如可以是0.01ml/min、1ml/min、2ml/min、5ml/min、10ml/min、15ml/min、20ml/min、25ml/min、30ml/min、35ml/min、40ml/min、60ml/min、80ml/min、90ml/min、99.99ml/min等。
30.优选地，步骤(2)中，所述超声乳化的功率为100-500w，例如可以是100w、150w、200w、250w、300w、350w、400w、450w、500w等，超声乳化的时间为20-100min，例如可以是20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min等。
31.优选地，步骤(2)中，超声乳化后得到乳液的粒径在600nm以下，例如可以是600nm、500nm、400nm、300nm、200nm等。
32.优选地，步骤(3)中，除去有机溶剂的方法为：将步骤(2)得到的乳液中的有机溶剂蒸干。
33.优选地，所述蒸干的温度为30-50℃，例如可以是30℃、35℃、40℃、45℃、50℃等。
34.优选地，步骤(4)中，所述过滤为：将步骤(3)得到的纳米粒子悬液以针式过滤器过滤。
35.优选地，所述针式过滤器中滤膜的孔径为0.22μm、0.45μm或0.88μm中的任意一种。
36.优选地，步骤(5)中，所述透析的次数在2次以上，例如可以是2次、3次、4次等。
37.优选地，步骤(5)中，所述透析膜的截留分子量为500、1000、3500或7000中的任意一种。
38.优选地，步骤(6)中，所述离心的转速为10000-30000r/min，例如可以是10000r/min、15000r/min、20000r/min、25000r/min、30000r/min等，离心的时间为10-30min，例如可以是10min、15min、20min、25min、30min等。
39.优选地，步骤(6)中，所述类脂纳米囊载药粒子的粒径为160-650nm，例如可以是160nm、170nm、180nm、190nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、620nm、650nm等。
40.第二方面，本发明提供一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子，所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子由第一方面所述的制备方法制备得到。
41.第三方面，本发明提供一种药物球囊，所述药物球囊由内到外依次包括球囊本体、亲水涂层和载药涂层；其中，所述载药涂层包括如第二方面所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子。
42.优选地，所述球囊本体包括颅内球囊和/或冠脉球囊。
43.优选地，所述球囊本体的材质为高分子聚合物材质。
44.优选地，所述球囊本体的材质为pebax。
45.优选地，所述亲水涂层为亲水高分子聚合物。
46.优选地，所述亲水高分子聚合物选自聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮或聚甲基乙烯基醚共聚马来酸中的任意一种。
47.优选地，所述亲水涂层的厚度为0.05-0.2μm，例如可以是0.05μm、0.1μm、0.15μm、0.2μm等，优选为0.1μm。
48.优选地，所述药物球囊单位外表面积的载药量为1-10μg/mm2，例如可以是1μg/mm2、2μg/mm2、4μg/mm2、6μg/mm2、8μg/mm2、10μg/mm2等。
49.优选地，所述载药涂层包括具有粘结和赋形作用的添加剂和所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子。
50.优选地，所述载药涂层还包括起粘结和赋形作用的添加剂。
51.优选地，所述添加剂选自葡聚糖、聚山梨醇、山梨糖醇、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、赤藓醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、核糖醇、甘露醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、伏格列波糖、木糖醇或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合。
52.优选地，所述添加剂和类脂纳米囊载药粒子的质量比为(1-20):100，例如可以是1:100、2:100、4:100、6:100、8:100、10:100、12:100、14:100、16:100、18:100、20:100等。
53.第四方面，本发明提供一种所述的药物球囊的制备方法，所制备方法包括以下方法：
54.(a)将所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子分散于乙醇水溶液中，再与具有粘结、赋形作用的添加剂，超声分散，得到纳米粒子喷涂悬液；
55.(b)将步骤(a)得到的纳米粒子喷涂悬液通过超声喷涂设备均匀喷涂于经过亲水处理的球囊表面，再进行固化处理，得到所述药物球囊。
56.优选地，步骤(a)中，所述乙醇水溶液中，乙醇和水的体积比为1:99～30:70，例如可以是1:99、5:95、10:90、15:85、20:80、25:75、30:70等。
57.优选地，步骤(a)中，所述纳米粒子喷涂悬液中，类脂纳米囊载药粒子的浓度为13-40mg/ml，例如可以是13mg/ml、14mg/ml、16mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml等，添加剂的浓度为0.2-8mg/ml，例如可以是0.2mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml等。
58.优选地，步骤(a)中，所述超声分散的的功率为100-500w，例如可以是100w、150w、200w、250w、300w、350w、400w、450w、500w等，超声分散的时间为20-100min，例如可以是20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min等。
59.优选地，步骤(b)中，所述亲水处理的具体步骤为：将质量浓度为0.5～2％(例如可以是0.5％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％等)的聚丙烯酰胺通过喷涂设备均匀喷涂于球囊表面，喷涂量为15～25μg/mm2(例如可以是15μg/mm2、16μg/mm2、18μg/mm2、20μg/mm2、22μg/mm2、24μg/mm2、25μg/mm2等)，喷涂完成后置于真空干燥箱中在0.1～1atm(例如可以是0.1atm、0.2atm、0.4atm、0.6atm、0.8atm、1atm等)、55～65℃(如可以是55℃、56℃、58℃、60℃、62℃、65℃等)条件下干燥20h以上(例如可以是20h、22h、24h、26h、28h、30h等)。
60.优选地，步骤(b)中，所述固化处理为干燥，所述干燥的温度为40-70℃，例如可以是40℃、50℃、60℃、70℃等。
61.第五方面，本发明提供一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊在药物向组织的递送及在体内缓释中的应用。
62.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
63.(1)本发明制备出的纳米粒子粒径均匀，保证载药量的同时还保证粒子可以被细胞快速吸收；
64.(2)本发明在负载药物前先在球囊表面涂覆一层亲水性涂层，确保载药层可以在球囊表面均匀分散、厚度均匀；
65.(3)本发明制备的药物涂层球囊载药量精确可控，避免了载药不足达不到目标以及过量载药造成的浪费、在人体内产生周身毒性；
66.(4)本发明制备的药物涂层中，所有材料均可生物降解且产物对人体无害，不会对病患造成任何损害；
67.(5)本发明制备的喷涂悬液相对于纯水沸点更低，所需干燥温度相对更低，干燥时间相对更短；
68.(6)本发明的制备工艺简单、高效、稳定，操作便捷。
附图说明
69.图1为本发明所述药物球囊的结构示意图；
70.其中，1为球囊本体、2为亲水涂层、3为载药涂层。
71.图2为本发明实施例1～3提供的喷涂悬液中纳米粒子的粒径分布图。
具体实施方式
72.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
73.以下实施例和对比例中各组分来源如下所示：
74.名称厂家型号/或规格球囊苏州中天医疗pebax材质亲水高分子聚合物西陇科学化工聚丙烯酰胺添加剂西陇科学化工蔗糖
75.以下实施例中含亲水涂层的的药物球囊由以下方法制备得到：
76.将质量浓度为1％的聚丙烯酰胺(西陇科学化工，mw 300万)通过喷涂设备均匀喷
涂于球囊表面，喷涂量为20μg/mm2，喷涂完成后置于真空干燥箱中在0.5atm、60℃条件下干燥24h。
77.实施例1
78.本实施例提供一种药物球囊，所述药物球囊由以下步骤制备得到：
79.(1)配制3mg/ml的吐温80去离子水溶液40ml，得到溶液一；取50mg雷帕霉素、50mg胆固醇，同时溶于4ml二氯甲烷中，得到溶液二；
80.(2)将上述溶液二转移至5ml注射器中，将注射器安装在微量注射泵上，微量注射泵进样流量设置为0.5ml/min；将上述的溶液一置于100ml烧杯，将超声乳化探头插入溶液，超声总时长设置为60min，功率设置为300w；打开超声乳化仪使其开始工作，同时打开微量注射泵向水相溶液中滴加溶液二，超声乳化后得到乳液；
81.(3)超声结束后将烧杯转移至40℃的恒温水浴磁力搅拌锅中，边搅拌边蒸发混合液中的二氯甲烷，直至二氯甲烷完全挥发初步得到纳米悬液；
82.(4)通过针式过滤器过滤上述纳米悬液，滤膜的孔径为0.8μm，去除粒径过大的粒子，得到纳米粒子滤液；
83.(5)再以截留分子量为1000的透析膜透析2次，去除游离的雷帕霉素及载体分子，得到粒径均匀的悬液；
84.(6)然后在离心机中20000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，得到所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子(平均粒径为345.3nm)；
85.(7)将上述类脂纳米囊载药粒子重新分散于10％体积浓度的乙醇溶液中，再与20mg/ml的添加剂(蔗糖)混合，制得喷涂悬液；
86.(8)通过超声喷涂设备将喷涂悬液均匀喷涂于经过亲水处理的球囊表面，干燥后得到药物涂层球囊导管，球囊单位外表面积的载药量是2μg/mm2。
87.实施例2
88.本实施例提供一种药物球囊，所述药物球囊由以下步骤制备得到：
89.(1)配制3mg/ml的十聚单肉豆蔻酸酯甘油酯去离子水溶液40ml，得到溶液一；取40mg依维莫司、50mg胆固醇，同时溶于4ml二氯甲烷中，得到溶液二；
90.(2)将上述溶液二转移至5ml注射器中，将注射器安装在微量注射泵上，微量注射泵进样流量设置为0.5ml/min；将上述的溶液一置于100ml烧杯，然后将超声乳化探头插入溶液，超声总时长设置为60min，功率设置为300w；打开超声乳化仪使其开始工作，同时打开微量注射泵向水相溶液中滴加溶液二，超声乳化后得到乳液；
91.(3)超声结束后将烧杯转移至40℃的恒温水浴磁力搅拌锅中，边搅拌边蒸发混合液中的二氯甲烷，直至二氯甲烷完全挥发初步得到纳米悬液；
92.(4)通过针式过滤器过滤上述纳米悬液，滤膜的孔径为0.8μm，去除粒径过大的粒子，得到纳米粒子滤液；
93.(5)再以截留分子量为1000的透析膜透析2次，去除游离的雷帕霉素及载体分子，得到粒径均匀的悬液；
94.(6)然后在离心机中23000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，得到所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子(平均粒径为349.2nm)；
95.(7)将上述类脂纳米囊载药粒子重新分散于12％体积浓度的乙醇溶液中，再与
15mg/ml的添加剂(蔗糖)混合，制得喷涂悬液；
96.(8)通过超声喷涂设备将喷涂悬液均匀喷涂于经过亲水处理的球囊表面，干燥后得到药物涂层球囊导管，球囊单位外表面积的载药量是2μg/mm2。
97.实施例3
98.本实施例提供一种药物球囊，所述药物球囊由以下步骤制备得到：
99.(1)配制3mg/ml的吐温80去离子水溶液40ml，得到溶液一；取50mg佐他莫司、50mg胆固醇，同时溶于4ml丙酮中，得到溶液二；
100.(2)将上述溶液二转移至5ml注射器中，将注射器安装在微量注射泵上，微量注射泵进样流量设置为0.5ml/min；将上述的溶液一置于100ml烧杯，然后将超声乳化探头插入溶液，超声总时长设置为60min，功率设置为300w；打开超声乳化仪使其开始工作，同时打开微量注射泵向水相溶液中滴加溶液二，超声乳化后得到乳液；
101.(3)超声结束后将烧杯转移至40℃的恒温水浴磁力搅拌锅中，边搅拌边蒸发混合液中的丙酮，直至丙酮完全挥发初步得到纳米悬液；
102.(4)通过针式过滤器过滤上述纳米悬液，滤膜的孔径为0.8μm，去除粒径过大的粒子，得到纳米粒子滤液；
103.(5)再以截留分子量为1000的透析膜透析2次，去除游离的雷帕霉素及载体分子，得到粒径均匀的悬液；
104.(6)然后在离心机中23000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，得到所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子(平均粒径为347.5nm)；
105.(7)将上述类脂纳米囊载药粒子重新分散于于15％体积浓度的乙醇溶液中，再与10mg/ml的添加剂(蔗糖)混合，制得喷涂悬液；
106.(8)通过超声喷涂设备将喷涂悬液均匀喷涂于经过亲水处理的球囊表面，干燥后得到药物涂层球囊导管，球囊单位外表面积的载药量是2μg/mm2。
107.实施例4
108.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(7)中，将添加剂蔗糖替换为相同浓度的葡聚糖。
109.实施例5
110.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(7)中，将添加剂蔗糖替换为相同浓度的甘露醇。
111.实施例6
112.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中，将吐温80替换为等质量的硬脂酸聚醚-21。
113.实施例7
114.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中，配制0.5mg/ml的吐温80去离子水溶液40ml，得到溶液一；取10mg雷帕霉素、50mg胆固醇，同时溶于4ml二氯甲烷中，得到溶液二。
115.实施例8
116.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中，配制5mg/ml的吐温80去离子水溶液40ml，得到溶液一；取50mg雷帕霉素、10mg胆固醇，同时溶于4ml二氯甲
烷中，得到溶液二。
117.实施例9
118.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(2)中，所述进样流量设置为0.01ml/min。
119.实施例10
120.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(2)中，所述进样流量设置为10ml/min。
121.实施例11
122.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(4)中，滤膜的孔径为0.8μm。
123.实施例12
124.本实施例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(5)中，滤以截留分子量为7000的透析膜透析2次。
125.对比例1
126.本对比例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中，将吐温80替换为等质量的十二烷基苯磺酸钠(阴离子表面活性剂)。
127.对比例2
128.本对比例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(1)中，将胆固醇替换为等质量的磷脂。
129.对比例3
130.本对比例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，步骤(2)中，不采用微量注射泵进样，而是直接将溶液一和溶液二，以50rpm的转速60min内混合均匀。
131.对比例4
132.本对比例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，不进行步骤(4)过滤，而直接进行步骤(5)透析。
133.对比例5
134.本对比例提供一种药物球囊，与实施例1的区别仅在于，不进行步骤(5)透析，而直接进行步骤(6)离心。
135.测试例1
136.粒径分布测试
137.测试样品：实施例1-3制备得到的喷涂悬液；
138.测试方法：采用粒度分布仪(厂家：masterriser型号：2000e)进行测试
139.测试结果如图2所示，3种方案制备出的纳米粒子粒径均在350nm左右，说明本发明将经特定工艺制备粒径均一的类脂纳米囊作为药物载体。
140.测试例2
141.输送损失率和组织吸收率测试
142.测试样品：实施例1-12和对比例1-5制备得到的药物球囊；
143.测试方法：各分a、b、c组，a组药物涂层球囊直接测试药物含量m1，b组通过体外测试模型，模拟药物球囊在人体使用过程，采用1:1人体管路模型，用指引导管作为输送路径，
管路模型末端接猪冠脉血管，利用蠕动泵控制水流速度。b组药物涂层球囊通过导引导丝，输送至猪冠脉血管位置，然后从管路末端剪下球囊部分并干燥，放入玻璃容器内加入定量乙腈，超声波震荡后，使用高效液相谱仪测试得到药物涂层球囊上药物含量m2。c组药物球囊通过导引导丝到达猪冠脉位置，然后扩张球囊，保持10atm压力60s，撤出药物球囊。剪下猪冠脉血管组织，干燥后使用乙腈浸泡，并超声波震荡15min后，测试浸提液药物含量，得到药物球囊转载至血管组织中药量m3。
144.液相谱法测量药物含量：选用仪器：液相谱仪waters 2695；谱柱：岛津，c18，4.6
×
250，5μm；仪器工作参数：检测波长：雷帕霉素药物278nm，柱温：40℃，进样量：10μl，流速：1.2ml/min，按上述参数设定，待仪器稳定后，对样品溶液进样上机测试。球囊输送损失率为[(m
1-m2)/m1]，组织吸收率为(m3/m2)；具体测试结果如下表1所示：
[0145]
表1
[0146]
[0147][0148]
由表1测试数据可知，本发明制备得到的药物球囊的输送损失率在57％以下，组织吸收率在13％以上，由此说明本发明制备出的纳米粒子粒径均匀，保证载药量的同时还保证粒子可以被细胞快速吸收；本发明在负载药物前先在球囊表面涂覆一层亲水性涂层，确保载药层可以在球囊表面均匀分散、厚度均匀；且本发明制备的药物涂层球囊载药量精确可控，避免了载药不足达不到目标以及过量载药造成的浪费、在人体内产生周身毒性。
[0149]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：

1.一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)将非离子表面活性剂和水混合，得到溶液一；将胆固醇、大环内酯类药物和有机溶剂混合，得到溶液二；(2)将步骤(1)得到的溶液二匀速滴加入溶液一中，进行超声乳化，得到乳液；(3)将步骤(2)得到的乳液中的有机溶剂除去，得到纳米粒子悬液；(4)将步骤(3)得到的纳米粒子悬液过滤，得到纳米粒子滤液；(5)将步骤(4)得到的纳米粒子滤液透析，得到粒径均匀的悬液；(6)将步骤(5)得到的粒径均匀的悬液离心，收集沉淀，得到所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子。2.根据权利要求1所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述溶液一中非离子表面活性剂的浓度为1-15mg/ml；优选地，步骤(1)中，所述溶液二中胆固醇的浓度为5-20mg/ml，大环内酯类药物的浓度为5-25mg/ml；优选地，步骤(1)中，所述非离子表面活性剂选自吐温80、硬脂酸聚醚-21、鲸蜡醇聚醚-25、月桂醇聚醚-23、s40、olivem 800、olivem 700、十六十八烷基醇和葡糖苷、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、六聚单月桂酸酸酯甘油酯、十聚单肉豆蔻酸酯甘油酯、十聚单月桂酸酯甘油酯或六聚单肉豆蔻酸酯甘油酯中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(1)中，所述大环内酯类药物包括雷帕霉素、依维莫司、佐他莫司、地塞米松、紫杉醇、多西他赛、普罗布考、秋水仙碱、肝素、阿司匹林或阿霉素中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂选择二氯甲烷、丙酮、或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(2)中，所述匀速滴加的过程中同时进行超声乳化；优选地，步骤(2)中，所述匀速滴加采用微量注射泵进样，进样的速度范围为0.01-99.99ml/min；优选地，步骤(2)中，所述超声乳化的功率为100-500w，超声乳化的时间为20-100min；优选地，步骤(2)中，超声乳化后得到乳液的粒径在600nm以下。3.根据权利要求1或2所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，除去有机溶剂的方法为：将步骤(2)得到的乳液中的有机溶剂蒸干；优选地，所述蒸干的温度为30-50℃；优选地，步骤(4)中，所述过滤为：将步骤(3)得到的纳米粒子悬液以针式过滤器过滤；优选地，所述针式过滤器中滤膜的孔径为0.22μm、0.45μm或0.8μm中的任意一种。4.根据权利要求1-3中任一项所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述透析的次数在2次以上；优选地，步骤(5)中，所述透析膜的截留分子量为500、1000、3500或7000中的任意一种；优选地，步骤(6)中，所述离心的转速为10000-30000r/min，离心的时间为10-30min；优选地，步骤(6)中，所述类脂纳米囊载药粒子的粒径为160-650nm。5.一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子，其特征在于，所述粒径均匀的类脂纳米囊载
药粒子由如权利要求1-4中任一项所述的制备方法制备得到。6.一种药物球囊，其特征在于，所述药物球囊由内到外依次包括球囊本体、亲水涂层和载药涂层；其中，所述载药涂层包括如权利要求5所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子。7.根据权利要求6所述的药物球囊，其特征在于，所述球囊本体包括颅内球囊和/或冠脉球囊；优选地，所述球囊本体的材质为高分子聚合物材质；优选地，所述球囊本体的材质为pebax；优选地，所述亲水涂层为亲水高分子聚合物；优选地，所述亲水高分子聚合物选自聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮或聚甲基乙烯基醚共聚马来酸中的任意一种；优选地，所述亲水涂层的厚度为0.05-0.2μm，优选为0.1μm；优选地，所述药物球囊单位外表面积的载药量为1-10μg/mm2；优选地，所述载药涂层还包括起粘结和赋形作用的添加剂；优选地，所述添加剂选自葡聚糖、聚山梨醇、山梨糖醇、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、赤藓醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、核糖醇、甘露醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜醇、肌醇、庚七醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、伏格列波糖、木糖醇或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述添加剂和类脂纳米囊载药粒子的质量比为(1-20):100。8.一种根据权利要求6或7所述的药物球囊的制备方法，其特征在于，所制备方法包括以下方法：(a)将所述粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子分散于乙醇水溶液中，再与任选的具有粘结、赋形作用的添加剂，超声分散，得到纳米粒子喷涂悬液；(b)将步骤(a)得到的纳米粒子喷涂悬液通过超声喷涂设备均匀喷涂于经过亲水处理的球囊表面，再进行固化处理，得到所述药物球囊。9.根据权利要求8所述的药物球囊的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述乙醇水溶液中，乙醇和水的体积比为1:99～30:70；优选地，步骤(a)中，所述纳米粒子喷涂悬液中，类脂纳米囊载药粒子的浓度为13-40mg/ml，添加剂的浓度为0.2-8mg/ml；优选地，步骤(a)中，所述超声分散的的功率为100-500w，超声分散的时间为20-100min；优选地，步骤(b)中，所述亲水处理的具体步骤为：将质量浓度为0.5～2％的聚丙烯酰胺通过喷涂设备均匀喷涂于球囊表面，喷涂量为15～25μg/mm2，喷涂完成后置于真空干燥箱中在0.1～1atm、55～65℃条件下干燥20h以上；优选地，步骤(b)中，所述固化处理为干燥，所述干燥的温度为40-70℃。10.一种如权利要求5所述的粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、权利要求6或7所述的药物球囊在药物向组织的递送及在体内缓释中的应用。

技术总结

本发明提供一种粒径均匀的类脂纳米囊载药粒子、药物球囊及其制备方法和应用。所述类脂纳米囊载药粒子的制备方法包括以下步骤：(1)将非离子表面活性剂和水混合，得到溶液一；将胆固醇、大环内酯类药物和有机溶剂混合，得到溶液二；(2)将溶液二匀速滴加入溶液一中，进行超声乳化，得到乳液；(3)将乳液中的有机溶剂除去，得到纳米粒子悬液；(4)将纳米粒子悬液过滤，得到纳米粒子滤液；(5)将纳米粒子滤液透析，得到粒径均匀的悬液；(6)将粒径均匀的悬液离心，收集沉淀，得到所述类脂纳米囊载药粒子。本发明将经特定工艺制备粒径均一的类脂纳米囊作为药物载体，利用纳米载体高通过性实现药物向组织的快速递送及在体内的缓释。物向组织的快速递送及在体内的缓释。物向组织的快速递送及在体内的缓释。