微生物快速检测法（DME）
1、原理
细菌和酵母菌都能在染后通过显微镜直接计数，本程序可以对淀粉糊浆中活菌/死菌微生物污染进行准确计数 2、仪器及试剂
2、天平
3、微波炉
4、三联不锈钢过滤器（包括三联支架+笔式点火线圈真空泵）
5、平口镊子
6、0.8um/25mm过滤膜
7、载玻片
8、盖玻片
9、异丙醇，100％
10、吖啶橙染剂
11、浸油
12、75％乙醇
13、洗洁精
14、无菌杯
3、操作程序
1取一洁净的无菌杯（可重复使用，用洗洁精加自来水清洗干净后，使用离子水冲洗至少三次） 3使用微波炉将配置好的样品微热（使样品充分溶解）
4用去离子水将三联过滤杯冲洗干净。（开过滤器，开泵塑木型材—关过滤器，关泵—开排气阀，排气抽真空）（注：后可加入75％乙醇5ml，放置1min后滤掉）
5使用平口镊子放置滤膜，亮面朝上，滤膜与过滤砂芯中间无缝隙
6取出热好的样品，过滤，至103克样品全部滤完
7关过滤器，关泵，排气
8加入2.5ml吖啶橙染剂，使其溢满整个滤膜
9染一分钟后，关排气阀，开过滤器，开泵
10使用异丙醇冲洗（至少2.0ml）
11在等待染的1min时，取一载玻片加一滴浸油
12在泵开启的状态下，用镊子移下滤膜（有助于滤膜干燥，便于观察）
13在滤膜上再加一滴浸油，盖上盖玻片并用镊子将盖玻片压实（便于观察）
14将放好滤膜的载玻片放在显微镜的40倍物镜下观察
15细菌和酵母菌呈现桔或绿（细菌为针尖大小的亮点，酵母菌呈有规则的圆形或椭圆形，多为两个呈三个连在一起）
16取中间位置观察20个视野，菌落总数/ml为20个视野的平均值*86 17观察时，应注意滤膜四周的细菌，最好每个角落能观察到
注意：1每个检测过程都在通风橱中进行
2此检测方法检测出的菌类为死菌和活菌的总数
4、技术程序
可以采用集中计算方法确定每毫升的菌数，需要确定显微镜的视野范围，这个面积就是显
微镜在给定放大倍数内可观察到的视野范围的总面积。
4.1在400倍放大显微镜下，测定视野直径。
4.2测得直径后，视野面积便可由下式计算：
视野面积=（直径/2)2*3.14
4.3滚花铜螺母下一步是计算滤膜的面积。尽管滤器的直径是25mm，但过滤使用的不是滤器的总面积。有水和一滴染剂结合的50ml样品应该被过滤。可以测量染剂存留的滤器的面积，滤器直径一旦被测量，滤器面积视野数量按下式计算：
视野数/ml=（滤器面积/视野面积）/样品的毫升数
至少应该计数20个视野，然后取视野平均值，计算每毫升的菌数按下式计算：
菌数/ml=（每毫升的平均菌数）虚拟试衣技术*（视野数/ml室内导航技术）
5注意事项
5.1样品量为130克
5.2快速检测：可以使用木制工艺品加工20X的物镜快速检查存在的酵母菌和霉菌。
5.3视野的报告：如果钱10个视野计算出每毫升计数大于2000，则这10个视野就足以报告此污染样品。如果第一个视野计算出每毫升计数大于8000，则必须再看5个不同的视野，如果此六个视野情况类似，只需报告一个视野。
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