免疫组化标准操作规程(SOP)
免疫组化标准操作规程
一、实验目的：
蛋白物质的定性、定位检测。
二、实验原理：
基于利用放射性核素和其他标记物（荧光素，酶，重金属离子等）做为示踪剂，通过 水情监测
免疫系统和亲和（抗原-抗体特异性融合）和核酸杂交（碱基配对特异性相连接）途径， 在非政府切片或细胞涂片上，原位表明生物大分子的动态变化而创建的一门染技术。
三、实验准备
材料：
移液器（p1ml，p200，gilson）
吸头（10ul，100ul，1000ul，axygen）6cm、10cm培养皿（corning）ep管（1.5ml）试剂：
胎牛血清(10099-141invitrogen)1mol/l的tbs缓冲液
0.01mol/l柠檬酸盐缓冲液（cb，ph6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸
0.4g3%h2o2溶液仪器：
通风橱，医用微波炉；
四、操作方式流程
1）脱蜡前，应将组织芯片在60℃恒温箱中烘烤30分钟。2）组织芯片置于二甲苯中
浸泡15分钟；3）更换二甲苯后再浸泡15分钟；发光标识
4）二甲苯：乙醇=1:1混液中煮沸10分钟；5）无水乙醇中煮沸10分钟；6）95%乙醇中煮沸10分钟；7）85%乙醇中煮沸10分钟；8）75%乙醇中煮沸10分钟；9）蒸馏水中煮 沸10分钟；
10）用蒸馏水或pbs配置新鲜的3%h2o2，室温封闭10分钟；
遥控直升机制作11）抗原复原在微波炉里低火冷却0.01m柠檬酸钠缓冲溶液（ph6.0）至融化后将非
政府芯片放进，高火保持20分钟；
12）自然冷却至室温后，置入蒸馏水中浸泡10分钟；13）10%血清（tbs配制）封闭
30分钟；
14）吸弃血清，勿洗脸重新加入对应的一抗炎孵育过夜；15）废旧一抗炎，tbs洗脸2不下，每次5分钟；16）重新加入二抗炎，室温孵育60分钟；
17）tbs洗4遍，每次5分钟；
18）重新加入dab染，直至显出浅黄年才，放进蒸馏水中中止反应；19）用苏木精30秒，清水冲洗7-8不下；20）水解封片75%乙醇中，浸置5分钟；21）85%乙醇中煮沸5分钟；22）95%乙醇中煮沸5分钟；23）无水乙醇中煮沸5分钟；
24）二甲苯：乙醇=1:1混液中浸泡5分钟；25）二甲苯后再浸泡5分钟；
26）更改二甲苯后再煮沸5分钟；
27）取出后，滴加30ul中性树胶，用盖玻片封片28）晾干，观察结果。
五、注意事项
兔毛纱线
芯模1）标记的时候使用铅笔，避免标记被有机溶剂清除
微生物添加剂
2）柠檬酸钠溶液煎的时候特别注意火候的把握住，煮沸后，过几秒上开小火保持3）抗体类型特别注意区别
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