冰冻切片免疫荧光染流程

(表面分子，以CD4为例)蚊帐圆顶

（1）冰冻切片室温晾干15分钟；

（2）用组化油笔将待染组织圈好，置PBS中浸泡10分钟，以去除OCT；

（3）用含10％正常山羊血清的PBS室温封闭切片1小时（此步可以不洗涤，把封闭液吸干即可）；

（4）加入CD4单抗(1:100; SeroTec, Inc, Raleigh, NC, USA)，4℃孵育过夜；

（5）PBS洗3次，每次10分钟；

（6）加入罗丹明标记的羊抗小鼠的IgG二抗(1:50; Sigma公司)，37℃孵育1小时；

（7）PBS洗3次，每次15分钟；

（8）封片后，荧光显微镜观察结果并拍照；氮气压力表

（9）在每切片中随机选择5个视野计数阳性细胞数。

不倒翁玩具注意事项：

（1）整个实验过程中勿使表面干燥

（2）稀释、加二抗（荧光抗体）及此后的洗涤过程中注意避光附注1：如目的分子为胞内分子，各种液体中需要加透膜剂

0.3%TrixtonX100。

附注2：所用液体（表面分子染不用

0.3%TrixtonX100）：

曼越橘（1）pH

7.4

0.01MPBS：

配方为：

继电器控制模块

0.1MPBS 100ml+ddH2O 900ml+NaCl

7.65g

0.1MPBS配方为：

Na2HPO4 23g+NaH2PO4﹒2H2O

5.9g+NaCl 17g定容至2000ml,高压，pH

7.2-

7.4

（2）洗涤液：

0.3%TrixtonX100－pH

7.4

0.01MPBS，分装15ml/支－20℃保存菊花链逻辑

（3）封闭液：10％NGS－

0.3%TrixtonX100－pH

7.4

0.01MPBS，分装

1.2ml/支－20℃保存

（4）抗体稀释液：1％BSA－

0.3%TrixtonX100－pH

7.4

0.01MPBS，分装1ml/支－20℃保存

本文发布于:2024-09-22 20:33:39，感谢您对本站的认可！

标签：分子荧光切片室温液体

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