血清乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测 作业指导书
1.目的:建立乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc定性检测标
准操作规程,确保检测结果的准确。
2.范围:适用于检验科免疫实验室。
3.规程:
3.2用未加抗凝剂的真空抽血管抽取静脉血2ml。
3.3标本完全凝固后才能离心,并分离血清。
3.4如试验8小时内不能完成,血清标本放2~8℃保存。
3..5标本拒收标准:严重脂血、溶血、黄疸。
4、测定原理:
本试剂盒采用胶体金标记免疫层析技术,将HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc单项胶体金标记免疫层析检测条组装成联合检测卡。样品加到检测卡各项加样孔后,再借助毛细作用移行至层析区,于检测区和对照区,胶体金标记颗粒由于抗原抗体反应形成富聚,形成或不形成肉眼可见的胶体金颗粒反应带,从而实现对HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的检测,并作出存在与否的判定。 HBsAg用双抗体夹心法检测,胶体金标记抗HBs(鼠单抗)与样品中的HBsAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBs(鼠单抗)形成“Au-抗HBs(鼠单抗)-HBsAg-抗HBs(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显。游离胶体金标记抗HBs(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显。阴性标本则仅在对照线处显。结果于30分钟内判定。
抗HBs用双抗原夹心法检测胶体金标记HBsAg与样品中的抗HBs结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的HBsAg形成“Au-HBsAg-抗HBs-HBsAg-固相材料”夹心物而凝聚显。游离胶体金标记HBsAg则在对照线处与羊抗HBs结
合而富集显。阴性标本则仅在对照线处显。结果于30分钟内判定。
HBeAg用双抗体夹心法检测胶体金标记抗HBe(鼠单抗)与样品中的
HBeAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBe(鼠单抗)形成“Au-抗HBe(鼠单抗)-HBeAg-抗HBe(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显。游离胶体金标记抗HBe(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显。阴性标本则仅在对照线处显。结果于30分钟内判定。
抗HBe用竞争法检测样品中的抗HBe与胶体金标记1号抗HBe(鼠单抗)竞争性地与HBeAg结合,形成复合物,再借助毛细作用沿层析条向前移行,与检测线区预包被的2号抗HBe(鼠单抗)二次竞争结合,这样抗HBe阳性时检测线区不能形成“Au-抗HBe(鼠单抗)-HBeAg-抗HBe(鼠单抗)-固相材料” 自助饮水机
胶体金颗粒凝聚反应物而显。与HBeAg相结合的胶体金标记1号抗HBe(鼠单抗)复合物于对照线与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显。阴性标本则在检测线区及对照线处均显。结果于30分钟内判定。
抗HBc用竞争法检测样品中的抗HBc与胶体金标记抗HBc(鼠单抗)借助毛细作用沿层析条向前移行,于检测线处竞争性地与HBcAg结合,形成复合物,这样抗HBc阳性时检测线处不能形成“Au-抗HBc(鼠单抗)-HBcAg-固相材料”胶体金颗粒凝聚反应物,结果无着;样品抗HBc阴性时,则形成有沉淀。与此同时,游离的胶体金标记抗HBc(鼠单抗)于对照线与羊抗鼠IgG 抗体结合而富集显。阴性标本则在检测线处及对照线处均显。结果于30分钟内判定。
5、试剂:哎康生物技术有限公司
5.1组成:
5.1.1 乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc联合检测卡 5项/卡
5.1.1.1HBsAg胶体金标记免疫层析检测条 1条/卡
5.1.1.2抗HBs胶体金标记免疫层析检测条 1条/卡
5.1.1.3HBeAg胶体金标记免疫层析检测条 1条/卡
5.1.1.4抗HBe胶体金标记免疫层析检测条 1条/卡
混凝土表面增强剂5.1.1.5抗HBc胶体金标记免疫层析检测条 1条/卡
5.1.2.采样吸管 1支/卡
5.1.3.说明书 1份/盒
十字滑台
5.2储存:试剂盒应置4℃~30℃中避光保存,有效期十八个月。
6、试验方法:
6.1.检测前将待测标本和检测卡恢复至室温;
6.2.自铝箔袋中将检测卡取出,水平放置并作好标记;
6.3.用吸管吸取血清/血浆标本,逐滴加入检测卡的五个加样孔内,每孔
1~2滴(50~100ul)。
7、注意事项
7.1乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测试剂盒适用
于测试血清或血浆标本,用其他标本或溶液测试可能出现异常结果。
7.2检测结果的质量控制:对照线无显时,表示实验失败;
7.2.本品仅供体外诊断用;
7.3.试剂启用后应尽快用完;
7.4.临床标本均应视为有潜在传染性,请按传染疾病实验室检查规程操作。
7.5本产品为目视读取结果,为保证判断结果的正确,请勿在光线昏暗处 医用手腕带
对结果进行判断。
7.6测试结果应在测试开始后15分钟开始读取,30分钟后判断无效。
7.7请保证适量标本进行检测,过多过少的标本量都有可能导致结果出现
偏差。
8、临床意义:
用于人血清或血浆样品中HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的联合检测,适用于急性、慢性乙型肝炎的辅助诊断。
乙型肝炎病毒是乙型肝炎的病原体。乙型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病。其严重后果是直接导致急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬 液压静力压桩机
化、肝衰竭或死亡,并与某些人的肝细胞癌(HCC)的发生密切相关,构
成复杂的乙型肝炎疾病谱。乙型肝炎病毒还可通过母婴传播,危害极大。
大样本调查显示我国HBsAg携带率约10%,慢性无症状HBV携带者(AsC)
可能超过1.2亿人,成为HBV传播最重要的传染源。
乙型肝炎病毒为DNA病毒,其负链上有S、C、P、及X这4个开放读码框架,分别编码HBsAg、前S1多肽、前S2蛋白、HBcAg、DNA多聚酶
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