EBER原位杂交过程
预先准备的试剂
胃酶浓缩液：将胃酶中加入4毫升的蒸馏水或去离子水，充分溶解后可根据使用量分装，冻存（-20℃）。
胃酶稀释液：石蜡切片：将试剂瓶中的1N HCl 用蒸馏水或去离子水10倍稀释，即成0.1N HCl 溶液 双柱汽车举升机PBS配制：将一袋PBS粉末溶于1000毫升双蒸水，彻底溶解后加入Tween 20 5滴，混匀后使用。能效监测终端
DAB工作液配制：在1毫升5A中加入50微升的5B，临用前配制，未用完的液体应弃去。也可按照上述比例，根据实际需要量配制。 胃酶消化工作液的配制
每1cm2的切片按照300-400微升准备胃酶消化工作液，必须现用现配，未用完的胃酶工作液应弃去。
石蜡切片：将上述已分装好的胃酶浓缩液用已稀释至0.1N的HCl溶液100倍稀释，例如可将15微升的分装胃酶浓缩液加入到 1.5ml的0.1N HCl溶液中，混匀后备用。
scop-369
所有的孵育步骤均应在密闭的湿盒中进行，避免试剂蒸发。一旦杂交程序开始，玻片不能干燥。
醋酸乙酯生产样品的收集和预处理
石蜡切片：
常规福尔马林缓冲液固定，时间不宜超过12小时。石蜡包埋的温度不宜超过65℃。4-6微米的石蜡切片，56-60℃烤片2-16小时。处理好的切片可以立即使用，也可放置于室温条件下保存（至少可保存3个月以上）。在做原位杂交之前，切片需经新鲜二甲苯脱蜡（10分钟×2）。脱蜡后的切片在新鲜100%乙醇中放置5分钟后，经空气干燥5-10分钟即可进行酶处理。
酶处理（避免RNA酶污染，带手套操作）
将切片放置于37℃中，每张切片加入300-400微升新鲜配制的胃酶工作液孵育。石蜡切片孵育30分钟。弃去胃酶工作液后，逐级酒精脱水（70%、95%和100%），每个梯度放置1分钟。空气干燥后杂交。
杂交程序（避免RNA酶污染，带手套操作）杂交：
混匀探针溶液，在每张切片上加10-20微升适量的探针（试剂3），加盖盖玻片（注意防止气泡！）。湿盒中37℃孵育2小时，杂交过夜效果更好。冲洗：
将切片浸入PBS缓冲液中10分钟，直到盖玻片自然脱落，用PBS缓冲液冲洗切片2分钟×3次，取出切片，擦干多余的缓冲液。
检测和显程序
切片上加入适量辣根过氧化物酶标记的抗抗体（试剂4），37℃孵育30分钟，PBS冲洗1分钟×3次（期间可摇动容器数次），用蒸馏水或去离子水冲洗切片1分钟×1次。
擦净切片边缘的水分，加入适量配制好的DAB 工作液。显5-15分钟，注意光镜下观察显情况。用蒸馏水或去离子水冲洗切片1分钟×3次后，即可进行封片或复染。
复染程序
物联网电池可苏木素复染，染约5-10秒。用蒸馏水或去离子水短时间冲洗，常规脱水、透明，封片。
无阳性表达可能原因：
1．塑料制品：尽可能使用无菌、一次性塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品，如没有开
自动泄压阀
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