1. 目的
规范真菌(1-3)- 3 -D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。
2. 原理
实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)- 3 -D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂 的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。利用(1-3)- 3 -D葡聚糖标准品建立 3 -D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- 3 -D葡聚糖含量。
3. 试剂
真菌(1-3 ) - 3 -D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。试剂盒包装规格：20人份/盒。
试剂盒组成：
复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20C以下冷冻保存，一周内使用。不能反复冻融试剂溶液。
5. 实验用具：250 ^1无热原吸头、20-200卩1移液器、75 C试管恒温仪、旋涡混合器、塑料
试管架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂) 。
集装箱内衬袋6. 标本采集及送检要求
6.1 标本采集要求
6.1.1 采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无3葡聚糖采血管；
6.1.2 常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。
6.2 标本的送检和保存要求
标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。若当日不能及时检测的标本应将离心后的血
浆转移至无3葡聚糖的容器内-20C以下冷冻保存，一周内使用。
7. 实验操作
7.1 在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哗的一声，试管仪温度
达到37 C，待用;
泡面碗
7.2 取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1?2 ml，以400 g离心10分钟；
7.3 取富含血小板的血浆100卩I，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75 C
试管恒温仪中加热10分钟；
7.4 加热10分钟后，将样品稀释瓶从75 C试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀释的样品供试溶液；
7.5 取3 -G试剂1支，开启；
7.6 取3 -G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入3 -G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试剂溶液
备用；
7.7 打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，
使检测软件进入待采集状态；
7.8 取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100卩1加入反应试管中，
然后加入50卩1试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；
7.9 加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试
管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37 C反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；
7.10反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的（1-3 ）- 3 -G葡聚糖测量值，
进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。
8. 假阳性因素
8.1 （1-3）- 3 -D葡聚糖污染。使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受（1-3）- 3 -D 葡聚
糖污染；
8.2 某些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；
8.3 G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物；
8.4 手术后使用纱布。
9. 假阴性因素
9.1 不敏感菌：某些真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3 ）- 3 -D葡聚糖成分；隐
球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3 ）- 3 -D葡聚糖释放不出，这些真菌G试验不能检测。有临床症状，但G试验阴性时，临床医生可考虑这两种真菌感染的可能。
9.2 定植菌：研究显示，定植真菌不引起患者血液的（1-3 ）- 3 -D葡聚糖升高，即使是严重定植。
因此G试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。
10. 结果分析
11. 反应曲线分析
集通信表2反应分析曲线
异常的真菌阳性曲线 走势呈“S'形，曲线 前段突然下降，曲线后 段趋平，曲线终点的RT 值较高。
1、异常的真菌阳性曲线一般是临床用药产生的干扰，建议排除干扰后重新检测;
2、 对达限时间短（＜700s ），测量值高（＞6000pg/ml ）的阳性结果，应做反应曲线分析;
3、 为对患者负责，建议对检测阳性结果都做反应曲线分析。
12. 注意事项
12.1预热采集 在进行试验之前，LKM 动态试管检测仪一定要提前预热
30分钟左右，使其达到工
作温度37C 后，打开检测软件连接试管仪，在加样反应前点击“开始”按钮，使软件进入待 采集状态。
12.2取样与保存
①可检测的样本：血液、尿液、腹水等；②采集要求：采样过程要求无菌操作，
无热原真空采血管采血；③保存：样品采集后应在半小时内离心，若 4小时内不用，可分离
出血浆置-20C 以下冰箱中进行冷冻保存
30天。
12.3样本预处理及加样反应
①采有血液的无热原真空采血管应以 400g 离心10分钟；②取已分
光模块安装离的血浆上清液的中部；③75°C 加热应为时间10分钟，加热完毕后冷却至室温；④插管要 一次性插到底，插入后不能再触碰；⑤每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔；⑥可 在插入管反应后再填写相关的试验信息，但一定要在试验结束前填写，否则数据将不保存。
13?临床意义
13.1 G 试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病（ IFD ），可用于真菌感染早期筛查；
13.2适用于念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌，毛孢子菌等侵袭性感染检测，
不适用于检测隐球菌和接合菌感染；
13.3与GM 式验（半乳甘露聚糖检测）联合可区分曲霉菌或其他真菌感染； 13.4高危患者建议每周检测 2-3次。 参考文献 1.真菌（1-3）-
3 -D 葡聚糖检测试剂盒说明书。
正常的真菌阳性曲线
发光模组异常的真菌阳性曲线
正常的真菌阳 性曲线走势呈 反“S'形，曲 线终点的RT 值 较低。
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