用于听力损失的控释配制物及其制备方法

1.本技术要求于2020年2月3日提交的韩国专利申请号10-2020-0012749的优先权，其全部内容作为本技术的参考。
2.本发明涉及用于听力损失的控释配制物及其制备方法，并且更具体而言，涉及通过将包封在低分子量透明质酸中的甾体抗炎剂分散在高分子量透明质酸的水性溶液中而制备的用于听力损失的药物控释配制物及其制备方法。

背景技术：

3.听力损失是指由于各种原因导致听力受损或听力异常而丧失的状态。耳朵由外耳(从耳廓到鼓膜)、中耳(从鼓膜到耳蜗入口)和内耳(在耳蜗内)组成，并且在这些部分中的任何一个中发生的任何问题均会导致听力损失。听力损失分为由于外耳和中耳病症引起的听力损失(传导性听力损失)和由于内耳和听觉神经系统病症引起的听力损失(感觉神经性听力损失)。然而，由于外耳和中耳病症引起的听力损失在病症得到时也会得到恢复，但是由于内耳和听觉神经系统病症引起的听力损失在许多情况下不会得到恢复，即使病症得到，从而对患者造成很大的不便。
4.迄今为止，用于听力损失的最标准方法是全身口服类固醇给药。然而，作为向健康听力损失患者进行全身类固醇给药的结果，据报道，33.0％的患者发生一种或多种全身副作用，并且约1％的患者发生严重副作用，诸如髋骨折、中毒性肝炎和死亡(min kh和suh mw，kor j audiol 2012)。
5.最近，除了全身高剂量类固醇给药之外，鼓室内类固醇注射已经用于突发性听力损失。类固醇通过鼓膜注射到鼓室中，并且预期注射的类固醇将通过位于鼓室与内耳之间的蜗窗扩散。然而，由于注射到鼓室中的药物在几十分钟内通过耳道释放，因此药物到内耳的实际递送时间短于24小时，这没有实现足够的效果。
6.同时，在韩国专利登记号10-1877894中，公开了一种通过将包封在生物相容性聚合物衍生的微球中的甾体抗炎剂分散在透明质酸水凝胶中而制备的用于听力损失的药物控释配制物。用于听力损失的药物控释配制物发挥延长甾体抗炎剂的释放期的作用，但是使用两种类型的化学修饰的透明质酸衍生物是不方便的，并且对水凝胶生产是必不可少的，并且问题在于鼓膜中的炎症是由水凝胶生产所必需涉及的交联剂引起的。
7.因此，需要一种用于听力损失的配制物，其能够减少由全身类固醇给药引起的副作用并在鼓室中递送药物足够的时间以听力损失。
8.公开
9.技术问题
10.本发明人进行了许多研究以开发能够减少由全身类固醇给药引起的副作用并在鼓室中递送药物足够的时间以听力损失的用于听力损失的配制物，结果发现通过将包封在低分子量透明质酸中的甾体抗炎剂分散在高分子量透明质酸的水性溶液中而制备的复合配制物不仅显著增加了鼓室中的药物释放期，而且没有表现出炎症反应的副作
用，然后完成了本发明。
11.因此，本发明的目的是提供一种药物控释配制物，其中包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
12.本发明的另一目的是提供一种用于预防或听力损失的药物组合物，其包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
13.本发明的另一目的是提供一种用于预防或听力损失的药物组合物，其由包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂组成，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
14.本发明的另一目的是提供一种用于预防或听力损失的药物组合物，其基本上由包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂组成，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
15.本发明的又一个目的是提供一种用于制备药物控释配制物的方法，其包括(a)将甾体抗炎剂包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中；(b)制备分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液；以及(c)将所述微球分散在所述水性溶液中。
16.本发明的另一个目的是提供包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂在制备用于听力损失的配制物中的用途，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
17.本发明的另一目的是提供一种用于通过向有需要的对象施用有效量的组合物来听力损失的方法，所述组合物包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
18.技术方案
19.为了实现本发明的目的，本发明提供了一种药物控释配制物，其中包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
20.为了实现本发明的另一目的，本发明提供了一种用于预防或听力损失的药物组合物，其包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
21.另外，本发明提供了一种用于预防或听力损失的药物组合物，其由包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂组成，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
22.另外，本发明提供了一种用于预防或听力损失的药物组合物，其基本上由包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂组成，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
23.为了实现本发明的又一个目的，本发明提供了一种用于制备药物控释配制物的方法，其包括(a)将甾体抗炎剂包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中；(b)制备分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液；以及(c)将所述微球分散在所述水
性溶液中。
24.为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂在制备用于听力损失的配制物中的用途，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
25.为了实现本发明的另一个目的，本发明提供了一种用于通过向有需要的对象施用有效量的组合物来听力损失的方法，所述组合物包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
26.在下文中，将详细描述本发明。
27.本发明提供了一种药物控释配制物，其中包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
28.在本发明中，透明质酸是线性聚合多糖，其中β-d-n-乙酰葡糖胺和β-d-葡糖醛酸交替结合。已知透明质酸不仅分布在诸如哺乳动物的皮下组织和软骨组织之类的结缔组织中，而且存在于眼睛玻璃体或脐带中，还存在于链球菌或芽孢杆菌的囊中。具有优异生物相容性的天然透明质酸不具有跨物种特异性和组织或器官特异性，并且增强皮肤的保湿力，保持皮肤弹性，并且当皮肤受损时减少对皮肤下层的损伤，并且用作润滑剂以促进胶原蛋白细胞(皮肤的主要组分)之间的移动。
29.另一方面，由于天然透明质酸在被注射至体内时被透明质酸酶快速分解，因此为了控制该分解速率，还制备和使用了通过各种方法交联或使用化学品在结构上改性的透明质酸衍生物。然而，在本发明中，透明质酸可表征为仅包括未经化学修饰的天然透明质酸或其盐。
30.在本发明中，透明质酸盐可以是透明质酸钠、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸钴、透明质酸四丁基铵或它们的组合，但不限于此。
31.在本发明中，“微球”是直径小于几微米的球形细颗粒，并且是指由于优异的生物相容性和生物可降解性而用作药物载体的颗粒。在本发明中，可以使用分子量为100,000g/mol或更低的低分子量透明质酸，优选分子量为50,000g/mol或更低的透明质酸，更优选分子量为2,000g/mol或更低的透明质酸，最优选分子量为10,000g/mol或更低的透明质酸来制备微球。
32.在本发明中，“甾体抗炎剂”是指具有甾核的有抗炎作用的药剂，例如皮质甾类，诸如地塞米松、泼尼松龙、甲泼尼龙、倍他米松、氢化可的松或它们的组合。优选地，甾体抗炎剂可以是地塞米松。
33.在本发明中，可以通过诸如相分离法、喷雾干燥法、溶剂蒸发干燥法和低温溶剂萃取法之类的已知方法制备微球。
34.根据本发明的实施方案，通过将甾体抗炎剂加入到低分子量透明质酸的水性溶液中并且随后将电解质水性溶液加入到该溶液中以诱导透明质酸与电解质之间的复合物形成来制备微球。
35.本发明的药物控释配制物可表征为上述透明质酸微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的超高分子量透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
36.超高分子量透明质酸或其盐未经化学修饰，例如未经化学官能团修饰的天然超高
分子量透明质酸，诸如透明质酸二氨基丁烷、透明质酸琥珀酰亚胺等。
37.超高分子量透明质酸的分子量可以大于5,000,000g/mol，优选大于5,100,000g/mol，更优选大于5,200,000g/mol，甚至更优选大于5,300,000g/mol，最优选大于5,400,000g/mol。
38.对超高分子量透明质酸的分子量上限没有特别限制，并且对于本领域的技术人员显而易见的是，作为天然存在于自然界中的高分子量透明质酸，分子量大于5,000,000g/mol的任何超高分子量透明质酸被应用于本发明以表现出相同的效果。超高分子量透明质酸的分子量上限可以优选为10,000,000g/mol，更优选为9,000,000g/mol，更加优选为8,000,000g/mol，最优选为7,500,000g/mol。
39.根据本发明的一个实施方案，超高分子量透明质酸可由链球菌ubc-u46(登记号kctc13556bp)菌株产生。由微生物产生的透明质酸可以参考韩国专利号10-2018-0130275来制备，该韩国专利在本发明中被引用。
40.在本发明中，透明质酸或透明质酸盐水性溶液的浓度可以由本领域的技术人员考虑到要被控制释放的甾体抗炎剂的释放时间而适当地调整，但是可以是1.0至10.0％(w/v)、优选1.5至8％(w/v)、更优选2.0至7％(w/v)、更加优选2.5至6％(w/v)、最优选3.0至5％(w/v)的透明质酸水性溶液。
41.本发明的控释配制物中的甾体抗炎剂的释放速率和释放期可通过超高分子量透明质酸水性溶液的浓度和超高分子量透明质酸的分子量来控制，并且可由本领域的技术人员根据要的靶位点、要的疾病的严重程度等来调整。
42.除了超高分子量透明质酸和水之外，超高分子量透明质酸的水性溶液不包含任何材料，诸如交联剂、固化剂、化学改性剂、脂肪酸、与透明质酸形成复合物的阳离子聚合物等。
43.交联剂是与透明质酸反应形成三维网络结构的化合物，并且可以是选自以下的至少一种化合物：诸如聚缩水甘油醚、二乙烯基砜、甲醛、三氯氧磷之类的多价环氧化合物，碳二亚胺化合物与氨基酸酯的组合，以及碳二亚胺化合物与二酰肼化合物的组合。
44.化学改性剂是与透明质酸的羧基、羟基或乙酰氨基反应形成共价键的化合物，并且可以是选自以下的至少一种化合物：乙酸酐与浓硫酸的组合，三氟乙酸酐与有机酸的组合，以及烷基碘化合物。
45.与透明质酸形成复合物的阳离子聚合物是通过透明质酸的羧基与聚合物化合物的氨基或亚氨基之间的离子键形成复合物的聚合物，并且可以是选自以下的至少一种阳离子聚合物：壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯基吡啶、聚乙烯亚胺和聚二甲氨基甲基丙烯酸乙酯。
46.在使用化学交联剂和/或固化剂制备透明质酸水凝胶的情况下，这些化学品保留在透明质酸水凝胶内部或外部载体中，从而增加诱导诸如炎症反应之类的有害反应的可能性。然而，本发明的药物控释配制物在被注射至体内后可以非常安全地表现出生理活性，因为没有向超高分子量透明质酸的水性溶液中加入化学品。
47.在本发明的一个实施方案中，超高分子量透明质酸的水性溶液可表征为天然透明质酸，其中交联不通过诸如辐射、热等之类的任何方式诱导。
48.根据本发明的实施方案，使用超高分子量透明质酸的水性溶液作为分散体的本发明的药物控释配制物在施用至鼓室中之后不会诱导任何炎症反应。然而，在配制物使用通
过利用交联剂处理透明质酸衍生物而制备的水凝胶作为分散体的情况下，证实了该配制物在施用至鼓室中之后会诱导严重的炎症反应。
49.在本发明中，在药物控释配制物中，透明质酸或透明质酸盐的微球分散在超高分子量透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中的浓度可由本领域的技术人员根据微球中包含的甾体抗炎剂的释放期、释放浓度等适当调整。例如，微球可以以0.1至5％(w/v)、优选0.5至4％(w/v)、更优选0.5至3％(w/v)、更加优选0.5至2.5％(w/v)、最优选1至2％(w/v)的浓度分散。
50.在本发明的一个实施方案中，配制物可以是控释配制物，以便在靶位点释放活物预定的时间段。配制物可释放甾体抗炎剂长达20天或更长、1个月或更长、40天或更长、2个月或更长、4个月或更长、6个月或更长、6个月至12个月、或12个月或更长。在一个实施方案中，可以根据超高分子量透明质酸的分子量或其水性溶液的浓度来调整释放期。靶位点是指对象的特定器官，并且不限于眼睛、鼻、耳朵、心脏、心室、心房、肠道、血管或关节。在一个实施方案中，靶位点可以是耳朵，并且耳朵可以包括中耳、内耳、耳蜗、前庭器官、咽鼓管或鼓室。
51.本发明提供了一种用于预防或听力损失的药物组合物，其包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
52.在本发明中，听力损失包括由老年性耳聋、抗癌药、退热药、镇痛药、抗生素等引起的耳毒性听力损失，由工业噪音、声、爆炸噪音等引起的噪音诱导的听力损失，诸如美尼尔氏病之类的创伤性听力损失，由于诸如突发性听力损失、外淋巴裂伤、迷路性震荡和颞骨骨折之类的内耳疾病引起的听力损失，以及其它根据其原因引起的听力损失。
53.在本发明的一个实施方案中，听力损失可选自噪音诱导的听力损失、耳毒性听力损失、由于内耳疾病引起的听力损失和创伤性听力损失。
54.本发明的药物组合物可以是用于在中耳、内耳、耳蜗、前庭器官、咽鼓管或鼓室中施用的组合物，优选用于在鼓室中施用的组合物。
55.根据本发明的药物组合物可以与药学上可接受的载体一起以合适的形式配制，并且可以进一步包括赋形剂或稀释剂。载体包括所有种类的溶剂、分散介质、水包油或油包水乳液、水性组合物、脂质体、微珠和微粒体。
56.药学上可接受的载体可以进一步包括例如用于口服施用的载体或用于肠胃外施用的载体。用于口服施用的载体可以包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。另外，可以包括用于口服施用的各种药物递送材料。另外，用于肠胃外施用的载体可以包括水、合适的油、盐水、含水葡萄糖、乙二醇等，并且还包括稳定剂和防腐剂。合适的稳定剂包括抗氧化剂，诸如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。除了上述成分，本发明的药物组合物还可以包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂等。其它药学上可接受的载体和配制物可以指本领域已知的那些。
57.本发明的组合物可以通过任何方法施用给包括人类在内的哺乳动物。例如，组合物可以通过肠胃外方法施用。肠胃外施用方法不限于此，但可以是静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心内、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、直肠、关节内或鼓室内施用，最
优选鼓室内施用。
58.鼓室内注射药物是将药物注射到鼓膜后的中耳和/或内耳中的方法。
59.在本发明的一个实施方案中，本发明的药物组合物可以通过经鼓膜注射而施用至中耳。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物可以经由进入内耳的非鼓室途径直接施用至内耳。
60.在本发明的一个实施方案中，药物组合物可以通过注射器和针施用，所述针穿过鼓膜并直接接近内耳的圆窗膜或卵形窗。注射器的针优选与尽可能小的针一起使用以防止鼓膜穿孔，并且可以是例如22规格至24规格。
61.本发明的药物组合物可以根据如上所述的施用途径而配制成用于口服施用或肠胃外施用的配制物。
62.在用于口服施用的配制物的情况下，可以使用本领域已知的方法将本发明的组合物配制成粉末、颗粒、片剂、丸剂、糖衣片剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等。例如，口服配制物可以通过将活性成分与固体赋形剂混合、将混合物粉碎、加入合适的佐剂、然后将混合物加工成颗粒混合物来获得片剂或糖衣片剂。合适的赋形剂的示例可以包括：糖，包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇和麦芽糖醇；淀粉，包括玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素；填充剂，诸如明胶、聚乙烯吡咯烷酮等。另外，在一些情况下，可以加入交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或藻酸钠作为崩解剂。另外，药物组合物还可以包括抗凝剂、润滑剂、润湿剂、调味剂、乳化剂和防腐剂。
63.用于肠胃外施用的配制物可以通过本领域已知的方法配制成注射剂、乳膏剂、洗剂、外用软膏剂、油剂、保湿剂、凝胶剂、气雾剂和鼻吸入剂的形式。这些配制物描述于所有药物化学中通常已知的药方中。
64.本发明组合物的总有效剂量可以以单剂量施用给患者，或可以根据分次方案以多剂量长期施用。在本发明的药物组合物中，活性成分的含量可以根据疾病的严重程度而变化。优选地，本发明的药物组合物的优选总剂量可以是每天每1kg患者体重约0.01g至10,000mg，最优选0.1g至500mg。然而，除了药物组合物的施用途径和次数之外，还通过考虑各种因素来确定药物组合物的剂量，这些因素包括患者的年龄、体重、健康状况和性别，疾病的严重程度，饮食和排泄率。考虑到这一方面，本领域的技术人员可以确定本发明组合物的合适有效剂量。根据本发明的药物组合物不特别限于配制物、施用途径和施用方法，只要显示出本发明的效果即可。
65.在本发明的一个实施方案中，药物组合物可在听力损失发作之前或之后或在听力损失发作期间施用。剂量可以根据施用方法、持续时间、要的患者的状况和听力损失的严重程度而变化，并且由主治医生确定。的持续时间可以是约1小时至数天、数周或数月的范围，并且如果需要，可以是较长时间。
66.如本文所用的术语“预防”是指保护疾病或病症的发作使得疾病的临床症状不会发展的疗法。因此，“预防”是指在对象中可检测到疾病症状之前向对象施用疗法(例如，施用剂)(例如，在对象中不存在可检测的感染剂(例如，病毒)的情况下向对象施用材料)。对象可以是处于发展疾病或病症的风险中的个体，诸如具有已知与疾病或病症的发展或发作相关联的一种或多种风险因素的个体。
67.在本发明中，术语“”是指用于获得有益的或期望的临床结果的方法。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括症状的非限制性减轻、疾病范围的减小、疾病状况的稳定(即，不恶化)、疾病进展的延迟或降低的速率、疾病状况的改善或暂时减轻和减少(其可以是部分的或全部的)、以及它是可检测的还是不可检测的。“”是指所有性和预防性或防御措施。包括已经发生的病症以及要预防的病症所需的。疾病的“减轻”是指与没有相比，疾病状况和/或不期望的临床症状的范围减少或进展的时间过程延迟或延长。
68.同时，对于本领域的技术人员显而易见的是，本发明的药物组合物可以进一步包括用于听力损失的已知材料。
69.本发明提供了一种用于制备药物控释配制物的方法，其包括(a)将甾体抗炎剂包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中；(b)制备分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液；以及(c)将所述微球分散在所述水性溶液中。
70.本发明还提供了包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂在制备用于听力损失的配制物中的用途，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
71.本发明还提供了一种用于通过向有需要的对象施用有效量的组合物来听力损失的方法，所述组合物包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。
72.本发明的“有效剂量”是指当施用于对象时表现出改善、、检测和诊断听力损失或抑制或减少听力损失的效果的量。“对象”可以是动物，优选哺乳动物，特别是包括人类在内的动物，并且还可以是来源于动物的细胞、组织和器官。个体可以是需要效果的患者。
73.本发明的“”全面地指改善听力损失或由听力损失引起的症状，并且可以包括或基本上预防疾病或改善其病症，并且包括减轻、或预防由疾病引起的症状或大多数症状，但不限于此。
74.本文所用的术语“包含”以与“包括”或“特征在于”相同的含义使用，并且不排除在根据本发明的组合物或方法中未具体提及的另外的成分或方法步骤。除非另外描述，否则术语“由
…
组成”是指排除另外的元件、步骤或成分等。术语“基本上由
…
组成”是指在组合物或方法的范围内，除了所描述的材料或步骤之外，还包括基本上不影响其基本性质的材料或步骤。
75.有利效果
76.根据本发明，由于包含超高分子量透明质酸的水性溶液作为药物载体的用于听力损失的药物控释配制物和药物组合物可以以单一剂量显示效果数周至数月，因此可以有效地疾病而无需重复程序，且不会引起全身性副作用。另外，由于在本发明的药物控释配制物中不使用用于交联透明质酸的化学交联剂，因此诸如炎症反应之类的副作用的风险非常低。
附图说明
77.图1是示出用于在听力损失诱导的动物模型中评估听力改善测试的测试计划表的
图。
78.图2是通过ct扫描评估药物/载体在动物的鼓室中的保留期的结果。
79.图3是观察在药物/载体随时间注射到鼓膜中期间发生的恢复鼓膜穿孔的过程的图。
80.图4是观察在施用根据本发明的药物/载体(sureden)之后是否随时间在动物的鼓膜中发生炎症的图。
81.图5是评估听力损失的动物模型中的听力改善效果的结果(su02+d：根据本发明的药物/载体)。
82.图6是示出将现有技术的药物/载体注射到听力损失动物模型的鼓膜中的实验方法的示意图。
83.图7是评估在将现有技术的药物/载体注射到听力损失动物模型的鼓膜中之后炎症程度的结果。
84.图8是在将通过将造影剂与重均分子量为7,000,000g/mol的透明质酸的水性溶液混合而获得的载体(surden01+马根维显)和通过将造影剂与分子量为1,000,000至3,000,000g/mol的透明质酸的水性溶液混合而获得的载体(低粘度载体+马根维显)施用至大鼠的鼓膜中之后，随时间用9.4t mri观察对比效果的图。
85.图9是示出在图8的实验过程期间随时间在大鼠鼓膜中的每个位置处的造影剂量的量化的图。
86.用于本发明的方法
87.在下文中，将通过以下实施例详细描述本发明。然而，以下实施例仅仅是对本发明的说明，本发明的内容不限于以下实施例。
88.实施例1：使用超低分子量透明质酸制备地塞米松微胶囊
89.在超纯水中制备含有20％的分子量小于10,000da的超低分子量透明质酸的水性溶液，并将2.4％的地塞米松磷酸二钠完全溶解于其中。
90.将制备的透明质酸－地塞米松水性溶液与浓度为10％的cacl2(含有ca
2+
的离子化合物)水性溶液以1：1(v/v)的比例混合以诱导透明质酸与cacl2之间的离子复合物(沉淀)。此后，将沉淀物以12,000rpm离心1分钟以除去上清液。另外，为了除去不参与离子复合物的游离离子，使用过量的超纯水进行洗涤和离心过程三次或更多次。
91.将离子复合的药物混合物冻干以制备包封在超低分子量透明质酸中的地塞米松。
92.实施例2：制备包封的地塞米松/透明质酸水凝胶复合物(surden；缓释药物包封)
93.在制备具有粘附性、在鼓室中具有体内稳定性和作为包封的地塞米松的载体具有优异生物相容性的超高分子量透明质酸之后，使用超高分子量透明质酸制备微胶囊地塞米松/透明质酸复合物。
94.根据在先前专利(kr1020180130275)中规定的生产方法使用链球菌ubc-u46菌株(登记号：kctc13556bp)来制备超高分子量透明质酸。
95.根据该方法制备的超高分子量透明质酸的重均分子量为7,000,000g/mol。
96.将超高分子量透明质酸溶解在超纯水中以制备浓度为3％的超高分子量透明质酸的水性溶液。将实施例1中制备的包封在超低分子量透明质酸中的地塞米松粉末加入到超高分子量透明质酸水性溶液中至1.5％的浓度，并使用均化器均匀混合以制备微囊地塞米
松/透明质酸水凝胶复合物(surden)，其中包封在超低分子量透明质酸中的地塞米松被均匀混合。
97.实施例3：药物载体保留期和药物释放性能的评估
98.为了评估实施例2中制备的复合物(surden)作为药物载体的性能，制作听力损失动物模型并进行以下实验。
99.(1)听力损失动物模型的制作
100.为了排除激素作用，使用雄性sd大鼠进行实验。为了诱导耳毒性听力损失，在it接种后第4天，将顺铂(2mg/kg)、庆大霉素(120mg/kg)和呋塞米(90mg/kg)的组合药物每天一次注射到尾颈静脉中，持续2天。
101.(2)实验设计
102.使用鼓室内(it)药物递送方法通过两种不同的方法将地塞米松(d)施用至动物，所述it药物递送方法通过鼓膜递送药物。
103.第一种方法是在现有医院中使用的方法，以及将12mg/ml的d递送到盐水中的方法。第二种方法是将12mg/ml的d递送到上述实施例2中制备的surden中的方法。作为对照，准备没有的听力损失对照组。按照0.04ml/动物(每只耳朵)施用如上所述制备的每个样品。图1示出了具体的实验计划表。
104.(3)听力测量
105.在诱导听力损失之前和之后约2个月内每隔1至14天测量听力。在总共四种频率(点击、8khz、16khz以及32khz)下进行听觉脑干反应(abr)测试，以评估每个频率的特性。
106.(4)药物载体保留期的评估
107.在图1的实验计划表中所指示的ct扫描时间确认的药物/载体在动物鼓室中的保留期在盐水+d的情况下为1.1
±
0.3天，而在surden的情况下为41.1
±
27.0天。即，证实了当使用surden时，药物/载体的保留期可以比盐水的保留期长约40倍(图2)。
108.(5)药物载体的安全性评估
109.作为定期拍摄鼓膜内窥镜的结果，在盐水+d组中鼓膜穿孔在21.6
±
12.6天之后完全阻断。在serden+d组的情况下，鼓膜穿孔在16.7
±
11.9天之后完全阻断。即，当使用surden时，由于鼓膜穿孔愈合的时间段相当短或至少不长，因此证实了能够进行而没有副作用(图3)。
110.另外，作为观察鼓膜内窥镜的结果，对象没有因sursen施用而发生中耳炎症。当药物/载体不是生物相容的时发生中耳炎症(图4)，并且在本发明的药物/载体复合物(surden)的情况下，由于没有炎症副作用，因此确定药物/载体复合物(surden)可以成功地用于人体中。
111.实施例4：听力改善评估
112.在surden的情况下，从基于32khz诱导听力损失的第一天(46.7db)开始，与盐水+d(70.0db)或对照组(62.9db)相比，听力开始得到改善，并且这种趋势良好地维持到4天(46.7db)、8天(52.5db)、12天(47.5db)、21天(46.7db)和30天(50.0db)。与现有标准方法盐水+d相比，通过serden的效果好23.3db至26.7db。通常，考虑到临床显著听力差异为15db，好23.3db至26.7db的效果是临床显著差异。
113.即使在16khz的中频也观察到该差异。与现有标准方法盐水+d相比，serden的
效果好16.8db至23.3db。考虑到临床显著听力差异为15db，在16khz下好16.8db至23.3db的效果是临床显著差异。
114.即使在最低频率8khz下，在surden中效果也是最佳的。与现有标准方法盐水+d相比，通过serden的效果好1.7db至10.8db(图5)。
115.综合结果，证实了surden的听力损失效果明显优于现有标准方法盐水+d的听力损失效果。
116.实施例5：炎症反应的确认
117.本发明人将根据本发明的方法是否在内耳中诱导炎症反应与现有注册专利(10-1877894)中公开的方法进行了比较。
118.首先，在正常听力的大鼠中由噪音引起的诱导听力损失之后，根据先前注册专利中公开的方法将大鼠分成图6中所示的三组((1)地塞米松+盐水(d+盐水)，(2)地塞米松+igf-1+盐水(d&amp；g+盐水)，(3)装载地塞米松的lga微胶囊+igf-1+ha(cd&amp；g+ha))，然后将每种药物注射到鼓膜中，并且进行听力测试、鼓膜内窥镜和ct扫描达45天。
119.另外，以与上述相同的方式对根据本发明的surden施用组进行实验。
120.其结果如图7所示。
121.如图8所示，当计算每一组相对于在通过鼓膜注射药物后在中耳组织中引起炎症反应的对象的比率时，装载地塞米松的plga微胶囊+igf-1+ha组中的炎症比率为42.3％，这比其它组高两倍。
122.另一方面，在surden施用组中没有观察到炎症反应(结果中未显示)。
123.实施例6：根据透明质酸分子量的控释能力和听力损失效果的比较
124.为了对比地评估根据实施例2中使用的超高分子量透明质酸的分子量的控释效果，对比地评估了使用具有比用于制备实施例2中的surden的超高分子量(重均分子量7,000,000g/mol)相对较低的分子量(1,000,000至3,000,000g/mol)的透明质酸的载体的控释能力。
125.具体而言，将造影剂加入到重均分子量为7,000,000g/mol的透明质酸水性溶液(surden)或分子量为1,000,000至3,000,000g/mol的透明质酸水性溶液(低粘度载体)中，并将这些样品中的每一个注射到大鼠的鼓膜中，然后使用9.4t mri拍照并进行定量分析。
126.其结果如图9和图10所示。
127.如图9所示，证实了对比强度在前庭系统和鼓膜系统中增加，并且证实了surden施用组在所有时间点和所有区域显示出比低粘度载体组更强的协同效应。
128.另外，如图10所示，作为定量的结果，证实了surden施用组在耳蜗的下层、中层和上层中的信号强度都高于低粘度载体组的信号强度。
129.总之，在surden的情况下，证实了与使用相对低分子量的透明质酸的载体相比，通过将药物以更高的浓度维持更长的时间段和更大的量，药物释放能力在内耳药物递送中是优异的。
130.工业实用性
131.根据本发明，由于包含超高分子量透明质酸的水性溶液作为药物载体的用于听力损失的药物控释配制物和药物组合物可以以单一剂量显示效果数周至数月，因此可以有效地疾病而无需重复程序，且不会引起全身性副作用。另外，由于在本发明的药
物控释配制物中不使用用于交联透明质酸的化学交联剂，因此诸如炎症反应之类的副作用的风险非常低，并且因此工业实用性非常高。

技术特征：

1.一种药物控释配制物，其中包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。2.权利要求1的药物控释配制物，其中形成所述微球的所述透明质酸具有100,000g/mol或更低的分子量。3.权利要求1的药物控释配制物，其中所述甾体抗炎剂是地塞米松、泼尼松龙、甲泼尼龙、倍他米松、氢化可的松或它们的组合。4.权利要求1的药物控释配制物，其中所述分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸是由链球菌(streptococcus sp)ubc-u46(登记号kctc13556bp)菌株产生。5.权利要求1的药物控释配制物，其中所述药物控释配制物在靶位点释放所述甾体抗炎剂20天或更长。6.权利要求1的药物控释配制物，其中所述透明质酸或透明质酸盐的水性溶液是1至10％(w/v)的水性溶液。7.权利要求1的药物控释配制物，其中所述配制物是用于施用至中耳、内耳、耳蜗、前庭器官、咽鼓管或鼓室中的配制物。8.一种用于预防或听力损失的药物组合物，其包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。9.权利要求8的药物组合物，其中所述药物组合物被注射至中耳、内耳、耳蜗、前庭器官、咽鼓管或鼓室中。10.权利要求8的药物组合物，其中所述听力损失选自噪音诱导的听力损失、耳毒性听力损失、由于内耳疾病引起的听力损失和创伤性听力损失。11.一种用于制备根据权利要求1至7中任一项的药物控释配制物的方法，包括以下步骤：(a)将甾体抗炎剂包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中；(b)制备分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液；以及(c)将所述微球分散在所述水性溶液中。12.包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂在制备用于听力损失的配制物中的用途，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。13.一种通过向有需要的对象施用有效量的组合物来听力损失的方法，所述组合物包含包封在透明质酸或透明质酸盐的微球中的甾体抗炎剂作为活性成分，其中所述微球分散在分子量大于5,000,000g/mol的透明质酸或透明质酸盐的水性溶液中。

技术总结

本发明涉及用于听力损失的控释配制物及其制备方法，并且更具体而言，涉及通过将包封在低分子量透明质酸中的甾体抗炎剂分散在高分子量透明质酸的水性溶液中而制备的用于听力损失的药物控释配制物及其制备方法。法。法。

技术研发人员：

姜大中 安光珉 徐明焕 李惠 黄瑜晶

受保护的技术使用者：

首尔大学医院

技术研发日：

2021.01.29

技术公布日：

2022/12/1