水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途

1.本发明属于心血管疾病技术领域，具体涉及一种水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途。

背景技术：

2.众所周知，心血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的手段，全世界每年死于心血管疾病的人数也高达1500万人，居各种疾病死因首位。而心脏作为全身的泵血器官，是血液循环的动力源泉，因此改善心脏功能，提高泵血能力对于人们预防心肌梗死、肥大性心肌病以及心肌炎等非常重要。年龄被认为是心血管疾病的主要因素，其发病率随着年龄的增长而显著增加。近年来，心血管疾病的发生逐渐年轻化，除了提倡健康合理的生活方式，积极开发和寻安全、有效的心血管疾病的药物也显得尤为迫切。
3.水晶兰苷(monotropein,mo)，是从巴戟天中提取的化合物，具有巨大的药理潜力。目前并未有关于水晶兰苷在心脏病中的相关机理研究。
4.故基于此，提出本发明技术方案。

技术实现要素：

5.为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
7.本发明提供了水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途。
8.进一步地，本发明提供了水晶兰苷在制备心脏疾病的药物中的用途。
9.进一步地，本发明提供了水晶兰苷在制备心肌肥大的药物中的用途。
10.进一步地，本发明提供了水晶兰苷在制备心肌梗死的药物中的用途。
11.进一步地，本发明提供了水晶兰苷在制备心肌炎的药物中的用途。
12.进一步地，本发明提供了水晶兰苷在制备心肌纤维化的药物中的用途。
13.进一步地，所述的药物是以水晶兰苷为原料，加入医学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。
14.进一步地，所述的制剂为口服制剂或注射制剂。
15.发明人长期研究心血管疾病，深知其已成为全球居民死亡的首要原因，给社会和患者带来严重的公共卫生负担。其中心肌肥大、心肌梗死、心脏纤维化、心肌炎是常见的心血管疾病。在疾病发生过程中心肌细胞内往往伴随发生强氧化应激和剧烈的炎症性反应，从而导致心肌细胞死亡、成纤维细胞增生、心脏纤维化，最终致使心脏功能降低，引起心力衰竭而死亡。
16.发明人经过长期研究总结，发现水晶兰苷(是一种从巴戟根中分离出来的环烯醚萜苷)具有巨大的药理潜力，有抗炎、镇痛的作用。具体的：水晶兰苷能够显著抑制心肌细胞
内的氧化应激和炎症反应，减少心肌细胞死亡和心脏纤维化，且调节mtor和stat3通路，可抗心脏疾病，包括心肌梗死、心肌肥大、炎性心肌损伤，能够作为心脏疾病的新用途。
17.本发明的有益效果为：
18.本发明的体外实验表明水晶兰苷对h2o2引起的心肌细胞死亡、炎性反应、氧化应激均有很强的拮抗作用；同时水晶兰苷还能抑制缺氧复氧引起的心肌细胞凋亡、炎性反应以及氧化应激。体内实验表明水晶兰苷对异丙肾上腺素(iso)引起的心肌肥大和心肌纤维化、炎症均有减弱作用。因此水晶兰苷有可能作为中药化合物应用于临床心肌肥大、心肌梗死、心肌炎以及心肌纤维化等的，具有很好的应用前景。
附图说明
19.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
20.图1：水晶兰苷呈浓度依赖性的拮抗h2o2引起的心肌细胞活力下降。
21.图2：水晶兰苷呈浓度依赖性的降低h2o2引起的炎性因子的表达。
22.图3：水晶兰苷呈浓度依赖性的降低h2o2引起的心肌细胞内ros。
23.图4：水晶兰苷呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的心肌细胞凋亡。
24.图5：水晶兰苷呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的炎性因子的表达。
25.图6：水晶兰苷可呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的心肌细胞内ros。
26.图7：水晶兰苷呈浓度依赖性的上调内源性保护基因nrf2。
27.图8：水晶兰苷抑制iso引起的心肌肥大。
28.图9：水晶兰苷抑制iso引起的心脏炎症反应。
29.图10：水晶兰苷抑制iso引起的心脏纤维化。
30.图11：水晶兰苷调节mtor和stat3信号通路。
具体实施方式
31.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
32.发明人研究发现如下结论：
33.(1)水晶兰苷(monotropein,mo)可显著抑制双氧水(h2o2)引起的剧烈氧化应激和心肌细胞死亡，抑制炎性通路tnfα和il-6，减少炎症性反应，发挥保护作用。表明水晶兰苷对心肌细胞内的氧化应激、炎症反应和细胞死亡有作用。
34.(2)水晶兰苷(monotropein,mo)可显著降低缺氧复氧(心肌梗死的体外模型)引起的心肌细胞凋亡(细胞死亡的一种方式)、炎症通路nf-κb和il-6、氧化应激，同时上调抗氧化应激基因nrf2的蛋白表达。表明水晶兰苷对心肌梗死也有作用。
35.(3)水晶兰苷(monotropein,mo)可拮抗异丙肾上腺素(iso)引起的心肌肥大，降低
炎症基因tnfα和il-6的表达，减少心脏纤维化。同时检测信号通路发现水晶兰苷通过调节与肥大和纤维化密切相关的mtor和stat3发挥作用。表明水晶兰苷对心肌肥大和纤维化也有作用。
36.具体的，相关研究过程如下：
37.(一)h2o2模型
38.1、参考图1，培养心肌细胞系h9c2细胞，在96孔板中接入10000个h9c2细胞，加入不同浓度的(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，加入100μm的h2o2继续处理12小时，采用细胞活力检测试剂盒cck8检测细胞活力。结果表明水晶兰苷本身不会影响心肌细胞的活力，且可呈浓度依赖性的拮抗h2o2引起的心肌细胞活力下降。
39.2、参考图2，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入150000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，加入100μm的h2o2继续处理12小时，收集细胞，提取mrna，检测炎症因子tnfα和il-6的表达。结果表明水晶兰苷本身不会影响炎性因子的表达，且可呈浓度依赖性的降低h2o2引起的炎性因子的表达。
40.3、参考图3，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入100000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，加入100μm的h2o2继续处理12小时，待实验终点时，加入ros检测探针孵育30分钟，在荧光显微镜下观察细胞内ros的水平。结果表明水晶兰苷可呈浓度依赖性的降低h2o2引起的心肌细胞内ros。
41.(二)缺氧复氧模型
42.1、参考图4，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入150000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，进行物理缺氧8小时，复氧2小时(模拟体内心肌梗死疾病)，收集细胞，提取细胞内蛋白，检测细胞凋亡总开关cleaved-caspase3的表达。结果表明水晶兰苷可呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的心肌细胞凋亡。
43.2、参考图5，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入150000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷(monotropein,mo)预处理3小时后，进行物理缺氧8小时，复氧2小时(模拟体内心肌梗死疾病)，收集细胞，提取mrna，检测炎症因子nf-κb和il-6的表达。结果表明水晶兰苷可呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的炎性因子的表达。
44.3、参考图6，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入150000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，进行物理缺氧8小时，复氧2小时(模拟体内心肌梗死疾病)，待实验终点时，加入ros检测探针孵育30分钟，收集细胞，在酶标仪下检测细胞内ros的水平。结果表明水晶兰苷可呈浓度依赖性的降低缺氧复氧引起的心肌细胞内ros。
45.4、参考图7，培养心肌细胞系h9c2细胞，在6孔板中接入150000个h9c2细胞，加入不同浓度(0,1,5,25μm)水晶兰苷预处理3小时后，进行物理缺氧8小时，复氧2小时(模拟体内心肌梗死疾病)，收集细胞，提取蛋白，检测内源性拮抗氧化应激的基因nrf2的表达。结果表明水晶兰苷可呈浓度依赖性的上调内源性保护基因nrf2，拮抗缺氧复氧引起的氧化应激损伤。
46.(三)体内实验
47.购买野生型wt小鼠，腹腔注射水晶兰苷(40mg/kg和80mg/kg，每天一次)预保护1周后，采用皮下给药iso(5mg/kg，每天一次)建立心肌肥大和纤维化模型，1周后，称小鼠体重
和心脏重量计算心重/体重(hw/bw)评价心肌肥大情况，由图8知，水晶兰苷能抑制iso引起的心肌肥大；取心尖组织提取mrna检测炎症因子tnfα和il-6的表达评价心脏炎症反应指标，由图9知，水晶兰苷能抑制iso引起的心脏炎症反应；取心脏中间部位组织进行固定后石蜡切片，天狼星红染评价心脏纤维化水平，由图10知，水晶兰苷能抑制iso引起的心脏纤维化；取心脏心尖组织提取蛋白，检测与肥大和纤维化密切相关的信号通路mtor和stat3的表达，由图11知，水晶兰苷调节mtor和stat3信号通路。
48.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

技术特征：

1.水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途。2.水晶兰苷在制备心脏疾病的药物中的用途。3.水晶兰苷在制备心肌肥大的药物中的用途。4.水晶兰苷在制备心肌梗死的药物中的用途。5.水晶兰苷在制备心肌炎的药物中的用途。6.水晶兰苷在制备心肌纤维化的药物中的用途。7.根据权利要求1～6任一项所述的用途，其特征在于，所述的药物是以水晶兰苷为原料，加入医学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的制剂为口服制剂或注射制剂。

技术总结

本发明涉及一种水晶兰苷在制备心血管疾病的药物中的用途。本发明的体外实验表明水晶兰苷对H2O2引起的心肌细胞死亡、炎性反应、氧化应激均有很强的拮抗作用；同时水晶兰苷还能抑制缺氧复氧引起的心肌细胞凋亡、炎性反应以及氧化应激。体内实验表明水晶兰苷对异丙肾上腺素(ISO)引起的心肌肥大和心肌纤维化、炎症均有减弱作用。因此水晶兰苷有可能作为中药化合物应用于临床心肌肥大、心肌梗死、心肌炎以及心肌纤维化等的，具有很好的应用前景。用前景。用前景。