第二节 血液生化检验
血液生化检验主要用血浆和血清。目前，在临床检验中多采用检验试条或试剂盒，或干式、湿式生化仪。根据仪器的自动化程度分为全自动生化仪和半自动生化仪。血液生化检验绝大部分都是使用仪器、试剂盒或试条检验。这里主要介绍部分检验项目的自配试剂和试验步骤。 一、血糖测定
血糖指血液中的葡萄糖，正常情况下糖的分解代谢与合成代谢保持动态平衡，血糖的浓度相对稳定，病理状态下血糖浓度的改变对于判断糖代谢的异常及相关疾病的诊断有重要意义。目前常用邻甲苯胺法测定血糖。
（一）原理
己醛糖溶液在酸性与加热情况下脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级蓝席夫氏碱，其颜深浅与葡萄糖含量成正比。 （二）试剂
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1．邻甲苯胺硼酸溶液：称取硫脲1.5 g溶于冰醋酸883.2 mL，再加邻甲苯胺76.8 mL，混合后加入6%饱和硼酸溶液40 mL，充分混匀，置于棕瓶备用，可保存数月。
饱和硼酸溶液：称取硼酸6 g，溶于100 mL蒸馏水中，放置一夜过滤即可应用。
2．葡萄糖标准贮存液(1mL＝10 mg)： 精确称取葡萄糖1.0 g，加0.25%苯甲酸(安息香酸)溶液至100 mL。 3．葡萄糖标准应用液(1mL＝1mg)：用0.25%苯甲酸溶液将贮存液作10倍稀释。
（三）方法
按表2.10操作。
表2.10 操作方法 （单位：mL）
标准管 测定管
血清 — 0.1
葡萄糖标准应用液 0.1 —
邻甲苯胺硼酸试剂 5.0 5.0
置100℃水浴加温5~8 min，冷水冷却，在30 min内用520~620 nm滤光板比，用蒸馏水做空白。
（四）计算 小学生文具盒
测定管光密度/标准管光密度×100＝白糖值(mg/100 mL)。
（五）正常值 见表2.11。
表2.11 健康家畜血糖正常值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 资料来源
牛 67.46 52.76~84.89 成都市乳品公司等
犊牛 60.68 60.8~108.52 成都市乳品公司等
水牛 58.02 51.0~85.0 江苏农科院
绵羊 35~60 Kaneko
仔猪(断奶) 90.90 48.50~133.80 山西忻县地区牧医所
马 93.00 68.00~118.00 军需大学
犬 70~100 Bloom
猫 77~118 Bloom
（六）临床诊断价值
1.血糖升高
(1)生理性或一时性升高 如单胃动物饲后2~4 h、精神紧张、兴奋、对动物的强制保定、疼痛以及注射可的松类药物等。
(2)病理性升高 见于糖尿病(犬、猫)、胰腺炎、酸中毒、癫痫、抽搐、脑内损伤，肾上腺皮质功能亢进、甲状腺功能亢进及濒死期等。
2.血糖降低
见于胰岛素分泌增多、肾上腺皮质功能不全、甲状腺功能减退、坏死性肝炎、肝炎后期、消化吸收不良性的胃肠炎、饥饿、衰竭症、慢性贫血、牛酮血症、母羊妊娠病、仔猪低血糖症、功能性低血糖症及毒物中毒等。
二、血清钾测定(四
苯硼钠比浊法)
（一）原理
血清中钾离子与四苯硼钠作用，形成不溶于水的四苯硼钾，它的浊度与钾离子的浓度成正比，根据浊度可测得血清钾的含量。
（二）试剂
缓冲液；1%四苯硼钠溶液；钾标准贮存液(1 mL＝2 mg钾)；钾标准应用液(1 mL＝0.02 mg钾)。
（三）方法
血清0.2 mL加入重蒸馏水1.4 mL，10%钨酸钠溶液0.2 mL及2/3N硫酸溶液0.2 mL，混匀。离心沉淀，取上清液按表2.12操作。
表2.12 血清钾测定操作步骤 (单位：mL)
步 骤 标 准 管 测 定 管 空 白 管
无蛋白上清液 — 1.0 —
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钾应用标准液(1 mL＝0.02 mg钾) 1.0 — —
重蒸馏水(mL) — — 1.0
1%四苯硼钠(mL) 4.0 4.0 4.0
混匀，5 min后用520 nm滤光板进行光电比，以空白管调零，分别读取各管读数。
（四）计算
测定管光密度/标准管光密度×0.02×100/0.1=测定管光密度/标准管光密度×20＝钾(mg/100mL)血清钾(mmol/L)＝钾(mg/100 mL)×10/39.1
钾(mg/100 mL)＝钾(mmol/L)×3.91
（五）正常值 见表2.13。
表2.13健康动物血清钾正常值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 资料来源
乳牛 19.71 16.0～27.1 西安市兽医院
水牛 20.02 13.28～24.74 扬州大学农学院
绵羊 21.07 15.24～21.11 Pugh
猪 18.88 17.20～26.19 Bertho等
马 12.91～25.11 广州部队军马防治所
犬 17.08～22.09 Robinson
猫 15.64～17.59 Albritton
（六）临床诊断价值
动物体内绝大部分钾存在于细胞内，是维持细胞活动的主要阳离子。细胞外液中一定浓度的钾盐含量，是维持肌肉神经的功能所必需。钾盐由肠道吸收，约90%由尿液排出体外。某些疾病可因钾摄取量过少或排出量过多，或排泄障碍使钾盐潴积，或在体内分布失常而形成钾增高或减低。
1.血清钾增高
主要见于肾上腺皮质功能减退；临床上补钾超量；肾脏疾病(排钾能力下降)；组织遭受损害；酸中毒；
m1卡休克；循环障碍；输血不当(引起血管内溶血，红细胞内的钾进入血液)；大量输注高渗盐水或甘露醇；脱水。
2.血清钾降低
主要见于给予利尿剂(尿钾排出增多)；长期使用较大剂量的肾上腺皮质激素，同时未能及时补钾；大量反复地输入不含钾盐的生理盐水等体液；代谢性酸中毒；严重腹泻或呕吐；肾上腺皮质机能亢进；脱水之后，大量饮水。
三、血清钠测定(醋酸铀镁试剂法)
（一）原理
血清钠离子与乙酸铀镁试剂作用，生成乙酸铀镁钠沉淀，以亚铁与试剂中剩余的乙酸铀作用，生成棕红的亚铁氰化铀。血清中的钠含量愈高，则剩余的乙酸铀愈少，显愈淡，反之则显愈深。由剩余的乙酸铀量，可以间接计算出血清钠的含量。
（二）试剂
醋酸铀镁试剂；1%冰醋酸溶液；10%亚铁溶液；钠贮存标准液
；钠应用淡标准液；钠应用浓标准液。
（三）方法 按表2.14操作。骨刺消痛膏
表2.14 血清钠测定操作步骤 （单位：mL）
步 骤 标 准 管 测 定 管 空 白 管
血清 — 0.1 —
钠应用淡标准液 0.1 — —
钠应用浓标准液 — — 0.1
醋酸铀镁试剂 5.0 5.0 5.0
充分混匀，放冰箱内10 min,2 500 r/min离心10 min
取上清液，分别注入另外3只试管 0.1 0.1 0.1
1%冰醋酸溶液 5.0 5.0 5.0
10%亚铁溶液 0.2 0.2 0.2
混匀，5～30 min内，以空白管调零，用520 nm滤光板或绿滤光板比，读取各管光密度。
（四）计算
250-(测定管光密度/标准管光密度×100)=mmol/L
mmol/L×2.3=钠mg/100 mL
（五）正常值 见表2.15。
表2.15 各种动物血清钠的正常数值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 资料来源
乳牛 350.98 338.1～373.98 西安市兽医院
水牛 262.79±58.65 扬州大学农学院
牛 319.7 310.5～328.9 Payne等
绵羊 319.7～349.6 Pugh
猪 328.69±58.39 扬州大学农学院
马 229.23 242.53～355.93 中国人民解放军军需大学
犬 335.8 319.7～351.9 Lane等
猫 351.9 345～358.8 Spector
（六）临床诊断价值
1.血清钠增高
主要见于输入过量的高渗盐水；食盐中毒(常见于猪)；严重脱水；长期使用肾上腺皮质激素药物；某些慢性疾病(如充血性心力衰竭、肝硬化及肾病等，常同时伴有水肿)。
2.血清钠降低
主要见于持续性腹泻(胃液丢失，失钠大于失水)；肾脏疾病；大出汗；胸、腹腔大量产生渗出液(反复穿刺放液，钠盐从渗出液中大量丢失)；使用利尿剂；水中毒(见于犊牛)。
四、血清氯化物测定(法)
（一）原理
以标准溶液滴定血清中的氯化物，用二苯卡巴腙作指示剂，与氯化物作用生成溶解而不离解的。当滴定到达终点时，过量中的汞离子与二苯卡巴腙作用，生成紫红的络合物。根据的用量，可求得样本中氯化物的含量。
（二）试剂
1 mol/L氯化钠当量溶液；氯化钠应用标准液(10 mmol/L)；0.1%二苯卡巴腙乙醇溶液；0.05 mol/L硝酸溶液；溶液。
（三）方法
1.取小试管1只，准确加入血清0.1 mL，加重蒸馏水1 mL，混匀，再加0.1%二苯卡巴腙溶液1滴，此时混合液呈“肉红”。加0.05 mol/L硝酸溶液1～2滴，颜随即消退。用装有溶液的微量滴定管进行滴定，待液体呈现紫红时即为终点，记录用量。
2．另取小试管1只，准确加入氯化钠应用标准液1 mL，也用溶液滴定，待液体呈现与测定管相同的或近似的紫红即为终点，记录用量。
（四）计算
滴定测定管消耗的溶液(mL)/滴定氯化钠标准管消耗的溶液(mL)×0.01×1 000/0.1＝血清氯化钠(mmol/L)
（五）正常值 见表2
.16。
表2.16 各种动物血清氯化物正常值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 资料来源
黄牛 595.6 487.64～704.28 甘肃农业大学
绵羊 555.75～602.55 Pugh
猪 602.55 585.0～614.25 Spector
马 622.80 580.50～665.22 中国人民解放军军需大学
犬 620.1 579.15～643.5 Spector
猫 702.0 684.45～719.55 Spector
鸡 171.34 106.42～236.26 甘肃农业大学
（六）临床诊断价值
1.血清氯化物增高
主要见于代谢性酸中毒；猪的食盐中毒；肾脏疾病；咽炎、食道梗塞(饮水障碍，血液浓稠，氯化物相对性升高)；肾上腺皮质机能亢进；循环障碍(肾血流量减少，氯化物自尿中排出量下降)。
2.血清氯化物降低
主要见于严重的腹泻；大出汗；长期饥饿、拒食；胃肠道大手术之后(胃肠液大量损失)；肾上腺皮质机能减退；肝硬变(化)。
五、血清钙测定
(一)高锰酸钾滴定法
1．原理
血清加草酸铵使钙沉淀为草酸钙，以氨液洗去多余的草酸铵，再加硫酸使草酸游离，用标准高锰酸钾液滴定，计算钙的含量。
2．试剂
4%草酸铵溶液；2%氢氧化铵溶液；1mol/L硫酸溶液；0.01mol/L草酸钠溶液；0.01mol/L高锰酸钾溶液(1mL＝0.2 mg钙)。
3．方法
（1）取血清1mL置于离心管，加蒸馏水3.0 mL、4%草酸铵液1 mL，混匀，静置30 min，以3 000 r/min的速度离心10 min。倾去上清液，将离心管倒置于滤纸上吸去管内残液。
（2）加2%氢氧化铵溶液4 mL于离心管内。以玻璃棒充分搅匀后，再离心沉淀5～10 min，倾去上清液。用同样方法再洗涤一次，倒置离心管于滤纸上5min。
（3）加当量硫酸溶液2mL，使管内沉淀物完全溶解。置于沸水中，使管内温度维持在75℃左右。
（4）以1 mL刻度吸管(最好用微量滴定管)，吸取0.01mol/L高锰酸钾溶液进行滴定，直至呈现微红为止，记录滴去的0.01 mol/L高锰酸钾溶液毫升数。
4．计算
钙（mg/100 mL）＝测定管滴定用去毫升数×校正系数×0.2×100/1
(二)EDTA滴定法
1．原理
血清钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂(calcon)结合成可溶性的络合物，使溶液显红。乙二胺四乙酸二钠对钙离子的亲和力大，能与该络合物中的钙离子结合，使指示剂重新游离在碱性溶液中显蓝。故以EDTA滴定时，溶液由红变蓝时，即表示终点的到达。以同样方法滴定已知钙含量的标准液，从而计算出血清钙的含量。其反应式可简写为：
EDTA=钠+Ca2+→EDTA钙+2Na+→2Na+
2．试剂
（1）钙标准液(1 mL＝0.1 mg钙) 取碳酸钙少量，置蒸发皿中，于110～120℃干燥2～4 h，移入硫酸干燥器中冷却。精确称取干燥碳酸钙250 mg于烧杯中，加蒸馏水40 mL及1 mol/L盐酸5 mL溶解，移入1 000 mL容量瓶，以蒸馏水洗烧杯数次，洗液一并倾入容量瓶，加蒸馏水稀释至1
000 mL。
高分散白炭黑（2）EDTA溶液 乙二胺四乙酸二钠150.0 mg，1 mol/L氢氧化钠溶液2.0 mL，蒸馏水加至1 000 mL。
（3）钙红指示剂 称取钙红(2-萘酚-4-磺酸-1-偶氮-2-羟基-3-萘甲酸)0.1 g，溶于甲醇20 mL中。
（4）0.2 mol/L氢氧化钠液。
3．方法 按表2.17操作。
表2.17 EDTA滴定血清钙操作步骤*
步 骤 标 准 管 测 定 管 空 白 管
血清(mL) — 0.2 —
钙标准液(mL) 0.2 — —
蒸馏水(mL) — — 0.2
0.2 mol/L氢氧化钠液(mL) 1.0 1.0 1.0
注：*分别加钙红指示剂1滴，立即用EDTA溶液滴定，至溶液呈浅蓝为止，记录各管所消耗的EDTA的用量。
4. 计算
钙（mg/100 mL）＝(测定管用量-空白管用量)/(标准管用量-空白管用量)×0.02×100/0.2
（三）正常值 见表2.18。
表2.18 各种动物血清钙正常值 （mg/100 mL）
动物 平均值 变动范围 测定方法 资料来源
牛(公) 11.61 11.42～11.85 EDTA法 西南民族学院牧医系
犊 11.45 11.14～11.71 EDTA法 西南民族学院牧医系
乳牛 11.57 9.71～12.14 EDTA法 西南民族学院牧医系
牦牛(泌乳) 8.91 7.30～11.30 EDTA法 西南民族学院牧医系
牦毛(母，育成) 9.03 7.70～10.50 EDTA法 西南民族学院牧医系
牦牛(犊) 9.58 8.10～11.80 EDTA法 西南民族学院牧医系
绵羊 12.16± 0.28 Hackett等
山羊 10.30± 0.70 Murty等
猪(母，妊) 10.11± 1.08 Simesen
小猪(断奶) 10.47 8.33～12.61 EDTA法 马“急性肠炎”研究组
仔猪(哺乳) 10.84 8.36～13.32 EDTA法 马“急性肠炎”研究组
马 12.09 11.11～13.07 高锰酸钾法 中国人民解放军军需大学
犬 10.16± 2.04 Eichelberger等
猫 8.22± 0.97 Bloom
（四）临床诊断价值
1. 血清钙增高
少见于原发性甲状腺机能亢进；假性甲状旁腺机能亢进(见于淋巴肉瘤)；维生素D中毒；骨内肿瘤转移；某些慢性疾病(如慢性肺气肿、慢性心脏病等)。
2. 血清钙降低
兽医临床比较多见于甲状旁腺机能降低；骨软症；牛、羊青草搐搦症；佝偻病；马纤维性骨营养不良。
六、血清无机磷测定(磷钼酸法)
（一）原理
以三氯醋酸沉淀血清中蛋白质，血清无机磷仍保留在酸性滤液中。加钼酸试剂于滤液，则与滤液中的磷结合成磷钼酸。再以氯化亚锡把它还原成蓝的化合物钼蓝。与同样处理的标准液比，求得无机磷的含量。
（二）试剂
10%三氯醋酸溶液；磷酸盐贮存标准液(1 mL＝0.1 mg磷)；磷酸盐应用标准液(1 mL＝0.01 mg磷)；钼硫酸试剂；氯化亚锡贮存液；氯化亚锡应用液。
（三）方法
采血后尽快分离血清，取血清1 mL，加10%三氯醋酸4 mL，混匀。静置1～2 min后，过滤。每2 mL滤液中含血清0.4 mL。按表2.19操作。
表2.19 血清无机磷测定操作步骤
步 骤 标 准 管 测 定 管 空 白 管
无蛋白血滤液(mL) 2.0 — —
磷酸盐
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