【目 的】标准输血科各级检验人员室内质控操作程序，确保检验结果准确、可靠。 【适用范围】适用于输血相容性检测工程。
【职 责】输血科全体员工均遵守执行。
〔一〕 ABO、RhD血型室内质控操作规程
【检验原理】
选择型别的红细胞和血清，根据其与在用试剂标准血清：抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型红细胞及ABO血型抗原检测卡〔微柱凝胶〕阳性及阴性检测结果，通过每天或每批与待检标本一样的试剂和方法进展检测，以监控实验室进展ABO、RhD血型检测过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。 【主要试剂组成】
1. 质控品：样本1 A1型RhD〔+〕红细胞
样本2 B型RhD〔+〕红细胞
样本3 A血清
样本4 B血清
样本5 O型RhD〔+〕红细胞
样本6 RhD〔-〕红细胞
2. 血型鉴定试剂：
标准血清：抗A，抗B，抗D
ABO血型反定型红细胞：Ac，Bc，Oc
ABO血型抗原检测卡〔微柱凝胶〕
【主要仪器】 卡式专用离心机
【检验方法】 首先将质控品、标准血清及ABO血型反定型红细胞从冰箱取出后平衡至室温。操作步骤按不同检验方法〔平板法、试管法、微柱凝胶法〕具体如下：
1. 平板法：在玻片上〔或纸片上〕按表1加样各1滴〔50ul〕，混匀〔直径约20mm大小〕，前后缓慢摇晃玻片，2分钟左右肉眼判读结果，并记录。
2. 试管法：取13支〔95mm×12mm或75mm×12mm〕试管做好标记，按表1加样各1滴〔50ul〕，混匀，离心〔离心速度和时间可以选择转速1000rpm时间1分钟或转速3400rpm时间15秒〕，判定结果，并记录。
表1 平板法、试管法ABO及RhD血型室内质控加样表
抗A + 样本1 | 抗B + 样本1 | 抗D + 样本1 | 4%Ac + 样本3 | 4%Bc + 样本3 | 4%Oc + 样本3 |
抗A + 样本2 | 抗B + 样本2 | 抗D + 样本2 | 4%Ac + 样本4 | 4%Bc + 样本4 | 4%Oc + 样本4 |
抗A + 样本5 | 抗B + 样本5 | 抗D + 样本5 | 抗D + 样本6 | | |
视觉检测 | | | | | |
3. 柱凝胶法：
取4张待检ABO血型抗原检测卡〔微柱凝胶〕做好标记。将样本1分别参加第1张卡的1-3孔中各1滴〔50ul〕，将样本2分别参加第2张卡的1-3孔中各1滴〔50ul〕，将样本5分别参加第3张卡的1-3毛竹片孔中各1滴〔50ul〕，将样本6参加第4张卡的第3孔内。使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。
【建立参考值】
首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。
质控规那么：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
【失控判定】
阳性结果与预期结果比拟出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。
失控原因分析：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
失控解决方案：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
【记录表格】
"输血相容性检测室内质控参考值登记表"………………………SXK-JL65
"输血相容性检测室内质控登记表"………………………………SXK-JL66
"输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表"……………SXK-JL67
【考前须知】
1. 室内质控品、标准血清、标准红细胞保存在2～8℃，严禁在室温长期存放。番茄加速
2. 用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。
3. 红细胞质控品：轻拿轻放，防止剧烈震荡；假设发生凝集，出血菌落或严重溶血，不得使用；假设出现轻微溶血可用生理盐水对其进展洗涤，重新悬浮后使用。
4. 质控血清：出现浑浊或沉淀时，应进展适当离心，去除杂物后将上清液移至干净容器中使用。
【参考资料】
1. 长春愽迅生物技术"ABO、RhD血型检测质控品〔微柱凝胶法〕说明书"
2. 长春愽迅生物技术"ABO、RhD血型检测卡〔微柱凝胶法〕说明书"
3. 上海血液生物医药有限责任公司"抗A抗B血型定型试剂〔单克隆抗体〕说明书"
4. 密理博〔〕贸易"康D飞机加油车〔IgM+IgG〕血型定型试剂〔单克隆抗体〕说明书"
〔二〕不规那么抗体筛检室内质控操作规程
【检验原理】
选择血清，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡〔微柱凝胶〕中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本一样的试剂和方法进展检测，以监控实验室进展不规那么抗体筛检过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。
【主要试剂组成】
1. 质控品：样本1 O型血清
样本2 IgG型抗D〔+〕AB血清
2. 不规那么抗体筛检试剂：
抗人球蛋白不规那么抗体筛检卡〔微柱凝胶〕
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检红细胞
【主要仪器】 卡式专用离心机
【检验方法】 微柱凝胶法，具体操作步骤如下：
1. 将质控品、抗体筛检红细胞从冰箱取出后平衡至室温。
2. 取1张抗人球蛋白不规那么抗体筛检卡做好标记。
3. 将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检细胞用低离子强度盐溶液稀释至0.8%，对应参加上述检测
卡1～6管中，50ul/管。
4. 分别在前3管参加样本1，后3管参加样本2，50ul/管。
5. 将检测卡置37℃ 孵育器中15分钟。
6. 即刻使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。
【建立参考值】
首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。
质控规那么：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
【失控判定】
阳性结果与预期结果比拟出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。
失控原因分析：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
失控解决方案：按"输血相容性检测的室内质控程序"执行。
【记录表格】
"输血相容性检测室内质控参考值登记表"………………………SXK-JL65
"输血相容性检测室内质控登记表"………………………………SXK-JL66
"输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表"……………SXK-JL67
考前须知
1. 室内质控品、抗筛细胞、保存在2～8℃，严禁在室温长期存放。
2. 用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。
3. 质控血清：出现浑浊或沉淀时，应进展适当离心，去除杂物后将上清液移至干净容器中使用。
参考资料
1. 长春愽迅生物技术"不规那么抗体筛检质控品说明书"
2. 长春愽迅生物技术"抗人球蛋白检测卡不规那么抗体筛检操作说明书"
3. 长春愽徳生物技术有限责任公司"不规那么抗体检测试剂〔人红细胞〕使用说明书"
〔三〕穿插配血室内质控操作规程
【检验原理】
凝聚胺介质法：红细胞外表带有大量的负电荷，以防止其产生自发性聚集，其悬浮在电全自动打胶机
解质中形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。而凝聚胺介质法那么是首先利用低离子溶液降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清〔血浆〕中的抗体结合，其后参加凝聚胺溶液〔Polybrene，为高价阳离子多聚物、肝素中和剂〕，以中和红细胞外表带有的负电荷，使红细胞外表带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚，最后参加悬浮液〔Resuspending〕，
中和凝聚胺〔Polybrene〕阳离子作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被相应的抗体致敏，那么会被凝聚胺凝结，试验结果为阳性。
微柱凝胶法：选择的血清和相应的细胞，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡〔微柱凝胶〕中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本一样的试剂和方法进展检测，以监控实验室进展穿插配血过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。
【主要试剂组成】
1. 质控品：样本1 AB型RhD〔+〕红细胞
样本2 O型RhD〔+〕红细胞
样本3 RhD〔-〕红细胞
样本4 O血清
样本5 IgG抗DAB血清
2. 穿插配血检测试剂：
凝聚胺介质试剂：低离子溶液〔LIM〕、凝聚胺〔Polybrene〕、悬浮液〔Resuspending〕
抗人球蛋白穿插配血检测卡〔微柱凝胶〕
【主要仪器】 卡式专用离心机
【检验方法】
首先将质控品、凝聚胺介质从冰箱取出后平衡至室温。操作步骤按不同检验方法〔试管法
、微柱凝胶法〕进展。
1. 凝聚胺介质法 为试管法，操作步骤如下：
1.1 取4支〔95mm×12mm或75mm×12mm〕试管做好标记.
1.2 按照组合1〔样本4+样本投票箱制作1〕、组合2〔样本4+样本2〕、组合3〔样本5+样本1〕、组合4〔样本5+样本3〕分别参加各管，各1滴〔50ul〕。
1.3 各管参加低离子溶液〔LIM〕0.65ml，混合均匀后，各管参加凝聚胺〔Polybrene〕溶液2滴〔100ul〕，并混合均匀。
1.4 用离心机3400rpm时间10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
1.5 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝聚，如无凝聚，那么必须重做。
1.6 最后参加悬浮液〔Resuspending〕2滴〔100ul〕，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如凝聚散开，表示由Polybrene引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如果凝集
不散开，那么为红细胞抗原抗体结果的特异性反响，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
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