中国食品药品检定研究院硕士研究生学位论文
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学号： ***************
专业：免疫学
研究方向：药理
导师姓名：高华
二零一二年 六月
蝶型弹簧中国食品药品检定研究院硕士研究生学位论文
硕士学位论文：
不同来源动物全血或单核细胞以及人源单核细胞系体外热原检测的方法学研究
学生：秦媛媛
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中国食品药品检定研究院
中国食品药品检定研究院硕士研究生学位论文
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目录
中文摘要 (1)
胎压监测装置ABSTRACT (3)
缩略语表 (6)
前言 (7)
第一章大鼠全血及其外周血单核细胞体外检测热原的可行性研究 (10) 第一节大鼠全血- TNF-α法检测热原的可行性研究 (11)
第二节大鼠外周血单核细胞法检测热原的可行性研究 (14)
第三节本章小结 (20)
第二章猪全血法体外检测热原的可行性研究 (21)
第一节猪全血—IL-1β、IL-6法用于热原检测的可行性研究 (21)
第二节猪全血—IL-1β、IL-6法对细菌内毒素的最低检测限及线性关系研究 (26)
第三节本章小结 (31)
第三章家兔外周血单核细胞法体外检测热原的可行性研究 (33)
第四章人源单核细胞系THP1体外检测热原的可行性研究 (41)
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第一节 THP1-TNF-α法检测热原的可行性研究 (41)
第二节 THP1-Neo检测热原的可行性研究 (46)
第三节本章小结 (50)
第五章人源单核细胞系28SC体外检测热原的可行性研究 (52)
第一节 28SC热原检测体系的建立 (53)
第二节28S C热原检测体系对细菌内毒素的最低检测限以及线性关系研究 (66)
第三节传代次数对28SC热原检测稳定性的影响 (70)
第四节 28SC体系对热原复合物的应用研究 (75)
第五节 28SC体系对BET法不合格样品b型流感疫苗的应用研究 (81)
第六节本章小结 (87)
中国食品药品检定研究院硕士研究生学位论文
第六章论文结论 (88)
创新点 (90)
参考文献 (91)
附表试验相关试剂细菌内毒素含量测定结果 (93)
已发表文章 (94)
综述三类体外热原检测方法的研究进展 (95)
致谢 (106)
版权声明 (107)
中国食品药品检定研究院硕士研究生学位论文
中文摘要
目的：本课题以人体发热机理为试验原理，研究二类体外模型：①动物全血及单核细胞，②人源单核细胞系，考察它们用于检测热原的可行性，以期建立新的体外热原检测体系，并对其进行应用研究。
方法：(1)采用大鼠全血，以细胞因子（TNF-α）为检测指标；采用大鼠外周血单核细胞，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标；(2)采用猪全血，以细胞因子（IL-1β、IL-6）为检测指标；(3)采用家兔外周血单核细胞，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标；(4)采用人源单核细胞系THP1，以TNF-α（THP1细胞液V：热原样品V=4:1及1:1）和Neo（THP1细胞液V：热原样品V=4:1）为检测指标；(5)采用人源单核细胞系28SC，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标，考察无活化物存在以及活化物calcitriol浓度为10、100ng/ml时活化28SC后对各类热原的反应活性，确定检测指标以及活化物calcitriol的浓度，建立28SC热原检测体系，及研究不同传代次数（15、45代）对28SC稳定性的影响；(6)采用本实验室构建的热原复合物和内毒素法检查不合格的样品b型流感疫苗，对人源单核细胞系28SC进行应用性研究。
对上述试验进行热原检测的可行性研究。
结果：(1)大鼠全血-TNF-α-法，大鼠外周血单核细胞-IL-1β、IL-6法对LPS不能检测到0.5EU/ml（前期结果表明，LPS引起家兔体温升高0.6℃的最小浓度为0.5EU/ml），不适用于检测热原；大鼠外周血单核细胞-TNF-α法，对LPS可检测到0.25EU/ml，适用于检测热原；(2)猪全血-IL-1β法对LPS的最低检测限为0.125EU/ml，线性范围为0.0125~0.5EU/ml，R=0.9754；猪全血-IL-6法对LPS的最低检测限为0.0625EU/ml，线性范围为0.0625~0.5EU/ml，R=0.9959，猪全血-IL-1β、IL-6法适用于检测热原；(3)兔外周血单核细胞-IL-1β、IL-6、TNF-α法对LPS不能检测到0.5EU/ml，不适用于检测热原；(4) THP1-TNF-α法的两种孵育体系对LPS 均不能检测到0.5EU/ml；THP1-Neo法对LPS不能检测到0.5EU/ml，两种指标均不适用于检测热原；(5)无活化物存在时，28SC-IL-1β、IL-6、TNF-α法对LPS不能检测到0.5EU/ml；活化物calcitriol浓度为10ng/ml时，28SC- IL-1β、TNF-α法对
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