1 诱导
预表达
5mlLB+100μL菌，37℃摇到OD=0.4~0.6（约2到3小时）；
加IPTG(1M IPTG一般2.5μL，可多设几个浓度)；
取样0h,2h,4h,6h,过夜；每次1ml
离心菌液，加20μLloading，沸水煮，跑胶检测 大量表达后菌液处理
12000rpm，2min,4℃,收集菌体；
5g怎么做CB洗1~2两次，10000 rpm，2min,4℃，
焗炉加CB重悬（100ML菌液一般2ML，可根据自己菌的多少和所需蛋白的浓度改变）； 10000 rpm，20min,4℃，上清就是你要的啦（如果是第一次做可留一点检测上清中是否有你的蛋白，不要全部纯化啦）
MBP 蛋白纯化
一、 溶液：
CB （Column buffer）:50ml
配方：
1M Tris-HCl pH 7.4 1ml
NaCl 0.585g
0.5M EDTA 100ul
预制箱梁
Elution buffer：
50ml CB + 0.158g麦芽糖
二、 纯化步骤
1、200ul beads 短离心，弃上清(15s)右旋
2、用1ml CB 重悬，洗两次10000rpm
3、重悬在200ul CB中
4、加入200ul 粗提蛋白(上清)
5、4℃ 混匀 60min，离心 1min，弃上清
6、用1ml CB 重悬 洗一次。
7、加入 elution buffer，4℃ 混匀 30 min
8、离心1min，取上清 。
9、重复1次。
三、 回收 beads
1、 水 3倍体积
2、 0.1% SDS 3倍体积
3、 水 1倍体积
4、 CB 3倍体积
保存在20% 乙醇，4℃.。
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