A
一、填空（20分，每格0.5分）
2、竞争性抑制剂对酶促反应速度影响是Km 增大 ，Vmax 不变 。
3、在各种蛋白质中含量相近的元素是 氮 。
4、核酸中核苷酸之间的连接方式是 3’，5’－磷酸二酯键 。
5、蛋白质分子中的无规则卷曲结构属于 二级 结构。 6、蛋白质的一级结构是指 蛋白质中氨基酸的排列顺序 。
7、米氏方程为：
8、某一溶液中蛋白质的百分含量为水箅55％时，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为8.8％
9、组成蛋白质的氨基酸有 20 种，它们的结构通式为：。它们在结构上彼此不同的部分是 R基团 。
10、生物膜由： 脂质 、 膜蛋白 、 糖类 、 水 、 金属离子 组成。
11、酶促反应速度(v)是最大速度(Vmax)80％时，底物浓度S是Km的 4 倍；当v达到Vmax的90％时，杀螺剂S是Km的 9 倍。
12、生物体由 水 、 无机离子 和 生物分子 组成，组成生物体的最基本元素是： C 、 H 、 O 、 N 。
13、1分子软脂酸完全氧化净生成 129 个ATP。
14、天冬氨酸的pI为2.98，在pH 5的溶液中它带 负 电荷，在电场中向 正极移动。
15、具有紫外吸收能力的氨基酸有 苯丙氨酸 、 氨酸 、 酪氨酸 ，一般最大光吸收在 280 nm波长处。
16、蛋白质颗粒在电场中移动，移动的速率主要取决于 蛋白质的表面电荷量 和 分子量 ，这种分离蛋白质的方法称为 电泳 。 17、多肽链中氨基酸的 排列顺序 ，称为一级结构，主要化学键为 肽键 。
18、一组蛋白质相对分子质量分别为：a(90 000)、b(45 000)、c(110 000)，用凝胶过滤法分离这种蛋白质时，它们洗脱下来的先后顺序是 c、a、b 。 19、若使酶促反应速度达到最大速度的90%，此时底物浓度应是此酶Km值的 9 倍。
二、名词解释（27分）
1、核酸的组成。（4分）
2、真核细胞的特点。(4分)
外层为细胞膜（植物有细胞壁）内部有细胞质，细胞质结构复杂有许多细胞器；有真正的核。
3、肽、多肽、氨基酸残基。（6分）
一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失水形成的酰氨键称为肽键，所形成的化合物称为肽。
多肽：由多个氨基酸组成的肽。
氨基酸残基：组成多肽的氨基酸单元。
4、辅酶。（3分）
某些小分子有机化合物与酶蛋白结合在一起并协同实施催化作用。
5、光合磷酸化、氧化磷酸化。（4分）
光合磷酸化：由太阳能提供能量合成ATP的过程
氧化磷酸化：由食物分子氧化分解提供化学能合成ATP的过程
6、激素。（3分）
由特定细胞产生，通过体液运送到距离激素分泌处较远的身体的其它部位，作用于靶细胞，起调节作用的一类微量化学物质的总称。
7、构成蛋白质、核酸、脂、糖的结构单元分子。（3分，每个要点0.5分）
20种基本氨基酸；核苷酸；甘油、脂肪酸、胆碱；单糖
三、问答题（53分）
1、（1）写出下列分子的前手性面（re-face或si-face）。（4分）
CH3COCH2Cl C2H5CHO ClCH=CHCH冷冻机油基础油3
Re Re Si Re
（2）写出生物分子中主要基团的结构（咪唑基、嘌呤基、
嘧啶基）。（3分）
2、举例说明氨基酸的邻基反应。（以Asn与Gly相邻为例）（6分）
3、氨对生物机体是有毒物质，特别是对高等动物的脑细胞影响最大。因此，人和哺乳动物细胞中产生的氨不能直接由血液输送。解释氨在生物体内是如何运输的。（8分）
答：（1）组织细胞
组织细胞内反应
肝脏细胞内反应
（2）肌肉细胞
肌肉细胞内反应
肝脏细胞内反应
4、写出三羧酸循环中的氧化反应。（8分）
异柠檬酸 α－酮戊二酸
α－酮戊二酸 琥珀酰CoA
琥珀酸 延胡索酸
苹果酸 草酰乙酸
5、某肽经CNBr水解得到三个肽段，这三个肽的结构分别是：Asn-Trp-Gly-Met，Gly-Ala-Leu，Ala-Arg-Tyr-Asn-Met；用胰凝乳蛋白酶水解此肽也得到三个肽段，其中一个为四肽，用6 mol/L盐酸水解此四肽只得到(Asp)2和Met三个氨基酸，问此肽的氨基酸排列顺序如何？（请写出推导过程）（10分）
解：根据条件1，该肽的可能顺序为：
Ala-Arg-Tyr-Asn-Met-Asn-Trp-Gly-Met-Gly-Ala-Leu；
由于胰凝乳蛋白酶专一性水解芳香族氨基酸的羧基所形成的肽键，所得到的三个肽段的可能结构为：
Ala-Arg-Tyr Asn-Met-Asn-Trp Gly-Met-Gly-Ala-Leu
由于在酸水解时，氨酸易被破坏，Asn Asp，推知其中的一个肽段为：
Asn-Met-Asn-Trp
综上所述，某肽的氨基酸顺序为：
Ala-Arg-Tyr-Asn-Met-Asn-Trp-Gly-Met-Gly-Ala-Leu
6、有四种氨基酸，其解离常数分别为：（6分）
施梦月氨基酸 | pK1(α－COOH) | pK2(α－NH3+) | PK3(R) |
Cys | 1.71 | 8.33 | 10.78 |
Glu | 2.19 | 9.67 | 4.25 |
Arg | 2.17 | miankongqu9.04 | 12.48 |
Tyr | 2.20 | 9.11 | 10.07 |
| | | |
问：（1）四种氨基酸的等电点分别是多少？
（2）四种氨基酸在pH 7的电场中各向哪个方向移动？
解：(1)出等电点是何状态，看其相应左右pK值，求出算术平均值。
得：Cys 5.02
Glu 3.22
Arg 10.76
Tyr 5.66
(2)其中Cys、Glu、Tyr向正极移动，Arg向负极移动。
7、如何从血液中分离纯化清蛋白（MW: 68500, PI = 4.9）？请举出两种分离纯化的方法，简要说明各种方法的基本原理及基本流程。（8分）
考点：蛋白质的分离与纯化
解析：分离纯化蛋白质的方法有很多种，应利用蛋白质物理化学性质的差异，选择合适的方法，将其分离纯化。如本题中可利用清蛋白分子量与其他蛋白不同的性质，采用凝胶过
滤层析的方法，也可利用蛋白质沉淀的性质，采用盐析的方法，或利用其两性游离及等电点、分子大小等与其他蛋白质的差异采用电泳的方法等。
答案：1.凝胶过滤层析：层析柱内填充带有网孔的凝胶颗粒，根据清蛋白分子量，选用合适大小网孔的凝胶，将血液加于柱顶端，以其所含的清蛋白球蛋白为例，清蛋白分子小进入凝胶孔内，球蛋白分子量大于网孔的分离上限，不进入孔内而直接流出，清蛋白因在孔内被滞留随后流出，从而清蛋白与球蛋白得以分离，而血液中含有的其他杂蛋白同理因其与清蛋白的分子大小的差异，可以与清蛋白分离，最终得到纯化的清蛋白。
2.盐析：硫酸铵等中性盐因能破坏蛋白质在溶液中稳定存在的两大因素，故能使蛋白质发生沉淀，不同蛋白质分子颗粒大小不同，亲水程度不同，盐析所需要的盐浓度也不同，从而将蛋白质得以分离。如用硫酸铵分离纯化清蛋白，在半饱和的硫酸铵溶液中，球蛋白即可从血清中沉淀析出而除掉，再加硫酸铵溶液至饱和，则清蛋白沉淀析出，从而清蛋白可以分离出来，再用透析，除去清蛋白中所含的硫酸铵，清蛋白即可被纯化。
B
一、填空（20分，每格0.5分）
1、 两性性质 是氨基酸与蛋白质共同的理化性质。
2、蛋白质的平均含氮量为 16 ％，今测得1g样品含氮量为10mg，其蛋白质含量应为 6.25 ％。
3、核酸具有紫外吸收能力的原因是 嘌呤和嘧啶环中有共轭双键 。
4、酶蛋白变性后其活性丧失，这是因为 酶蛋白的空间结构受到破坏 。
5、令A、B、C、D四种蛋白质的混合液，等电点分别为：5.0、8.6、6.8、9.2，在pH为8.6的条件下用电泳分离，四种蛋白质电泳区带自正极开始的排列顺序为 A、C、B、D 。
6、蛋白质的空间构象主要取决于 肽链氨基酸的序列 。
7、人体蛋白质的基本组成单位为 氨基酸 ，共有 20 种。
8、竞争性抑制剂使酶对底物的表观Km 增大 ，而Vmax 不变 。
9、基因工程的基本步骤： 分 、 切 、 接 、 转 、 筛 白术提取物。
10、谷氨酸的pK1(α－COOH)=2.19，pK2(α－NH3+)=9.67 pKR(R基)=4.25 其pI值应是 3.
22 。（1分）
11、当氨基酸溶液的pH＝pI时，氨基酸以 两性 离子形式存在；当pH>pI时，氨基酸以 负 离子形式存在。
12、用凝胶过滤分离蛋白质，分子量较小的蛋白质在柱中滞留的时间较 长 ，因此最先流出凝胶柱的蛋白质，其分子量最 大 。
13、当一酶促反应进行的速度为Vmax的80％时，在Km与S之间的何关系为Km = 0.25S 。
14、酶能加速化学反应的主要原因是 酶 和 底物 结合形成了 酶－底物复合物 ，使 底物 呈活化状态，从而 降低 了反应的活化能。
15、蛋白质中的肽键是由前一个氨基酸的 羧基 与后一个氨基酸的 氨 基脱水缩合而成。
16、蛋白质的二级结构主要有 α－螺旋 、 β－折叠和β－转角三种形式。
17、DNA和RNA共有的成分是 鸟嘌呤 。
18、含量最大的RNA是 rRNA
。
19、蛋白质吸收紫外光能力的大小，主要取决于 芳香族氨基酸的含量 。
20、DNA合成的方向是 5’端 3’端 ，多肽合成的方向是 N端 C端 。
21、全酶由 酶蛋白 和 辅助因子 组成，在催化反应时，二者所起的作用不同，其中 酶蛋白 决定酶的专一和高效率。
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