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高效液相谱法测定枸杞中的黄曲霉毒素

第12期(总第517期) 2020年12月

农产品加工

Farm Products Processing

No.12

Dec.

文章编号：1671-9646(2020)12a-0054-03

高效液相谱法测定枸杞中的黄曲霉毒素

李单单，贺金涛

(河南进口肉类指定口岸漯河查验区服务中心，河南漯河462000)

摘要：建立高效液相谱法-柱后光化学衍生检测枸杞中黄曲霉毒素B[,B?,G1,G2的含量。样品以体积分数为70%的甲醇水溶液提取，经免疫亲和柱净化，通过高效液相谱-柱后光化学衍生法检测样品含量。结果表明，在该谱条件下4种黄曲霉毒素的标曲线性R2均大于0.9999，回收率89.1%~98.8%，黄曲霉

毒素B〔，B?,G】，G?的检出限分别为0.03,0.01，0.03,0.01|±g/kg；黄曲霉毒素B】，B：,Gi,G：的定量限分别为0.10,0.03,0.10,0.03^g/kg o 该方法操作简单、回收率高、结果可靠，适用于枸杞中黄曲霉毒素的检验。

关键词：黄曲霉毒素；枸杞；高效液相谱；柱后衍生

中图分类号：TS207.5文献标志码：A doi：10.16693/jki.1671-9646(X).2020.12.016

Determination of Aflatoxin in Lycium barbarum by HPLC

LI Dandan,HE Jintao

(He'nan Designated Meat Import Port，Luohe Inspection Area Service Center，Luohe，He'nan462000，China) Abstract：To establish a HPLC method for the determination of aflatoxin B],B2，G1，G2in Lycium barbarum L.The sample was extracted with70%methanol solution，purified by immunoaffinity column，and detected by HPLC with post column photochemical derivatization.Under the chromatographic conditions，the standard curve linear R2of the four aflatoxins were all greater than0.9999，and the recoveries were89.1%~98.8%.The detection limits of aflatoxins B1，B2，G1and G2were0.03，0.01，

0.03and0.01|Jig/kg，respectively.The limits of quantification of aflatoxins B1，B2，G1and G2were0.10，0.03，0.10and

0.03w g/kg,respectively.The method was simple，with high recovery and reliable results.It was suitable for the determination of

aflatoxin in Lycium barbarum.

Keywords：Aflatoxin；Lycium barbarum；HPLC；post column derivatization

黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢咲喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)寄生曲霉(A. Parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中岀现黄曲霉毒素的几率最高。其具有高毒性和致癌性，1993年被世界卫生组织癌症研究机构划定为I类致癌物[1-3]o黄曲霉毒素常以AFTB1，AFTB2，AFTG1，AFTG24种形式存在，其中AFTB1的毒性最强叫黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免，2017年最新颁布的国家食品安全标准《食品中真菌毒素限量》规定了玉米、玉米面(渣、片)、玉米制品、花生及其制品、花生油、玉米油中AFTB1的最高限量为20wg/kg，稻谷、糙米、大米、植物油脂(花生油、玉米油除外)中AFTB1的最高限量为10wg/kg，小麦、大麦、其他谷物、小麦粉、麦片、其他去壳谷物、发酵豆制品、其他熟制坚果及籽类、酱油、醋、酿造酱中AFTB1的最高限量为5.0wg/kgo人们经常使用高效液相谱法检测试样中的黄曲霉毒素，

能同时对样品中的黄曲霉毒素种类进行定性、定量分析，具有快速、高效、灵敏、定量准确等优点，在黄曲霉毒素检测方面发挥着重要的作用，已经成为检测黄曲霉毒素的主要方法[5-7]o 枸杞兼具多种医疗保健功效，是卫生部批准的药食两用食物，能够增强非特异性免疫功能、提高抗病能力，还具有抗衰老、抗疲劳、抗辐射损伤、调节血脂、降血糖、降血压、养肝、滋肾、润肺等多种保健功效。

1材料与方法

1.1仪器与材料

安捷伦1200型高效液相谱仪，美国安捷伦科技有限公司产品；配荧光检测器G1321A，Cloversil Myco-C18谱柱(4.6mm x150mm，5w m)；Aura 光化学衍生器PHRED，美国Aura产品；黄曲霉毒素

草甘膦母液

收稿日期：2020-08-28

作者简介：李单单(1986—)，女，本科，工程师，研究方向为食品检测。

2020年第12期

李单单，等：高效液相谱法测定枸杞中的黄曲霉毒素・55・

总量免疫亲和柱，北京勤邦生物技术有限公司产品；科乐福12位泵流操作架；ML204T 型电子分析天平，梅特勒-托利多仪器上海有限公司产品；多位涡旋振荡器、超声波清洗器，中国昆山舒美产品；0.22 “m 有机滤膜，天津津腾公司产品。

黄曲霉毒素混合标准物质[Pribolab]；甲醇（谱纯），美国Fisher 提供；试验用水为Milli-Q Advan tage A10超纯水，美国Millipore 公司提供；氯化钠（分析纯），天津市科密欧化学试剂有限公司提供；玻璃纤维滤膜90 mm 。1.2试验方法

1.2.1标准曲线的绘制

将黄曲霉毒素混标用体积分数45%的甲醇溶液稀释成7个不同质量浓度的标准系列工作液，以此建立标准曲线。其中，AFTB 1的系列质量浓度分别为 1，4，8， 10，20, 40，50 ng/mL ； AFTB 2 的系列质量浓度为 0.26, 1.04， 2.08，2.60，5.20，10.40，13.00 ng/mL ； AFTG 1的系列质量浓度为1.2，4.8， 9.6，12.0，24.0， 48.0，60.0 ng/mL ； AFTG 2 的系列质量浓度为 0.25， 1.00， 2.00， 2.50， 5.00， 10.00，12.50 ng/mL o 用液相谱仪对该系列标准溶液进行上机检测，建立标准工作曲线。

1.2.2液相谱条件

液相谱柱:Cloversil Myco-C 18 柱（4.6 mm x 150 mm , 5 ”m ）；谱柱柱温40 °C ；流动相：甲

医用呼叫器

醇：水=45 ： 55，流速 0.8 mL/min ，进样量 80 “L ；荧光检测器：激发波长360 nm ，发射波长440 nm 。

1.2.3 样品前处理

准确称样（4.000 g ）— 加入氯化钠（1.0 g ）—＞准确加入20 mL 甲醇-水（70： 30）—振荡混匀（20 min ） ——超声提取（20 min ）—离心（8 000 r/min ， 5 min ）—— 取上清液（10 mL ）—加入超纯水（30 mL ）—涡旋混匀—过玻璃纤维滤纸—准确取20 mL 液体—过免疫亲和柱—亲和柱中加入10 mLx2超纯水（最后把水抽干）—甲醇洗脱（1.0 mL ）—水冲洗（1.0 mL ），甲醇和水收集到一起—过有机滤膜—高效液相谱分析。

2结果与分析2.1线性关系

在122条件下对121系列标准品进行测定，

以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程。

黄曲霉毒素B 1，B 2，G 1，G 2的线性回归方程、相关系数、线性范围见表1，黄曲霉毒素B 1，B 2, G 1，G 2线性范围见图1o

表1 黄曲霉毒素B “ B 2, G “ G 2的线性回归方程、