生 化 需 氧 量（BOD5）
稀 释 与 接 种 法
GB7488--87
生活污水与工业废水中含有大量各类有机物。当其污染水域后，这些有机物在水体中分解时要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。水体因缺氧造成鱼类及其它水生生物的死亡。 水体中含有的有机物成分复杂，难以一一测定其成分。人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧，来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。
测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。在0—4℃下进行保存。一般应在6小时内进行分析。若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时间不应超过24小时。
概 述
1．方法原理
毛发生长剂生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质、特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。此生物氧化全过程进行的时间很长，如在20℃培养时，完成此过程需100多天。目前国内外普遍规定于20±1℃培养5d，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升（mg/L）表示。
对某些地面水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。稀释的程度应使培养中所消耗的溶解氧大于2mg/L，而剩余溶解氧在1 mg/L以上。
为了保证水样稀释后有足够的溶解氧，稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气），以便稀释水中溶解氧接近饱和。稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质（磷酸盐、钙、镁和铁盐等），以保证微生物生长的需要。
对于不含或少含微生物的工业废水，其中包括酸性废水、碱性废水、高温废水或经过氯化
处理的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在着难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
本方法适用于测定BOD5大于或等于2mg/L，最大不超过6000 mg/L的水样。当水样BOD5大于6000 mg/L，会因稀释带来一定的误差。
仪 器
（1）恒温培养箱（20℃±1℃）
（2）5—20L细口玻璃瓶
（3）1000—2000ml量筒
（4）玻璃搅棒：棒的长度应比所用量筒高度长200mm。在棒的底端固定一个直径比量筒底小、并带有几个小孔的硬橡胶板。
（5）溶解氧瓶：250ml到300ml之间，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。
（6）虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。
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试 剂
1．磷酸盐缓冲溶液
将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4硝酸钙溶液 · 7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000ml。此溶液的pH应为7.2。
2．硫酸镁溶液
将22.5g七水合硫酸镁（MgSO4 · 7H2O）溶于水中，稀释至1000ml。
3．氯化钙溶液
将27.5g无水氯化钙溶于水中，稀释至1000ml。
4．氯化铁溶液
将0.25g六水合氯化铁（FeCl3 · 6H2O）溶于水中，稀释至1000ml。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)
将40ml盐酸（ρ=1.18 g/ml）溶于水中，稀释至1000ml。
6．氢氧化钠溶液（0.5mol/L）
将20g氢氧化钠溶于水中，稀释至1000ml。
7．亚硫酸钠溶液（1/2Na2SO3=0.025局部镀锡mol/L）
将1.575g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000ml。此溶液不稳定，需每天配制。
8．葡萄糖—谷氨酸标准溶液
将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸（HOOC—CH2—CH2—CHNH2—双立柱卧式带锯床脚底按摩鞋COOH）在103℃干燥1h后，各称取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。
9．稀释水
在5—20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将吸入的空气先后经活性炭吸附管及水洗涤管后，导入稀释水内曝气2—8h，使稀释水中的溶解氧接近于饱和。停止曝气亦可导入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8mg/L左右。临用前每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸缓冲溶液各1ml，并混合均匀。
稀释水的pH应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。
10．接种液
可选择以下任一方法，以获得适用的接种液。
（1）城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上清液供用。
（2）表层土壤浸出液，取100g花园或植物生长土壤，加入1L水，混合并静止10min。取上清液供用。
（3）用含城市污水的河水或湖水。
（4）污水处理厂的出水。
（5）当分析含有难于降解物质的废水时，在其排污口下游3—8km处取水样作为废水的驯化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3—8d。
11．接种稀释水
分取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1—10ml；或表层土壤浸出液20—30ml；或河水、湖水10—100ml。
接种稀释水的pH值应为7.2，BOD5值以在0.3—1.0 mg/L之间为宜。接种稀释水配制后应立即使用。
步 骤
1．水样的预处理
（1）水样的pH值若超出6.5—7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸进行中和。
（2）水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物的浓度。
（3）含有少量游离氯的水样，一般放置1—2h，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。其加入量由下述方法决定。
取已中和好的水样100ml，加入1+1乙酸10ml，10%（m/V）碘化钾溶液1ml，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠溶液滴定游离碘。由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加入亚硫酸钠溶液的量。
（4）从水温较低的水域或富营养化的湖泊中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，在不使满瓶的情况下，充分振摇，并时时开塞放气，以赶
出过饱和的溶解氧。
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