【实验目的】
1. 学习透析的基本原理和操作;
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2. 掌握盐析沉淀蛋白质后,蛋白质的脱盐处理技术; 3. 了解透析袋的使用方法。
【实验原理】
启动子透析是利用小分子能通过而大分子不能通过半透膜的原理而把它们分开的一种重要手段,是食品分离提纯过程中经常使用的基本操作技术之一。
蛋白质是大分子物质,不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
【实验仪器与试剂】
烧杯;玻璃棒;离心机;离心管;冰箱;电炉。1%氯化钡溶液;硫酸铵粉末;1mol/L EDTA;2%NaHCO3。透析管(宽约2.5cm,长12-15cm)或玻璃纸; 皮筋;鸡蛋清溶液:将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,然后用六层纱布过滤。电子蚊香
【实验步骤】
1. 透析管(前)处理:先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中,煮沸10分钟,再在2% NaHCO3溶液中煮沸10分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。 2. 取5mlled灯控制器蛋白质溶液于离心管中,加4g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4℃下静置20分钟,出现絮状沉淀。
3. 离心:将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心微波电视天线20分钟。
4. 自动杀菌净手器装透析管:离心后倒掉上清夜,加5ml蒸馏水溶解沉淀物,然后小心倒入透析管中,扎紧上口。
5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中,进行透析,并不断搅拌。
6. 每隔适当时间(5-10分钟),用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中,观察是否有沉淀现象。
【结果与讨论】
记录并解释实验现象。
【思考题】
在透析袋处理过程中, EDTA和NaHCO3起何作用?