陈海燕;汤玲;肖承悰
【摘 要】厚板冲裁目的 分析七子益肾理冲汤对多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢上皮细胞炎性因子及胰岛素抵抗状态的影响.方法 选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,制备胰岛素抵抗型的PCOS模型大鼠,共计入选大鼠54只,按照随机数字表法将其分成观察组(27只)和对照组(27只).观察组采用剂量为6 mL/kg七子益肾理冲汤灌胃,对照组采用等剂量蒸馏水灌胃,两组均每天灌胃1次,持续20 d.化学免疫发光法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及睾酮(T)含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测卵巢上皮细胞内炎性因子素上皮衍生因子(PEDF)、内脂素(Visfatin)及白细胞介素-6(IL-6)含量,放射免疫法检测血清空腹胰岛素(FINS)及空腹血糖(FBG)含量,葡萄糖氧化酶法检测胃管给葡萄糖2h后血糖(OGTT-2 h BG)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI).结果 观察组大鼠血清LH、T含量及LH/FSH均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠血清FBG、OGTT-2 h BG、FINS含量及HOMA-IR低于对照组,ISI高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠上皮细胞PEDF
、Visfatin及IL-6含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论七子益肾理冲汤可降低PCOS胰岛素抵抗大鼠卵巢上皮细胞炎性因子含量,调节LH/FSH比值,改善高胰岛素血症与高雄激素血症,使糖代谢紊乱得以调整.
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2018(015)031
【总页数】4页(P12-15)
【关键词】多囊卵巢综合征;胰岛素抵抗;炎性因子;七子益肾理冲汤
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【作 者】陈海燕;汤玲;肖承悰
【作者单位】北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700;北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700;北京中医药大学东直门医院妇科,北京 100700
【正文语种】中 文
【中图分类】R271.9
多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）为临床多见的内分泌失调性疾病，一般是由于代谢、内分泌与神经系统及卵巢局部调控因素不平衡所造成的病理性内分泌紊乱，其主要证候特征为高胰岛素血症、连续无排卵、高雄激素血症和卵巢多囊样变化等，其病理生理所涉及的范围比较广[1-2]。Burghen在1980年提出PCOS发病中有胰岛素抵抗（IR）参加，相关研究也已经验证了PCOS和IR间联系紧密，胰岛素传导路径内任何环节的损伤都会造成IR。当前PCOS伴随IR已是内分泌和妇科研究的重点，并引起相关学者广泛关注[3-4]。
肖承悰教授，为京城四大名医之首萧龙友先生的嫡孙女及学术经验传承人，燕京流派主要传承人，北京中医药大学东直门医院（以下简称“我院”）首席教授、博士生导师、博士后传承导师，第四批、第六批国家级名老中医药传承指导老师。肖教授临床经验丰富，对各种妇科疑难杂症都有独到认识[5-7]，其所独创的“七子益肾理冲汤”广泛应用于临床PCOS IR患者，均取得较好效果。
因此，本研究通过分析七子益肾理冲汤对PCOS IR大鼠卵巢上皮细胞炎性因子及IR状态的影响，为临床患者提供一些实验室依据。高硅氧布
1 材料与方法
1.1 实验动物
选取SPF级Wistar雄性大鼠60只，23日龄，购自成都达硕实验动物公司（合格证号SCXK 20060009），体重 40～60 g，平均（51.06±4.82）g。 常规饲养 2 d 后开始实验，大鼠分笼饲养，每个笼内5只，室温22～26℃，相对湿度55%～65%，昼夜循环，保持12 h光照，大鼠灌胃、添加饲料及换水等都有专人进行，大鼠饮用水为灭菌纯水，普通饲料购自成都达硕实验动物公司。
1.2 药物及试剂
药物：七子益肾理冲汤（女贞子15 g、菟丝子15 g、枸杞子 15 g、巴戟天15 g、覆盆子15 g、沙苑子 15 g、桑寄生 15 g、川断 15 g、白芍 15 g、香附 12 g、黄芪 15 g），制成颗粒剂（来自我院），依据人鼠体重进行换算，制成浓度为0.295 g/mL的溶液，以6 mL/kg灌胃。
试剂：黄体生成素（LH）试剂盒（批号：2400543）；睾酮（T）试剂盒（国药准字：S20
空心钢管050106）；卵泡刺激素（FSH）试剂盒（批号：3401125）；空腹胰岛素（FINS）试剂盒（批号：3400637）；素上皮衍生因子（PEDF）试剂盒（货号：CSB-E08819r）；内脂素（Visfatin）试剂盒（货号：CSB-E08941r）；白细胞介素（IL-6）试剂盒（货号：CSB-E04640r）；以上试剂均购自武汉华美科技公司。
1.3 方法
1.3.1 模型制备 采用高脂高卡饲料（蔗糖30%、鸡蛋2%、猪油20%、奶粉4%、普通饲料44%）喂养80 d，并从第60天起由颈部向大鼠注射9 mg硫酸普拉睾酮钠稀释液，每天1次，连续注射20 d，注射的第21天采集大鼠静脉血，检测血清T、空腹血糖（FBG）、LH及FINS含量，算出胰岛素敏感指数（ISI），剔除不符合IR型的PCOS模型，共计入选大鼠54只。
1.3.2 分组及给药 按照随机数字表法将PCOS IR模型大鼠分成观察组（27只）和对照组（27只），观察组采用剂量为6 mL/kg七子益肾理冲汤灌胃，对照组采用等剂量蒸馏水灌胃，每天1次，持续灌胃20 d。
1.4 观察指标
1.4.1 大鼠血清性激素含量 大鼠末次给药以后，禁止饮食、饮水24 h，腹腔注射0.3 mL 2%钠麻醉，采集腹主动脉血5 mL，3000 r/min离心（有效离心半径10 cm）8 min后取上清液，化学免疫发光法检测血清FSH、LH及T含量，计算LH/FSH值。
1.4.2 大鼠血糖含量、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及ISI放射免疫法检测血清FINS及FBG含量，葡萄糖氧化酶法检测胃管给葡萄糖后2 h血糖（OGTT-2 h BG）含量，采用李光伟等[8]提出的方法计算HOMA-IR和ISI，HOMA-IR=FINS×FBG/22.5，ISI=1/FINS×FBG。
1.4.3 大鼠上皮细胞炎性因子含量 酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测卵巢上皮细胞内炎性因子PEDF、Visfatin及IL-6含量。
1.5 统计学方法
使用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用独立样本t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组大鼠血清性激素含量比较
观察组大鼠血清LH、T含量及LH/FSH均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。
表1 两组大鼠血清性激素含量比较（±s）注： LH：黄体生成素；T：睾酮；FSH：卵泡刺激素组别 只数 LH（mU/mL） T（ng/mL） FSH（mU/mL） LH/FSH观察组对照组t值P值27 27 4.48±0.49 5.80±0.52 9.637＜0.05 9.64±1.38 16.79±1.47 7.522＜0.05 2.02±0.26 1.75±0.24 1.053＞0.05 2.27±0.72 3.83±0.75 9.476＜0.05
2.2 两组大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比较
观察组大鼠血清FBG、FINS、OGTT-2 h BG含量及HOMA-IR均低于对照组，ISI高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。
表2 两组大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比较（±s）注：HOMA-IR：胰岛素抵抗指数；FBG：空腹血糖；ISI：胰岛素敏感指数；FINS：空腹胰岛素；OGTT-2 h BG：胃管给葡萄糖后2 h血糖组别 只数HOMA-IR FBG（mmol/L） ISI FINS（g/L）OGTT-2 h BG（mmol/L）观察组对照组27 27 t值 P值3.62±0.38 5.63±0.40 8.074＜0.05 3.96±0.52 5.65
±0.57 9.376＜0.05 0.28±0.04 0.24±0.06 7.052＜0.05 16.83±0.17 22.31±0.19 8.552＜0.05 6.74±0.55 9.23±0.58 9.267＜0.05
摄像机标定2.3 两组大鼠上皮细胞炎性因子含量比较
观察组大鼠上皮细胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。
表3 两组大鼠上皮细胞炎性因子含量比较（±s）注：PEDF：素上皮衍生因子；Visfatin：内脂素；IL-6：白细胞介素-6组别 只数 PEDF（ng/mL） Visfatin（ng/mL） IL-6（pg/mL）观察组对照组27 27 t值 P值18.84±0.63 32.90±0.68 10.074＜0.05 2.48±0.37 4.71±0.39 7.895＜0.05 22.61±1.56 32.09±1.59 8.339＜0.05
3 讨论
PCOS的临床特征、病理变化、卵巢形态学改变均具有显著的种族和个体差异[9]，且PCOS患者多伴有IR，分泌过多的胰岛素会导致体内雄激素水平升高并促进其发挥生物学作用[10]。中医学认为PCOS是本虚标实之证，本质为脾肾两虚，标是痰瘀阻滞胞宫而形成。
一方面，水湿不化、脾失健运而造成痰湿内生，进而痰湿阻滞产生血瘀，体内痰瘀互结，对冲任胞宫阻滞，长时间蕴而化毒，产生了病理状况[11-12]；另一方面，机体脾肾两虚，造成运化无力，精微之物无法梳布全身，长时间化热伤津，呈现出阴虚内火瘀毒表象。现代医学研究显示，体内IR时多余的游离脂肪、胰岛素和葡萄糖使机体阴阳平衡损坏，进而引发疾病[13]。另外，由于肾阳亏虚，机体温煦推动力降低，造成身体功能下降，胰岛素受体抵抗时表征是受体结构与功能异常，胰岛素受体的数量和亲和力降低造成胰岛素结合量降低，受体丧失部分功能，受体结合胰岛素后向细胞内传导信号导致代谢过程异常[14-17]。
支撑架“七子益肾理冲汤”是肖教授多年来临床经验总结出的临床验方，从冲脉入手，重视肾、冲脉在女性生理病理中的重要地位，结合辨证，凡辨证为肝肾不足、冲脉失调的疾病均可应用。方中以女贞子、菟丝子、枸杞子、沙苑子益肾气、滋肾阴，巴戟天、覆盆子补肾阳，桑寄生、川断补肾气而不滞始，显“益肾理冲”之意，白芍、香附养肝疏肝，柔疏结合，冲脉得理，黄芪补气健脾，气行则冲血条达，全方共奏益肾养肝、调理冲脉之功[18-20]。肖教授运用“七子益肾理冲”汤PCOS IR患者，效果极佳。
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