生物工程091班
摘要：HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒，它可以侵袭人的免疫体系，并终极损坏人体的免疫功效，它所引起的疾病医学上全称为获得性免疫缺陷综合症，简称艾滋病（AIDS),目前尚未研发出可以有效预防艾滋病的疫苗和艾滋病的药物，但其检测技术却在不断的发展并趋于成熟，现在已经可以快速并准确的将其诊断出来。 1981年世界报告首例艾滋病病例至今，在短短30年间，艾滋病已肆虐全球，夺去2500多万人的生命。联合国艾滋病规划署21日发布年度报告，全球2010年艾滋病病毒（HIV）携带者大约3400万人，比2009年增加70万。自1985年我国发现首例艾滋病病人以来[1]，我国艾滋病感染人数逐年上升。中国疾控中心性病艾滋病预防控制中心数据显示，我国累计报告艾滋病病毒感染者和病人43.4万人，其中死亡8.8万人。据联合国艾滋病规划署、世界卫生组织和卫生部联合专家组评估，截至2011年底，估计我国存活艾滋病感染者和病人78万。目前，我
国已发现的感染者和病人存活34.6万。也就是说，目前还有大约56％的感染者尚不知情。基于这种现状，我们应更多的了解艾滋病的致病机理，染病表现及检测手段。
检测方法:
目前检测HIV的方法有100多种[2]，常规的方法是检测血液中开关型直流稳压电源
HIV抗体来确定是否感染HIV病毒。现在仅将几种较为常用且准确度较高的常规检测方法做一说明。 1.酶联免疫吸附试验( ELISA)
ELISA是最常用的HIV抗体筛查检测方法，它具有准确性高、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点。其基本原理是[3][4]超导失超：酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无的还原型变成有的氧化型，出现颜反应。因此，可通过底物的颜反应来判定有无相应的免疫反应，颜反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显反应可通过 ELISA 检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反
应的特异性结合起来，使 ELISA 方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
2.镀锌钢管连接方式免疫印迹试验（WB）
ELISA+WB一直被国际上公认为HIV抗体检测的金标准[5]。经ELISA检测呈阳性结果的血清样品，还要经免疫印迹试验进行确认。WB的基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS-PAGE电泳，将分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100，再把它直接加到硝酸纤维素膜上，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有抗HIV抗体，就会与膜条上的抗原带相结合并呈现紫褐。此确认实验室是初筛阳性的标本送检省疾控的HIV确认实验室或市疾控的HIV中心实验室进行的[6]。
3.明胶颗粒凝集法(PA)
将病毒的裂解抗原包被在明胶颗粒上，当样本中存在特异性抗体时，颗粒发生凝集；由于人体感染HIV后产生的特异性抗体滴度，会随着感染时间的延长而增加，因此样本发生凝
集的稀释度越高，则表示感染的时间越长。该方法最大的特点是操作简便，成本低廉，不需要特殊仪器设备，通过肉眼观察即可得到结果，适用于偏远地区及硬件设施不足的实验室。有限的研究表明，凝集实验与BED两种方法在HIV新近感染比例的判断上无显著差异，但区分HIV近期感染的一致性较低，而区分HIV长期感染的一致性则较高[7]。
4.免疫荧光试验(IFA)
IFA基本原理为应用H29或HUT278培养细胞作为载体,用HIV感染细胞,该细胞内就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上汽车钻机,固定,制备为抗原片,加入待检血清,待检血清中的抗HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人Ig结合,在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿荧[8]。该法不需要太多的专业技术, 操作简便、快速且花费较免疫印迹少, 而敏感性及特异性相同，可用于H I V 感染的实验诊断、流行病学监测以及病原学研究[9]。
5.聚合酶链反应(PCR)
该方法具有敏感、特异、简便、经济的特点,很早就有人尝试将PCR技术应用于HIV感染的诊断,并取得了良好的效果[10]。PCR检测系统将PCR扩增反应和检测限制在单个反应管中
进行，避免了在开放环境中对产物进行操作，因此大大减少了污染的机会．同时，最初的手工PCR的敏感性为200拷贝/mL，使用自动化后达到了50拷贝/mL，特异性为99.6%，并可以对HIV-I和HIV-II的多个亚型做出特异性的定量检测，时间比p24抗原检测提前6d，比HIV抗原检测提前24d，自动化PCR在检测HIV载量方面显示了极高的敏感性和可信度[11]．
HIV感染者除血液中含有HIV收腰羽绒服抗体外，其尿液、唾液、泪液、精液或阴道分泌物中均含可检测到的HIV抗体。以唾液为标本的ELISA和WB试剂已经美国FDA批准，试剂盒检测HIV抗体的敏感性为91%～100%[12]，特异性为99%～100%，以唾液为样本的快速检测试剂又于2004年通过了美国FDA的批准。唾液测试卡的敏感性、特异性与ELISA相近[13]。
但是以唾液和尿液为标本的快速检测试剂因尚未得到国家药品食品监督管理局的批准，目前在我国只是用于科学研究，尚未用于临床。但以唾液和尿液为样品的快速检测试剂，除具有简便、快速等特点外，还具有样品采集无损伤性、易获得，唾液和尿液中几乎不含有HIV，可一定程度降低医务人员职业暴露风险的优点[14]。
HIV的检测方法虽然已经趋于成熟，但还有很多问题并未解决，检测也难免会出现错误的结果，所以还需要我们更进一步的研究HIV的内部分子结构及其致病机制，相信随着分子生物技术及检测手段的不断进步，一定可以开发出更为快捷准确安全的新的检测方法，HIV检测的窗口期将会逐步缩短。
参考文献：
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