医院用筋膜仪
•临床研究•
与A A B R联合筛查结果分析*
胡海利1李卫东1邵子瑜1徐军杨1李欢欢1王丹1
【摘要】目的探讨耳聋基因与听力联合筛查对婴幼儿听力损失诊断的意义。方法对2015年10月至2016年12月未通过新生儿听力筛查转诊至合肥市妇幼保健所的505例婴幼儿进行A A B R复筛，同时采集足跟血制成干滤纸片，对常见的4个耳聋基因的9个位点进行筛查，包括:GJB2(235delC、299delAT、176dell6、35delG)、
G JB3(538C>T)、SLC26A4(IVS7 —2A>G、2168A>G)、线粒体12SrR N A(1555A>G、1494C>T)。结果505 例
婴幼儿中有69例(13. 7%,69/505)携带耳聋易感基因突变，其中GJB2基因突变56例(81. 16%,56/69),SLC26A4基因突变10例(14. 49%,10/69)，线粒体12SrRN A基因突变3例（4. 35%,3/69)，未检出GJB3基因突变。505例 中,A A B R筛查未通过376例，未通过率为74. 46%;69例耳聋基因突变婴幼儿中有37例进行了A B R检测，其中32例（86. 49%)存在不同程度听力损失。结论本组婴幼儿耳聋基因 突变类型以G JB2基因为主，其次为SLC26A4基因，耳聋基因筛查是听力筛查的有效补充，两者联合筛查有利于婴幼儿听力损失的早期发现和干预。
【关键词】婴幼儿；耳聋基因；听力筛查；自动听性脑干反应
DOI：10. 3969/j. issn. 1006-7299. 2017. 06. 006
网络出版时间=2017 — 7 — 21 16:33人脸识别怎么建模
网络出版地址：kns. cnki. net/kcms/detail/42. 1391. R20170721. 1633. 028. html
【中图分类号】R764. 05 【文献标识码】A【文章编号】1006 — 7299(2017)06 — 0579 — 04
Deafness Gene Screening and AABR in Children Hearing Loss Diagnose
Hu Haili，Li Weidong, Shao Ziyu, Xu Junyang, Li Huanhuan, Wang Dan
(The Department of Newborn screening ?Maternal and Child Health Institution
of Hefei, Hefei，230001，China)
[Abstract! Objective The aim of this study was to find out the carrying rate and the type of mutation of children deafness gene and discuss the significance of combined screening of deafness gene and hearing screening. Methods From October 2015 to December 2016， a total of 505 children from primary screening institutions were done with AABR hearing re —screening and deafness gene through blood filter paper by heel for gene sequencing at the hearing screening clinic of Hefei Maternal and Child Health Hospital. The 9 mutation sites of deafness genes included GJB2 (235delC, 299delAT, 176dell6,35delG), GJB3 (538C>T), SLC26A4 (I V S7-2A>G, 2168A>G) and mitochondrial 12SrRNA (1555A〉G，1494C〉T). Results There were 69 children with deafness susceptibility genes in 505 cases and its overall carrying rate was 13. 7%. There were 56 cases (81. 16%) with GJB2 gene mutations? 10 cases (14. 49%) with SLC26A4 gene mutations? and 3 patients (4. 35%) with mitochondrial 12SrRNA gene mutations. GJB3 gene mutations wer not detected. There were 376 who failed AABR rescreening out of 505.
The total failure rate for AABR rescreening was 74. 46%. Thirty—seven cases were examined with ABR out of 69 cases with deafness gene abnormal. 32 cases (86. 49%) had different degrees of hearing impairment. Conclusion
GJB2 gene mutation was the highest carrying rate of deafness genes in this region, followed by SLC
26A4 gene, less mitochondrial 12 SrRNA gene mutations while GJB3 gene mutations was not detected. Hereditary deafness gene screening was a valid supplement for physical screening , the combination of both methods was helpful for early detection and intervention of deaf children
*合肥市医学重点专科建设计划资助项目（合卫科教[2〇16]256号）
1合肥市妇幼保健所(合肥230001)
作者简介：胡海利，男，合肥人，副主任医师，硕士研究生，主要研究方向为新生儿听力筛查与临床诊疗。
【Key words】Children; Deafness gene；Hearing rescreening；Automated auditory brainstem response (AABR)
先天性听力损失是最常见的出生缺陷之一，国内外研究发现其发病率达1%。〜3%W，2]，其中遗传 性因素所致约占60%左右[3]。近年来，听力筛查与 遗传性耳聋基因联合筛查得到了广泛应用，两种方 法的联合应用对先天性听力损失的早期诊断及防治 起到了积极作用。本研究拟通过对505例未通过新 生儿听力筛查的婴幼儿耳聋基因和自动听性脑干反 应(automated auditory brainstem response, AABR)联合筛查结果进行分析，探讨本地区遗传性 耳聋基因的突变类型特点以及耳聋基因与AABR 联合筛查的意义。
1资料与方法
1.1研究对象以2015年10月1日至2016年 12月31日由安徽省各基层听力筛查机构转诊至 合肥市妇幼保健所听力筛查门诊的未通过新生儿 听力筛查的婴幼儿505例为研究对象，其中男305 例，女200例；城市户籍儿童190例，农村户籍儿 童315例；天龄11〜598天，平均81. 86 ±69. 35 天；有听力障碍家族史者28例，无听力障碍家族史477例。
1.2研究方法全部对象均进行AABR和耳聋基 因联合筛查，Xt部分耳聋基因异常的婴幼儿进行听 性脑f干反应（auditory brainstem response，ABR)检 测，本研究获得合肥市妇幼保健所医学伦理委员会 批准，所有小儿家长在筛查前均被详细告知听力筛 查及检测、耳聋基因的相关知识，取得家长的知情同 意并签字。
1.2.1耳聋基因筛查于小儿足跟部采集3滴血 滴于专用的干滤纸片上，待血片自然晾干后，置于专 用密封袋内送往北京博奥医学检验所，应用新生儿 遗传性耳聋基因芯片(微阵列芯片法)检测试剂盒，采用PCR与通用芯片相结合技术，检测干血斑基因 组DNA中与遗传性耳聋相关的4个耳聋基因的9个突变位点，包括：GJB2 (235delC、299delAT、176dell6、35delG)、GJB3 (538C>T)、SLC26A4 (1乂37 —2八>0、2168八>0)、线粒体12311^八(1555A>G、1494C>T)。
1.2. 2 A A B R听力筛查采用丹麦GN OTO-METRICS公司生产的AccuScreen Typel077 AABR筛查仪对
每例小儿进行AABR测试。测试 前用专用磨砂膏Skin Prep G el轻轻擦拭受试小儿 需放置电极片的相应位置，当婴儿处于平卧位安静 睡眠状态且极间电阻<5k n时进行测试，筛查仪器屏幕显示“V”表示通过，“X”表示未通过。
1.2.3 ABR检测采用丹麦GN OTOMETRICS 公司生产的MCU—90脑干听觉诱发电位仪进行 ABR测试，以A BR波V反应阈<30dB nH L作为 2〜4 kH z范围听力正常的指标；受试小儿口服少量 10%水合氯醛溶液入睡后取平卧位，于隔声屏蔽室 内进行测试。按照A BR测试的反应阈值，将听力 障碍分为：轻度（>30且<50dB nHL)、中度（50〜 80 dB nHL)、重度（>80dB nHL)、极重度（>90 dB nH L或对刺激声无反应）。
2 结果
2.1 AABR筛查结果505例婴幼儿中双耳通过 129 例(25. 54%)，未通过 376 例（74. 46%)，其中，左耳未通过107例（21. 01%)，右耳未通过73例 (14. 46%)，双耳未通过 196 例(38. 81%)。
2.2耳聋基因筛查结果耳聋基因未检出异常436例，检出基因突变69例（1
3. 66%，69/505)；其 中GJB2基因突变56例（81. 16%，56/69)，包括各 类纯合突变、杂合突变、1例合并线粒体12SrRNA 突变、1例合并SLC26A4突变;SLC26A4基因突变 10例，携带率为1. 98%(10/505)，占所有耳聋基因 突变的1
4. 49%(10/69)；线粒体12SrRNA基因突 变3例，携带率为0.59%(3/505)，占所有耳聋基因 突变的4. 35%(3/69)；未检出GJB3基因突变（表 1)。
505例中，AABR筛查和耳聋基因筛查均通过 者 116 例（22. 97%，116/505)，AABR筛查和耳聋 基因筛查均未通过者56例（11. 09%，56/505); AABR筛查通过而耳聋基因筛查未通过者13例 (2. 57%，13/505)，其中，1 例线粒体 12SrRNA (1555A>G)均质突变，9例GJB2基因杂合突变，3 例SLC26A4杂合突变；AABR筛查未通过而耳聋 基因筛查通过320例（59. 80%,320/505)。
2.3部分耳聋基因筛查异常婴幼儿听力学确诊结 果 69例耳聋基因筛查结果异常的婴幼儿中，有 37例进行了 A B R检测，其中32例（86. 49%，32/ 37)单耳或双耳不同程度听力损失（单耳5例，占1
3. 51%，双耳27例，占72. 98%)，双耳正常5例，占 13. 51%(表 2)。
3讨论
目前我国的耳聋基因筛查工作主要针对中国人 最常见的4个耳聋基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、线 粒体12SrRNA)，只是不同的研究所针对的位点不
采访麦克风表1 69例耳聋基因筛查异常婴幼儿各突变基因及位点的突变类型及例数分布突变基因及位点突变类型例数(例）构成比（％) GJB2(235delC)纯合突变1115. 94
杂合突变2840. 58 GJB2(299delAT)纯合突变1 1.45
杂合突变811. 59 GJB2(176dell6)杂合突变2 2. 90 SLC26 A4 (IVS7 - 2 A>G)纯合突变3 4. 35 SLC26 A4 (IVS7 - 2 A>G)杂合突变4 5. 80 SLC26A4(2168A>G)杂合突变2 2. 90线粒体 12Si：RNA(1555A>G)均质突变3 4. 35 GJB2(235delC) + GJB2(299delAT)复合杂合突变3 4. 35 GJB2(235delC) + GJB2(176dell6)复合杂合突变1 1.45 SLC26A4(IVS7-2A>G) + SLC26A4(2168A>G)复合杂合突变1 1.45 GJB2(235delC)纯合+线粒体 12S!：RN Aa555A>G)异质型复合突变1 1.45 GJB2(235delC)杂合+SLC26A4CIVS7 —2A>G)杂合双杂合突变1 1.45合计69100. 00表2 37例耳聋基因筛查异常婴幼儿ABR检测结果正常或异常者例数及基因型例数分布(例) ABR检测结果例数构成比（％)基因型
双耳正常513. 51GJB2(235delC)杂合突变4例
线粒体12S!：R N Aa555A>G)均质突变1例
双耳轻度异常410. 81GJB2(176dell6)杂合突变1例
GJB2(235delC)杂合突变3例
双耳中度异常410. 81GJB2(235delC)纯合突变1例
GJB2(235delC)杂合突变1例
GJB2(299delAT)杂合突变1例
SLC26A4CIVS7 —2A>G)纯合突变 1 例
双耳重度异常2 5. 41GJB2(235delC)纯合突变1例
GJB2(235delC)杂合突变1例
双耳极重度异常821. 62GJB2(235delC) + GJB2(299delAT)复合杂合突变 2 例
GJB2(235delC)纯合突变3例
GJB2(235delC)纯合突变+线粒体12S!：RNAa555A>G)异质突变1例
线粒体12S!：R N Aa555A>G)均质突变1例
SLC26A4CIVS7 —2A>G)杂合突变 1 例
单耳轻度异常410. 81GJB2(235delC)杂合突变2例
GJB2(299delAT)杂合突变1例
组培容器GJB2(235delC)杂合+SLC26A4CIVS7 —2A>G)杂合 1 例
单耳中度异常1 2. 70GJB2(299delAT)杂合突变1例
左耳轻度、右耳中度异常2 5. 41GJB2(235delC)纯合突变1例
粗糙的布片SLC26A4CIVS7 —2A>G)纯合突变 1 例
左耳中度、右耳重度异常1 2. 70GJB2(235delC)杂合突变1例卫星电视解码器
左耳中度、右耳极重度异常1 2. 70GJB2(235delC)杂合突变1例
左耳重度、右耳中度异常1 2. 70GJB2(235delC) + GJB2(299delAT)复合杂合突变 1 例
左耳重度、右耳极重度异常38. 11GJB2(235delC)纯合突变2例
SLC26A4CIVS7 —2A>G)杂合突变 1 例
左耳极重度、右耳重度异常1 2. 70GJB2(235delC) + GJB2(176dell6)复合杂合突变 1 例
同，主要以9个位点和20个位点居多，相关研究 报告的耳聋基因突变携带率在2. 1%至7. 72%之 间[6〜8]，远高于听力筛查所确诊的听力损失发生率 (1%〇〜3%。）。从本研究结果看，耳聋基因筛查结果显示本组婴幼儿耳聋基因突变携带率为13. 66%，明显高于其他研究；原因在于本研究对象均为新生 儿听力筛查未通过的婴幼儿。本组耳聋基因筛查异 常婴幼儿中有3例为线粒体12SrRNA(1555A>G )
突变的婴幼儿，突变率为〇. 59%(2/505)，其中1例
婴儿AABR复查双耳均通过，如果不做遗传性耳聋 基因筛查，就不能及时发现该儿童是药物性聋易感 者，那么今后很可能会因使用氨基糖苷类药物，导致 其出现不可逆的药物性聋；另外，线粒体12SrRNA 基因突变为母系遗传，耳聋基因筛查结果对于该家 系其他成员的用药同样具有重要的指导作用。
本组研究对象的耳聋基因突变总体携带率为
13. 66%，GJB2基因突变56例(包括各类纯合突变、杂合突变、1例合并线粒体12SrRN A突变、1例合 并SLC26A4突变），携带率为11. 09%(56/505)，占所有耳聋基因突变的81. 16%(56/69);SLC26A4 基因突变10例，携带率为1. 98%(10/505)，占所有 耳聋基因突变的14. 49%；线粒体12SrRNA基因突 变3例，携带率为0.59%(3/505)，占所有耳聋基因 突变的4. 35%(3/69)；未发现GJB3基因突变。可
见，GJB2基因突变可能是本组婴幼儿主要的遗传性 耳聋基因突变类型，其中GJB2(235delC)突变共45 例，携带率为8. 91 %(45/505)，故 GJB2(235delC)为 本地区耳聋基因突变的热点突变。SLC26A4基因 突变是本地区遗传性耳聋基因突变的第二大类型，再次是线粒体12SrRN A基因突变，可能由于筛查 人数较少，本研究没有发现GJB3基因突变。陈欣 等[9]对武汉市新生儿耳聋基因与听力联合筛查结果 显示，以GJB2基因突变为主，SLC26A4基因次之，线粒体12SrRNA基因突变最少，未发现GJB3基因 突变；国内其他地区的研究也都报道GJB2基因检 出率最高，SLC26A4基因次之，本研究结果与此一 致，但也有研究结果显示GJB3突变检出率高于线 粒体12SrRNA基因突变[1°’11]。
耳聋基因筛查作为听力筛查方法的有效补充，不仅可以有效促进听力损失的早期干预，也有助于
提高人口质量和对出生缺陷的防控。本组对象中经 AABR复筛双耳通过的129例儿童中有13例耳聋 基因检测异常，AABR复筛双耳未通过的376例儿 童中有56例耳聋基因异常，由此可见，只做听力筛 查或者只做耳聋基因筛查都可能使一部分听力障碍 儿童漏诊。因此，在实际工作中应该提倡将听力筛 查和耳聋基因筛查联合应用作为婴幼儿听力筛查的 重要策略进行推广[12〜14]。本研究还发现12例 AABR复筛通过的耳聋基因杂合突变小儿，包括9例GJB2基因杂合突变和3例SLC26A4杂合突变，即使这些对象今后不出现听力损失，耳聋基因早期 明确诊断，对其成年后的婚配和下一代优生优育都 有至关重要的指导意义。
综上所述，本地区遗传性耳聋基因突变的主要 类型为GJB2基因，其次是SLC26A4基因；听力筛 查联合耳聋基因筛查不仅有利于婴幼儿听力损失的 早期发现，而且对于听力损失出生缺陷的防控有促 进作用，应该在今后的实际工作中逐步推广应用。4参考文献
1 Drummond MC, Belyant seva IA, Friderici KH, et al. Actin
in hair cells and hearing loss[J]. Hear Res, 2012，288: 89, 2凌琴音，李茂清，徐碧红，等.7840例新生儿听力筛查和听力 损失高危因素分析[J].听力学及言语疾病杂志，2016, 24:
280.
3 Mahboubi H, Dwabe S, Fradkin M, et al. Genetics of hear
ing loss：where are we standing now[J]. Eur Arch Otorhino-
laryngol, 2012, 269：1733.
4李晓泽，马卫平，胡志鹏，等.长治地区19113例新生儿耳聋 基因检测[J].中华耳科学杂志，2015，13:654.
5孙磊.济宁市耳聋基因普遍筛查模式探索[J].中华耳科学杂 志，2016,14:649.
6 Yao GD，Li SX, Chen DL, et al. Combination of hearing
screening and genetic screening for deafness — susceptibility
genes in newborns[J]. Experimental and Therapeutic Medi
cine, 2014, 7：218.
7 Li SX, Chen DL，Zhao SB，et al. Cordblood—based high —
throughput screening for deafness gene of 646 newborns in Ji
nan area of China[J]. Clinical and Experimental Otorhinolar
yngology, 2015, 8：211.
8余红，杨晶，刘丹，等.听力初筛未通过新生儿常见聋病易 感基因检测结果分析[J].中国儿童保健杂志，2014, 22:
1071.
9陈欣，王智楠，夏忠芳，等.1546例新生儿耳聋基因与听力联 合筛查结果分析[J].听力学及言语疾病杂志，2016，24:182. 10蒋琦，忻蓉，沈学萍，等.2029例新生儿耳聋易感基因筛查结 果分析[J].中国儿童保健杂志，2016,24:509.
11沈沛，余红，刘丹，等.耳聋基因与新生儿听力的同步筛查结 果比较[J].中国优生与遗传杂志，2〇15,23:77.
12王秋菊.新生儿听力及基因联合筛查中国模式与未来发展[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2014,28:1733.
13韩冰，李倩，纵亮，等.新生儿听力及基因联合筛查临床实践 及筛查模式研究[J].中华耳科学杂志，2013，11:380.
14段聪军.新生儿耳声发射、AABR与耳聋基因联合筛查的临 床应用[J].中国妇幼保健，2015,30:4515.
(2017 — 02 — 20 收稿）
(本文编辑雷培香）
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议