【目的要求】
1.了解培养基的概念、种类及用途
2.了解培养基的配制原理及其常规配制程序
3.学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。
【基本原理】
培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质,主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然界中微生物种类繁多,营养类型多样,加之实验和研究的目的不同,所以培养基种类很多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外,为了满足微生物生长繁殖的要求,还必须控制培养基的pH值。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基,属于半合成培养基。高氏一号培养基是
一种用于培养放线菌的合成培养基。马丁氏培养基和豆芽汁葡萄糖培养基分别用于霉菌和酵母菌的分离培养。
【材料与用品】
1.材料与试剂
国徽制作牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、美臀坐垫K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液(1mol/L)。
【仪器与用品】
天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。
一、肉膏蛋白胨培养基的配制
1.培养基成分
牛肉膏 0. 3g
蛋白陈 1g
NaCl 0.5g
琼脂 1.5g
水 100ml
pH 7.2~7.4
2.配制方法
(1)称量及溶化:分别称取蛋白胨和NaCl的所需量,置于唐瓷缸中,加入所需水量的2/3左右的蒸馏水;用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中,进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中,加热融化,倒入上述唐瓷缸中。将唐瓷缸加热,用玻璃棒搅拌,使药品全部溶化。 (2)加琼脂:加入所需量的琼脂,加热融化。
(3)定容:将溶液倒入量筒中,补充水量至所需体积。
(4)调pH:待溶液冷至室温时,用1mol/l NaOH溶液调pH至7.2~7.4。
(5)分装、加塞、包扎。
(6古马隆树脂)高压蒸汽灭菌20分钟。
待培养基冷却至50℃左右时,倒入已灭菌的培养皿中,等到培养基完全凝固后,放入冰箱中保存。
二、高氏一号培养基的配制
1.培养基成分
可溶性淀粉 20g
KNO3 1g
NaCl 0.5g
K2HPO4 0.5g
MgSO4 0.5g
FeSO4 0.01g
琼脂 20g
水 1000ml
pH 7.2~7.4
2.配制方法
(1)称量及溶化:量取所需水量的2/3左右加入到搪瓷缸中,加热至沸腾。称量可溶性淀粉,置于另一小烧杯中,加入少量冷水,将淀粉调成糊状,然后到如上述沸水的搪瓷缸中,继续加热,使淀粉完全融化。分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4、MgSO4,依次逐一加入水中溶解。
苯乙烯树脂
(2)加琼脂:加入所需量的琼脂,加热融化。
(3)定容:将溶液倒入量筒中,补充水量至所需体积。
(4)调pH:待溶液冷至室温时,用1mol/l NaOH溶液调pH至7.2~7.4。
(5)分装、加塞、包扎。
(6)高压蒸汽灭菌20分钟。
待培养基冷却至50℃左右时,倒入已灭菌的培养皿中,等到培养基完全凝固后,放入冰箱中保存。
三、马丁氏培养基的配制
1.培养基成分
pvc覆膜胶水
葡萄糖 10g
蛋白胨 5g
K2HPO4 1g
MgSO4•7H2O 0.5g
琼脂 16g
水 1000ml
链霉素溶液(10000U/ml) 3.3ml(临用前加入)的
2.配制方法
(1)称量:称取培养基各成分的所需量。
(2)溶化:在搪瓷缸中加入约2/3所需水量,然后依次逐一加入并溶化培养基各成分,再按1000ml培养基加入3.3ml的0.1%孟加拉红溶液。
(3)加琼脂:加入所需量的琼脂,加热融化。
(4)定容:将溶液倒入量筒中,补充水量至所需体积。
(5)分装、加塞、包扎。
(6)高压蒸汽灭菌20分钟。
(7)临用前,加热融化培养基,待冷却至60℃左右,按每1000ml培养基以无菌操作加入3.3ml的链霉素溶液,迅速混匀。
四、豆芽汁葡萄糖培养基的配制
水泥增强剂配方1.培养基成分
黄豆芽 10g
葡萄糖 5g
水 100ml