一、产前诊断
1.夫妇血型检测(微柱凝胶检测法:ABO、Rh(D)血型定型检测卡) 撕开微胶卡的封膜,于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC生理盐水悬液各50μl;于反定管白A、B、O、自身管分别对应加入% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl,再分别加入待检血浆(血清)50μl;
将检测卡室温反应≥10 min,取出,置离心机1000r/min 2min,1800r/min 3 min离心;
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)。
按下表检验结果判定ABO、RhD血型:
检验结果 | ABO、RhD血型判定 |
兰A | 黄B | 灰D | Control (待检RBC) | A1 | B | O | Control (血浆与自身RBC) |
+ | - | +或- | - | - | + | - | - | 汽车门板A型RhD(+或-) |
- | + | +或- | - | + | - | - | - | B型RhD(+或-) |
磁卡制作- | - | +或- | - | + | + | - | - | O型RhD(+或-) |
+ | + | +或- | - | - | - | - | - | 保健内衣AB型RhD(+或-) |
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2.孕妇抗体效价的测定(微柱凝胶检测法:抗人球蛋白检测卡)
孕妇IgG(抗A/抗B)效价
取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各,充分混匀,37℃水浴2小时(以充分破坏血清中的IgM类抗体)。
取4支干净试管排于试管架上;将第一管加入50微升中和血清和毫升低离子介质(原液为1:1稀释,此时稀释倍数为原液的64倍)。
第2-4管中分别加入400微升低离子介质;从第一管中吸出400微升的液体加入第二管,混匀,在从第二管吸出400微升加入第三管混匀,依次倍比稀释。
取抗人球蛋白检测卡,撕去铝箔,在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1%的标准红细胞(或父亲红细胞)低离子介质(LIM)悬液50微升。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min),
(离心必须在加样后30分钟内进行)
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)
临床参考值:孕妇IgG(抗A/抗B)效价≤64。
孕妇IgG(抗D)效价测定
确定孕妇为RhD阴性,丈夫为RhD阳性。
取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各,充分混匀,37℃水浴2小时(孕妇血清与O型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要灭活,阴性不需要灭活)。
取4支干净试管排于试管架上;将第一管加入50微升中和血清和400毫升低离子介质(灭活血清为1:1稀释,此时稀释倍数为原液的16倍;如不灭活为8倍)。
第2-4管中分别加入400微升低离子介质;从第一管中吸出400微升的液体加入第二管,混匀,在从第二管吸出400微升加入第三管混匀,依次倍比稀释。
取抗人球蛋白检测卡,撕去铝箔,在4管中个依次加入倍比稀释好的血清50微升和1%的标准红细胞(或父亲红细胞)低离子介质(LIM)悬液50微升。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min),(离心必须在加样后30分钟内进行)
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)
临床参考值:孕妇IgG(抗D)效价≤16,其血型不合的胎儿溶血病一般较;IgG(抗D)效价≤64时,其血型不合胎儿死胎率增高。
nifeshe3.孕妇不规则抗体筛查(微柱凝胶检测法:抗人球蛋白检测卡)
取抗人球蛋白检测卡,撕去铝箔,在3管中个依次加入孕妇血清(血浆)50微升和1%的筛选细胞低离子介质(LIM)悬液50微升。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min),(离心必须在加样后30分钟内进行)
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)
二、新生儿溶血病血型血清学诊断(三项)
1.患儿红细胞直接抗人球蛋白试验(微柱凝胶检测法:抗人球蛋白检测卡) 取患儿血液,离心,洗涤,取压积红细胞用生理盐水配制成1%的红细胞悬液。
在抗人球蛋白检测卡上标注患儿的姓名或者编号,撕开卡上的铝箔。
将50微升1%红细胞悬液加入到相应的孔中。
离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min)。
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)。
2.患儿红细胞的放散试验(微柱凝胶检测法:抗人球蛋白检测卡)
采集患儿的血液标本,按照所检抗体的不同,使用不同的方法的到放散液(具体操作见附件)。
取出试剂卡,检测前确保试剂卡及样品完全平衡至室温并标记,撕开试剂卡上的铝箔带,仅暴露试验所需使用的反应腔
将 50 μL 1% A、B、O红细胞LIM悬液加入相应的反应腔中 。
向相应的反应腔中加入 100 μL的放散液。
观察反应腔内的反应物是否混匀,如需要,轻弹微柱。
2.5 将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min)。
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)
热放散法:取1ML体积的压积血用盐水至少洗涤三次,最后一次尽量取净,然后和等量或
半量的生理盐水混匀,置于56℃孵育10分钟,期间摇动数次,迅速取出3500r/min离心2-3分钟,立即取上清。即热放散液。
酸放散:详细见酸放散试剂盒说明书。
结果判读
Ac | Bc | Oc | 指示细胞 |
+ | - | - | 游离的抗A抗体 |
- | + | - | 游离的抗B抗体 |
+ | + | - | 游离的抗A抗B抗体 |
O | O | + | 游离的ABO 以外抗体 |
- | - | - | 无游离抗体 |
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基因测序仪
3. 游离抗体试验(微柱凝胶检测法:抗人球蛋白检测卡)。
游离试验是新生儿出生后7天内,辅助诊断新生儿溶血病的试验。单纯游离试验阳性,不能诊断IgG抗体已经致敏新生儿红细胞。
取出试剂卡,使用前确保试剂卡完全平衡到室温。
分别向反应柱内加入50ul 1%A、B、O红细胞LIM悬液。
最后向反应柱内加入100 ul婴儿血清或血浆。注,加样时,头请勿触碰微柱管壁。
观察柱中的反应物各组分是否混匀,必要时轻弹几下微柱充分,使反应物混匀。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟(1000r/min 2 min,1800r/min 3 min)。
取出,判定结果(凝集强度判断详见结果判定示图)。
结果判读
Ac | Bc | Oc | 指示细胞 |
+ | - | 陶瓷咖啡壶- | 游离的抗A抗体 |
- | + | - | 游离的抗B抗体 |
+ | + | - | 游离的抗A抗B抗体 |
O | O | + | 游离的ABO 以外抗体 |
- | - | - | 无游离抗体 |
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4.新生儿溶血病血型血清学诊断
直抗试验 | 游离试验 | 释放试验 | 结 论 |
O | O | O | 不能证实为由血型免疫抗体引起的新生儿溶血病 |
+ | O | O | 可疑为新生儿溶血病 |
O | + | O | 可疑为新生儿溶血病 |
O | O | + | 可以证实为ABO新生儿溶血病 |
+ | O | + | 可以证实为ABO新生儿溶血病 |
+ | + | O | 可以证实为ABO新生儿溶血病 |
+ | + | + | 可以证实为ABO新生儿溶血病 |
O | + | + | 可以证实为ABO新生儿溶血病 |
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