第一篇：实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
合成洗涤剂了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。
二、实验器具及试剂 1．器具
普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。2．试剂
M-缓冲液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇双醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)；（PH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH值）；Triton X-100，用M-缓冲液配制；考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶等。3.实验材料 洋葱鳞茎 三、实验内容
细胞骨架事由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可经细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。
（一）溶液配制（1）M-缓冲液配制：
M-缓冲液(10×原液)：咪唑34.04g，氯化镁(MgCl2•6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇双醚四乙酸）3.8g，EDTA(乙二胺四乙酸)0.29g，巯基乙醇0.78g(0.7ml)蒸馏水加至1 000 ml。使用时，取100 ml(10×原液)加900 ml蒸馏水。（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸缓冲液配制： 甲液：NaH2PO4•2H2O，0.938g 溶于蒸馏水中，最后稀释至1 000ml。乙液：Na2HPO4 •12H2O，2.15g加蒸馏水溶解，最后加水至1 000ml。取甲液685ml，乙液315ml加蒸馏水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸缓冲液。
（3）1%Triton X-100，用M-缓冲液配制： 取22ml Triton X-100液加M-缓冲液至200ml。（4）0.2%考马斯亮蓝R250：
考马斯亮蓝R250为0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml（5）3%戍二醛，用磷酸缓冲液配制。
（二）实验方法与步骤
（1）撕取洋葱鳞茎内表皮（约1cm2大小若干片）置于装有PH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
（2）吸去磷酸缓冲液，用1% Triton X-100处理20~30min。（3）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次10min。（4）3%戊二醛固定0.5~1h。
（5）PH6.5磷酸缓冲液洗三次，每次10min。（6）0.2%考马斯亮蓝R250染20~30min。
（7）用蒸馏水洗1~2次，细胞置于载破片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
（8）如观察效果好，可制作成永久切片。
在有样品的50ml烧杯中，顺序通过如下药物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每级5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每级5-10min），然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好的，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片，即成永久片。
四、实验报告
1．绘出植物细胞骨架微丝结构图。
2．分析在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。
第二篇：实验三 细胞骨架的光学显微镜观察
实验三
细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
二、材料、试剂和仪器
1． 材料
新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞
2． 试剂
1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：
50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:20
3.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)
2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:
KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(见附录3 查磷酸缓冲液的配置)
3）0.7% NaCl生理盐水
4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-缓冲液
5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
橡胶软化油6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:
考马斯亮蓝R250 0.2g，甲醇 46.5mL，冰乙酸 7mL，蒸馏水46.5 mL
3．仪器烯合金
光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心
管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染缸 细胞骨架动画
三、实验程序
四、结果与分析
洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）
五、思考题
1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？
2．对实验成功或失败的原因进行讨论。
实验中的注意事项和关键步骤
第三篇：实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的：
掌握植物细胞骨架处理及染方法。
二、实验原理：
用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验试剂：
1、M-缓冲液；
2、pH6.8磷酸缓冲液； 3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制； 4、0.2%考马斯亮兰R250； 5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；
四、实验步骤：
1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中使其下沉(约1-2min)；
2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；
3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次5min； 4、3%戊二醛固定30min；
5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次5min； 6、0.2%考马斯亮蓝R250染10min；
7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
五、实验结果：
影像处理
在光学显微镜下，可以清晰的看到细胞骨架呈淡蓝。
六、分析与讨论：
1、洋葱表皮细胞中，质膜下，核周，胞质中的细胞骨架的分布有无不同？ 答: 核周细胞骨架分布紧密，向外基质出延伸时明显变得稀疏，质膜下维持细胞的外部形态。因此显微镜下看到的细胞骨架形态基本与细胞形态相似。胞质中细胞骨架呈现纤维状向质膜发射，质膜处的细胞骨架围成细胞固有形态。
2、为什么试验中所看到的洋葱表皮细胞中细胞骨架有的成纤维状，有的成串球状？
答: 细胞骨架有运输细胞内物质的作用，细胞内物质沿着细胞骨架的通路进行运输，因此细胞骨架成串珠状可能是由于被运输物质停留在纤维的某一位置上使纤维状的细胞骨架成串珠状。
第四篇：实验二、植物细胞骨架的观察
实验
二、植物细胞骨架的观察镭射打印
直接染料一、实验目的
观察植物细胞内网状的骨架结构。
二、实验原理
在真核细胞的细胞质中，存在着由蛋白质纤维构成的网状骨架系统。Triton X-100是非离子去垢剂，用适当浓度的Triton X-100处理细胞，可将细胞的膜成分抽提掉，由于失去膜的保护和维系作用，细胞内其他可溶性成分也随之流失，这样一来水不溶性的细胞骨架系统蛋
白质却被保留下来，而这被保留下来的蛋白质用考马斯亮蓝R250染，便可在光学显微镜下观察它们——细胞骨架的网状结构。为了更好地观察微丝束的结构，采用了戊二醛对细胞进行固定。戊二醛是一种双交联剂，渗透快，交联能力强，对蛋白质的固定效果好，且不破坏细胞骨架的结构。M-缓冲液洗涤细胞,可以提高细胞骨架的稳定性。M－缓冲液和磷酸缓冲液作用都是维持细胞的渗透压
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