(本法参照GB/T 5009·22-2003)
一、原理
样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。 二、试剂
（AR）
正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）
甲醇（AR）
苯 （AR）
乙腈 （AR）
无水乙醚 （AR）
丙酮 （AR）
（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层谱测定无干扰）
甲醇-水（55:45）混合溶液
三氟乙酸（AR）
氯化钠 （AR）
无水硫酸钠（AR）
硅胶G （薄层谱用）
5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。
黄曲霉毒素B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。（在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为19800，可根据朗伯-比尔定律求出其浓度）。
黄曲霉毒素B1标准应用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素B1标准贮备液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。
黄曲霉毒素B1标准应用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。
黄曲霉毒素B1标准应用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。
三、主要仪器
玻璃板：5×20cm
涂布器
谱展开槽（25×6×4cm）
紫外光灯：100-125W，带有波长365nm滤光片
微量注射器：20uL,10uL各一支
四、操作步骤
1、样品预处理
称取4g混匀的花生油样品于小烧杯中，用20mL石油醚或正己烷，将其转移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇2分钟，静止分层后，将下层甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重复提取一次，提取
液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入20mL，振摇2分钟，静止分层后，放出层，经盛有约10g先用湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，分液漏斗中再加5mL提取一次，层一并滤入蒸发皿中，最后用少量洗过滤器，洗液并入蒸发皿中。在通风柜中，将蒸发皿于65℃水浴上挥干，然后放入冰盒上泠却2-3分钟，准确加入1mL苯-乙腈混合液，用带橡皮头滴管的管尖将残渣充分混合，若有结晶析出，将蒸发皿取下，继续溶解、混匀，晶体消失后用滴管吸取上清液转移于2mL具塞试管中。
2、样品测定
1>薄层板的制备
称取约3g硅胶G，加相当于硅胶量的2-3倍左右的水，用力研磨1-2分钟，至成糊状后立即倒入涂布器内，推铺成5×20cm减温减压装置撬装重心、厚度为0.25 mm的薄层板三块。于空气中干燥约15分钟后，在100℃下活化2小时，取出放入干燥器中保存。
2>点样
将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板底端3cm的基线上用微量注射器滴加样液和标准液： 第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1 标液
第二点：20uL样液
第三点：20uL 样液 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1 标液
第四点：20uL 样液 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1 标液
要求点距边缘和点间距约为1cm,样点直径约3cm,大小相同，点样时可用电吹风冷风边吹边点。密码文具盒
3>展开
在展开槽内加10mL无水乙醚，将点好样的薄层板预展12cm，取出挥干。再于另一展开槽内加10mL 丙酮+（8+92）混合溶剂，展开10-12cm，取出挥干。
4>结果观察
将展开好的薄板放在365nm的紫外灯光下观察：a.若第一点无荧光或都无荧光。说明薄板或展开剂未制备好，需重新制备。b.第一点有荧光，而其余三点无荧光。说明样液中有荧光猝灭剂，样液需重新制备。c.第一点有荧光，第二点无荧光，三、四点有荧光。说明样液不含AFT B1或含量小于最低检出量。d.四个点都有荧光。需做确证实验后再进行定量。
5>确证实验
于另一薄板上左边依次点二个样：
第一点：10uL0.04ug/mL AFT B1标液
第二点：20uL样液
在以上两点各加一小滴三氟乙酸（TFA），待反应5分钟后，用电吹风热风2分钟，使温度不高于40
℃。
再于薄层板的右边点以下二个点：
第三点：10uL 0.04ug/L AFT B1 标液
第四点：20uL样液
同第3>步展开后，于紫外光下观察样液是否产生与AFT B1标准点相同的衍生物AFT B2a ,未加TFA的第三、四点作空白对照。
6>稀释定量
若第二点的荧光强度比第一点强，则根据其强度估计减少点样体积，于另一薄板上点四个点：
实时调试
第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1标液
第二点：10uL 样液
有源带通滤波器
第三点：15uL 样液
第四点：20uL 样液
展开后取荧光强度与第一点相同的样点进行计算。
五、计算
V1 × D
X = 0.0004 × ————
V真空集热管2 × m
X ——样品中AFT B1 的含量ug/kg(ppb)
V1——稀释前样液的总体积mL
V2——出现同等荧光强度的稀释后样液点样量uL
D ——样液的稀释倍数
（注：本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。请预览后才下载，期待您的好评与关注！）
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