薄层层析和纸谱操作注意事项
一、应用：薄层谱是一种微量、快速、简便的分析方法。适用于微量样品的分离、鉴定和制备。在中药制剂制备过程中，经适宜的工艺来取舍处方中各药材的各类成分，从而达到保持或改变药物作用性质或降低其毒副作用的目的。而薄层谱法具有分离与鉴定的双重功能，通过薄层图谱与对照品、对照药材的图谱相比较，除了能鉴出有效成分或特征成分外，还以完整的谱图作为一个整体对制剂加以鉴别，提高了鉴别的准确性，尤其当有效成分尚不确切时，更显示出薄层谱法的实用性。薄层谱分析法由于适合国情、简便、快速，能有效地、直观地反映药品地真实性、稳定性，现已成为中药制剂的鉴别和质量控制的行之有效的方法之一。操作二、操作要点：
（一）薄层层析
1、铺制薄层板：将吸附剂1份和水2.5-3.0份（或加入黏合剂的水溶液）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），颠板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透视光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于100-110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用。
2、点样：用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 注：在薄层谱中，样品的用量对物质的分离效果有很大影响，所需样品的量与显剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。样品太少，斑点不清楚，难以观察，但样品量太多时往往出现斑点太大或拖尾现象，以至不易分开。
3、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8～15cm），取出薄层板，晾干，待检测。
注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15－30分钟。
4、显与检视供试品含有可见光下有颜的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显剂显，或加热显，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光谱。对于可见光下无，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的谱。
薄层谱法标准操作规程
依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
内容：
1 简述：薄层谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：
2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏
（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5
用电监控
—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定
外，底部应平整光滑，应便于观察。
3 操作方法：
3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除
表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），
取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂
的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，
点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检
出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条
与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操
作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—
1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取
出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对谱斑点作扫描检出，或
支脚直接在薄层上对谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，
可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双
波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓
度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算
定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层谱，才能获得满意的
结果。
4 注意事项：
4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。
4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥
箱或干燥器中备用。
4.3 点样点一般为圆点，不能太大。
薄层谱分析步骤及注意事项
薄层谱法(thin layer chromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。
⑴制板
在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。称取适量硅胶，加入
0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样
用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开智能美甲
tsmm将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、
宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。
③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。
④展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。
⑤展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。聚乙烯醇树脂
⑥展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。
⑦Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。
⑷斑点的检出
展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显剂显检出斑点。对于无组分，在用显剂时，显剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。个人飞行器
展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。
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