毕业论文
专业：生物技术及应用
班级：生物技术及应用0931班姓名：
学号：
指导教师：
2012年03 月30
山东职业学院
毕业设计（论文）任务书
班级学生姓名指导教师
设计（论文）题目浅析培养条件对大肠杆菌的生长和和rhG-CSF表达的影响
主要研究内容
培养条件对大肠杆菌的生长和rhG-CSF表达的影响。主要从温度，PH值，溶解氧，接种量，培养时间，摇床的转速，工程菌生长时间机诱导时间的对照实验，来
研究大肠杆菌的生长和表达的条件。根据研究的结论，进一步分析大肠杆菌在生物
药品生产中的应用最佳条件。
主要技术指标或研究目标
借鉴了大量的著名专家的文献，以文献的知识为主线。严格每一步的操作。逐
一研究大肠杆菌的生活条件，对照实验结果，得出更严谨的数据。
通过试验得到利于大肠杆菌生长的营养环境和rhG-CSF表达的最佳环境条件，用来提高大肠杆菌工程菌生长和目标蛋白表达，进一步的缩短生产周期，降低生产成本，
为大肠杆菌表达的目的蛋白大规模生产奠定最坚实的基础。
基本要求
严格根据实验步骤合理安排实验，每个实验都设立3个对照，使实验结果更具有说服力，真实可行。
主要参考资料及文献[1]杨炜，王伟刚，田海英，等．重组大肠杆菌高表达高密度发酵研究[J]．生物技术2006
[2]郑大勇，罗荣城．蔡红兵．基因工程抗体anti?HBsAgFab原核表达体系大规模培养条件的实验研究[J]．第一军医大学学报，2004
[3]霍向东，石玉瑚．大肠杆菌高密度发酵补料调控策略的研究进展[J]．新疆农业科学。2004
[4]张嗣良．发酵过程多水平问题及其生物反应器装置技术研究, 基于过程参数相关的发酵过程优化与放大技术[J]．中国工程科学．2001
目录
1前言...............................- 3 - 1.1简述.. (1)
2材料与方法 (1)
2.1菌种························错误！未定义书签。
2.2试剂 (2)预应力电杆
2.3培养基及组成成分添加 (2)
2.4培养方法 (2)
2.4.1摇瓶发酵 (3)
2.4.2种子罐培养 (3)
3 培养条件对工程菌的生长和 rhG-CSF 表达的影响 (3)
3.1培养温度 (3)
3.2PH值 (3)
3.3溶解氧 (3)
3.4接种量 (3)
3.5培养时间 (4)
3.6 转速 (4)
3.7工程菌的生长时间及诱导时机 (4)
4 OD 值的测定....................错误！未定义书签。5结果与分析. (4)酚醛纸板
5.1培养温度的测定 (4)
5.2 PH值的测定 (4)
5.3溶氧量对菌体生长的影响 (5)
5.4接种量的影响 (5)
5.5培养时间的测定 (5)
5.6转速的测定 (5)
5.7工程菌的生长曲线及诱导时机对工程菌生长和rhG-CSF表达的影响错误！未定义书签。
6小结与讨论 (5)
参考文献 (7)
谢辞 (7)
摘要
利用大肠杆菌生产药品是一种生物方法：即利用生物工程技术将外源基因转入大肠
杆菌中，经过发酵培养使之表达，经过离心收集菌体，再用特定的溶液使菌体破碎后收
集目的蛋白，在经过后续的一些处理制成药品。
从菌种选择方面进行研究。工业生产用的菌株是在生物工程技术不断筛选后被挑选
u盘外壳
出的菌株。选取表达量最高的克隆菌作为发酵用菌种，基因工程菌为大肠杆菌DH5α/pBV220。
为了提高大肠杆菌工程菌生长和目标蛋白表达，缩短生产周期，降低生产成本，进
行了单因子试验。试验分别从培养温度、pH值、溶解氧、接种量、培养时间、转数、诱
导时机等方面对rhG-CSF 表达的影响进行了逐一研究。通过试验我们得到了大肠杆菌在10L发酵罐培养的最佳营养条件和最佳环境条件。通过试验得出的结果培养大肠杆菌，
在不同时间段测其OD600nm值，得出最佳诱导时机。利用得到的结果，结合药品GMP原则，从而得到了大肠杆菌工业化生产工艺，为大肠杆菌表达的目的蛋白大规模生产奠定
基础。
关键词：
大肠杆菌；发酵；目的蛋白
1前言
1.1简述
大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)为革兰氏阴性短杆菌，又称肠埃希氏菌。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。主要生活在大肠内。培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫，并有金属
光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。
在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子。同时可以有多个环状质粒DNA。大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料。大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核
有拟核；大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
电子胶带>卡环弯制
大肠杆菌细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。作为外源基因表达的宿主，
大肠杆菌遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，繁殖迅速，大规模发酵经济，
倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效
表达的首选体系，是生物学上重要的实验材料。
1.2重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）
重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF），是应用基因重组工程技术制成的一种蛋白质，作为粒系祖细胞及成熟中性粒细胞表面的特异性受体结合，促进前者的增殖分化并
增强后者的功能(包括趋化性、吞噬和杀伤功能等)。本蛋白还可促进髓系造血祖细胞的增殖、分化和成熟，调节中性粒细胞系的增殖与分化成熟；也可驱使中性粒细胞释放至
多肽药物合成
血流，使外周中性粒细胞数量增多。
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