一、流式细胞术常用试剂1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入0.2ml 10％的NaN3。3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA•Na2•2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％ EDTA的混合液。 6、红细胞裂解液：NH4Cl 4.16g，KHCO3 0.5g，EDTA•2Na 0.02g，溶于100ml水中，调PH至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（PH 7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH 7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma的效果不错）。9、流式细胞染洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH 7.4）。10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5ml PI染液。 11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）
原液A
NaCl 160g
MgSO4•7H2O 2g
KCl 8g
MgCl•6H2O 2g
CaCl2 2.8g
溶于1000ml双蒸水
原液B
1）Na2HPO4•12H2O 3.04g
KH2PO4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml双蒸水
2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，逐滴加入0.1N NaOH并研磨，直至完全溶
解，约加入0.1N NaOH 10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。
将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml即为原液B。
应用液：
原液A 1份
原液B 1份
双蒸水 18份
混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的5.6％NaHCO3调PH至7.2～7.6。
12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）
A液（0.2mol/L NaH2PO4水溶液）：
NaH2PO4•H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。医用材料与应用
B液（0.2mol/L Na2HPO4水溶液）：
Na2HPO4•7H2O 53.6g 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
不同PH值PB的配制：
A液xml（参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/L PB。
PH x/ml y/ml
5.7 93.5 6.5
5.8 92.0 8.0
5.9 90.0 10.0
6.0 87.7 12.3
6.1 85.0 15.0
6.2 81.5 18.5
6.3 77.5 22.5
6.4 73.5 26.5
边坡滑模施工
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 37.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51.0 49.0
6.9 45.0 55.0
7.0 39.0 61.0
7.1 33.0 67.0
7.2 28.0 72.0
7.3 23.0 77.0
7.4 19.0 81.0
7.5 16.0 84.0
7.6 13.0 87.0
7.7 10.0 90.0
7.8 8.50 91.0
7.9 7.00 93.0
8.0 5.30 94.7
13、PBS的配制
配制PBS，只要在相应的PB基液中加入8.5g/L NaCl即可。
二、常用激活剂
1、激活剂PMA：用DMSO配制成0.1mg/ml，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：100稀释储存液，终浓度为20ng/ml。
陶粒砂过滤2、激活剂离子霉素：用乙醇配制成浓度为0.5mg/ml的储存液，－20度保存。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，终浓度为1ug/ml。
3、Staphylococcal enterotoxin B(SEB) ：用无菌无叠氮钠PBS调节浓度0.5mg/mL，4℃储存，SEB终浓度10ug/mL。
4、CD3：包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞。5、CD28：加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。6、阻断剂Bregeldin A：用DMSO配制成浓度为5mg/ml的储存液，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，在激活过程最后4～5小时使用BFA，终浓度为10ug/ml。7、阻断剂莫能菌素：用DMSO配制成浓度为1mg/ml的储存液，4℃储存至少4个月，实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，终浓度为2umol/L。三、常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC：激发波长488nm，最大发射波长525nm。 1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）可用于荧光显微镜技术4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。2、Alexa Fluor 488：激发波长488nm，最大发射波长519nm。1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术；4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4～10）。3、Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）适用于荧光显微镜技术； 4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。
悬浮机器人4、Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL4通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE：激发波长488nm，最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR：激发波长488nm，最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610：激发波长488nm，最大发射波长628nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）荧光强度高；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor 647：激发波长488nm，最大发射波长668nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）不易湮灭；
3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
9、PE-Cy5：激发波长488nm，最大发射波长670nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4)可与FITC、PE搭配，荧光干扰小、补偿小，但不宜与APC搭配。液压软管接头
5）与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、PE-Cy5.5：激发波长488nm，最大发射波长694nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4)可与FITC、PE、APC搭配，荧光干扰小、补偿小，是APC比较理想的搭配。
11、PE-Alexa Fluor 700：激发波长488nm，最大发射波长723nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）光淬灭性很强，要绝对避光。
12、PE-Cy7：激发波长488nm，最大发射波长767nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）光淬灭性很强，要绝对避光；立式干粉搅拌机
4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小，补偿小，是比较理想的搭配。
13、TR：激发波长595nm，最大发射波长615nm。
1）其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪；
2）荧光不易淬灭，可用于荧光显微镜。
14、APC：激发波长633/635nm，最大发射波长660nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）在BD细胞仪的FL4通道检测，在Beckman Coulter细胞仪只有配备双激光器的FC500才能检测到。
15、APC-Cy5.5：激发波长633/635nm，最大发射波长668nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）主要用于四以上的流式细胞术。
16：PerCP：激发波长488nm，最大发射波长677nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）可于FITC、PE搭配，荧光光谱重叠少，对随细胞的特异性结合少，但量子产量较低，适用于较高表达物的检测。
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