综合性实验项目
实验一蟾蜍内脏血管灌流
[实验目的] 采用恒压灌流法，可观察交感神经和去甲肾上腺素对内脏血管舒缩的作用。 [实验原理] 器官灌流为常用的实验方法，广泛用于研究体液因素和药物对器官的直接作用。[实验对象]蟾蜍
[实验药品] 任氏液、0.01%去甲肾上腺素溶液
[仪器与器械] 蛙类手术器械、橡皮接管、细塑料管、电子刺激器和保护电极、秒表、1mL注射器和针头
[实验方法与步骤]
1.组装恒压灌流装置
用一个500mL下口瓶作贮液瓶(也可用倒置的盐水瓶代替)内盛任氏液约400mL，瓶口橡皮塞中心插入的进气玻璃管下口距瓶底约1厘米。进气管下口水平面与动脉插管口水平面的垂直距离，即为灌流压的高度
(厘米水柱cmH2O)，它不受瓶中液面变化的影响。贮液瓶下口用橡皮管连接作动脉插管的细塑料管。接管中可串接一个计滴用的摩氏(Muiphy)滴管，并在其上方的接管上夹一个调节流量用的何氏夹。在管道中充满灌流液，驱净气泡。调整贮液瓶高度，使灌流压为30cmH2O左右。调节何氏夹的螺丝，使灌流液流量为20滴/min左右。然后将接管下段夹闭。
2.制备蟾蜍内脏血管灌流标本
破坏蟾蜍的脑和脊髓，背位固定于蛙板上。在腹部作一正中切口，用棉球将腹内脏器推向一侧。小心地剪开背侧的腹膜，可见到由两支主动脉弓汇合而成的背主动脉，汇合后的第一分支为粗而短的腹腔系膜动脉，其分支分布于胃、肠、肝、胆、脾、胰等腹腔内脏。在背主动脉下方，穿细线备用。再到汇入静脉窦和后腔静脉和前腹壁内面的腹静脉，亦各在其下方穿线备结扎之用。
帕斯卡裂桶实验在脊柱近旁两侧，到由交感神经节组成的交感干，从第三对至第五对交感神经节发出的分支组成内脏神经，与腹腔系膜动脉伴行，支配胃、肠、肝、胆、脾、胰、肾等腹腔内脏。在内脏神经(或交感干)下方穿一细线备用。
用留置线将两支主动脉弓一起结扎。在结扎远心端的一支主动脉弓上剪一斜口，将充满灌流液的细塑料管插入，直至背主动脉发出腹腔系膜动脉处的近端，用留置线结扎固定好动脉插管，再将背主动脉的远端(在发出肾动脉分支前)结扎。打开管夹，使灌流液经腹腔系膜动脉流向腹腔内脏。
将后腔静脉汇入静脉窦处用留置线结扎，再在此结扎远心端的后腔静脉上剪口插好另一根细塑料管。后腔静脉的远端(在肝静脉汇入处以远)，以及来自后肢的腹静脉，也都用线加以结扎。这样，由静脉插管流出的即为经腹腔内脏的灌流液。
3.实验项目
(1)待灌流量稳定后，连续记录内脏血管灌流量(滴/min)3min，以此为基础流量作为对照。
(2)轻轻提起牵引交感神经的留置线，用保护电极钩住内脏神经(或交感干)。待灌流量稳定后，用中等强度的方波电流刺激内脏神经1min，观察内脏血管的灌流量有何变化。
(3)待灌流量恢复至对照水平后，将注射器针头斜向插入摩氏滴管下方分橡皮接管，注入0.01%去甲肾上腺素0.2mL，观察内脏血管的灌流量有何变化。
[注意事项]
1.灌流管中不得留有气泡。实验中应防止血管插管或接管扭曲，保持管道畅通。
2.灌流开始时应先将内脏血管中的积血冲洗干净，待流出液澄净而无血时，方可开始各项实验。
c4烯烃3.由摩氏管数得的灌流量，应同灌注系统流出可流量相等，如两者相差较大，可能发生了灌流液在组织间隙潴留，应调整灌流压高度和灌注液流量。
[实验结果]观察记录结果，并加以分析。
[思考题]交感神经及其递质对内脏血管活动的有何作用？
实验二鱼类呼吸运动的描记及其影响因素
[实验目的] 学习鱼类鳃盖运动的描记方法，了解鱼类呼吸运动的特点及其影响因素。
远程控制系统[实验原理]鱼类通过鳃盖的张合，推动水流经鳃部进行气体交换，为了气体交换过程能正常进行，鳃有节律、不断地从外界更新气体，通常每隔数次呼吸运动便出现一次洗涤运动，以清除口腔、鳃瓣的污物，保证气体交换顺利进行。呼吸频率与水环境的改变密切相关。利用机械-电换能器可把鳃盖的机械运动，转为电信号，通过二道记录仪记录下来。
[实验对象]鲤鱼、草鱼、鲫鱼
[实验药品] 2mg/L 硫酸铜溶液、pH＝4-5 酸溶液、pH＝10 碱溶液、红墨水（或墨汁）、冷开水[仪器与器械] 容量为5000mL水族箱、生理记录仪、肌张力换能器、CO2气袋或CO2发生器装置、O2气袋或O2发生器装置、铁支柱、双凹夹、螺旋止水夹、金属小钩，温度计、眼科镊
[实验方法与步骤]
1.仪器连接
（1）取鱼一条将金属小钩钩在鱼鳃上放入水族箱中并固定。
麦双尾蚜（2）调试好二道生理记录仪，将金属小钩联线与肌张力换能器相连(如图8.4-1)。
2.实验项目
（1）观察正常情况下鱼呼吸和鳃洗涤运动曲线。
（2）当水族箱中的鱼不游动时用吸管吸取红墨水，轻轻插入鱼口前方的水中，把红墨水慢慢地滴入水里，观察红墨水水滴的漂流情况。
（3）向水族箱中通入CO2气体或O2气体5-10min后观察鱼呼吸和鳃洗涤运动有何变化?为什么?
（4）向水族箱加入pH值为4-5的酸溶液或pH值为10的碱液，有何变化?为什么?(待现象明显后换取此液，加常水洗涤。下同)。
（5）向水族箱中加入浓度为2mg/L硫酸铜液，效果如何?为什么?
（6）向水族箱中加入40℃温水，观察鱼呼吸和鳃洗涤运动有何变化?为什么?
（7）向水族箱中加入冷开水，观察鱼呼吸和鳃洗涤运动有何变化?为什么?
[注意事项]
1.应待鱼体安静后，才进行实验。
2.放置鱼固定器时，不得影响鱼正常活动。
3.换取溶液时应关去记录仪的输入开关。
[实验结果] 记录实验结果，并加以分析。
实验三迷走神经对鱼胃运动的影响
[实验目的] 了解用急性在体方法研究迷走神经对胃运动的调节。
[实验原理] 胃的机能受植物性神经的调节和支配，刺激迷走神经可以造成机能改变。
[实验对象] 乌鳢
[实验药品] 鱼用代体液
[仪器与器械]
生理记录仪、换能器、刺激器、保护电极，蛙板、蛙心夹、蛙常规手术器械一套
[实验方法与步骤]
1.实验的准备
（1）左手握住乌鳢，右手持探针在颅骨稍下划断脊髓。
（2）腹面朝上将乌鳢固定在蛙板上。
（3）从肛门起沿中线剪开腹部，剪至与胸鳍成一直线。
（4）从肛门起右斜向，剪至胸鳍，剪去这块三角形的肌肉。
（5）分离迷走神经：迷走神经约在胸鳍底进入食道、走向胃，出迷走神经，在其基部进行游离，用保护电极钩住神经干，电极与刺激器输出相连(若不小心弄断一侧，可用对侧)。
（6）将连有丝线的蛙心夹夹住胃的末端，蛙心夹的连线与肌张力换能器相连。
（7）调好生理记录仪、刺激器各种参数。开动仪器方可记录。
2.实验项目
（1）刺激强度调至5v，单个电刺激迷走神经，能否引起胃收缩？
（2）刺激强度不变，频率为50Hz连续分别刺激2s、5s、l0s，收缩高度各有何变化？
（3）刺激强度不变，频率为l0Hz、30Hz、50Hz连续，分别刺激迷走神经，比较胃收线高度各有何变化?
[注意事项]
1.常用代体液湿润神经和胃，用常水湿润鳃和身体。
2.每次刺激后，应间隔2min，再进行下次刺激。
[实验结果] 记录实验结果，并加以分析。
[实验目的]观察正常的胆汁、胰液分泌以及神经体液因素的调节作用。
[实验原理] 胰液和胆汁的分泌受神经和体液两种因素的调节。与神经调节相比较，体液调节更为重要。在稀盐酸和蛋白质分解产物及脂肪的刺激作用下，十二指肠粘膜可以产生胰泌素和胆囊收缩素。胰泌素主要作用于胰腺导管的上皮细胞，引起水和碳酸盐的分泌；而胆囊收缩素主要引起胆汁的排出和促进胰酶的分泌。此外，胆盐(或胆酸)亦可促进肝脏分泌胆汁，称为利胆剂。[实验对象] 家兔或狗
[实验药品] 3%钠、稀醋酸、0.5% HCl溶液、胆囊胆汁1 ml、0.1％毛果芸香碱(或0.01％甲基硫酸新斯的明) 促胰液素溶液、射阿托品
[仪器与器械] 计算机生物信号采集处理系统（或二道生理记录仪、电子刺激器）、计滴器、保护电极、兔手术台、常用手术器械、注射器及针头、各种粗细的塑料管（或玻璃套管）、纱布、丝线、秒表办公桌隔断
[实验方法与步骤]
1.实验的准备
（1）麻醉动物按1mL·（kg.体重）-1静注3%钠，待兔麻醉后，背位固定于兔手术台上，颈部分离迷走神经，穿线备用；然后分离气管，进行气管插管。
（2）胆管插管在剑突下沿正中线剖开腹腔，拉出胃；双结扎肝胃韧带从中间剪断。将肝脏上翻到
胆囊及胆囊管，将胆囊管结扎(图16.4-1)；然后，用注射器抽取胆囊胆汁数毫升备用。再在十二指肠起始部出总胆管(注意与静脉区别)，插入胆管插管。
（3）胰管插管在十二指肠顶点(即U状弯底)向后约10cm处，提起小肠对着光线可见白
发亮的胰主导管入十二指肠。细心分离胰导管入肠处，剪一小孔插入充满生理盐水的玻璃套管，结扎固定。套管游离端可用丝线固定在肠管上，以防套管扭曲变位。
在不影响胆汁、胰液引流条件下，尽可能用止血钳封闭腹腔，以保持体温。
2.连接记录装置
（1）二道生理记录仪将充满生理盐水的乳胶管分别接到胆管插管和胰管插管上；而后分别连接到两个受滴换能器上，以记录滴数(若胰液分泌量较少时，可将胰管插管连接到毛细玻璃管记录装置上，调节液面至0刻度)。
（2）计算机生物信号分析处理系统打开计算机，启动生物信号分析处理系统，选择"影响尿生成因素"的模块。将两个受滴换能器连接到计算机上，即可开始实验。
图16.4-1 胰主导管、胆总管解剖位置示意图
3.实验项目
（1）胰液和胆汁的自动分泌：记录5～10min分泌量(滴数/min)，并计算平均值。胆汁为不间断地少量分泌，而胰液分泌极少或不分泌。
（2）体液性(化学性)因素的影响：
①酸化十二指肠的作用向十二指肠内注入20mL0.5％盐酸(37℃)，记录反应全过程(潜伏期、增加、恢复，以滴/min表示)。观察胰液和胆汁分泌有何变化（观察时间约10～20 min）？
②皮下注射0.1％毛果芸香碱(或0.01％甲基硫酸新斯的明)0.5～1mL，观察胰液和胆汁分泌有何变化？
③取胆汁2mL(胆囊胆汁稀释10倍)缓缓注入静脉，观察胰液和胆汁分泌有何变化？
④静脉注入促胰液素溶液5～10mL，观察胰液和胆汁分泌有何变化？
（3）神经因素的影响：先静脉注射阿托品1mL，片刻后待迷走神经至心脏的末梢被麻醉时，刺激迷走神经外周端几分钟，观察反应过程。
（4）胰液消化酶的测定：将上述各项实验收集的胰液作以下测定：
①胰液消化酶：取2支试管，加入2ml蒸馏水或胰液，然后均加入2%淀粉液（加热使淀粉充分溶解）5ml，37℃保温30min。取上述保温后淀粉液0.5ml，加入裴林试剂5ml，加热至沸腾，冷却后观察液体颜。不变或浅蓝为阴性反应（无糖）；转为绿为“微量”（含糖<0.1%）；黄绿少量沉淀（含糖0.1-0.55）；黄沉淀（含糖1.4-2.0%）；黄并转红棕沉淀（含糖>2.0%）。
②胰蛋白酶：在3支试管中分别加入0.2ml蒸馏水小肠液和煮沸处理的小肠液，然后每个试管中放入2ml胰液和等量纤维蛋白（来自脱纤血）。将试管置37℃温育30min后取出，比较各管中纤维蛋白的变化。
③胰脂肪酶：取3支试管，其中：
第一管水4ml，植物油1ml；
第二管胰液2ml，水2ml，植物油1ml；
第三管胰液2ml，水1.9ml，植物油1ml，胆汁0.1ml。
各管各加入2滴1%酚酞酒精溶液作指示剂，试管置37℃温育40min，取出后观察各管颜变化。呈现玫瑰红颜为酸性反应，说明存在有脂肪酸。还可以用标准碱溶液滴定，滴定至颜消失所耗用的碱溶液愈多，即脂肪酸量愈大，以此作为胰脂肪酶活性的相对值。
（5）胆汁对脂肪的乳化作用：
①取两支试管，各加植物油1ml。然后在一支试管中加入3ml水，两一支试管中加入3ml胆汁，分别摇荡使成乳状液体，放于试管架上。
②观察并比较两支试管中植物油的变化。
[附]
英姿带裴林试剂配制：柠檬酸钠173g，无水碳酸钠100g，水700ml，加热溶解后缓慢加入17.3%的硫酸铜溶液100ml，冷却后补足水至1000ml，过滤后避光保存。此试剂如果加热煮沸时自行变或出现沉淀则不能使用。
促胰液素制备：取新鲜小肠（狗、猫、猪的均可）用流水冲洗肠腔，剪开肠壁后刮下自十二指肠起始
部至空肠末端的黏膜，然后与干净的细砂粒5-8g和0.55HCI15ml共同研磨，将研磨后的稀浆放入烧杯中，再加入0.5%HCI150VML ，煮沸15min，趁热用10%N a OH中和至pH为中性，过滤后再用0.5%HCI回滴呈弱酸性，即制成粗制促胰液素，冷藏待用。
[注意事项]
1.家兔禁食24h，实验前0.5h喂以青草可提高胆汁胰液分泌量。
2.术前应充分熟悉手术部位的解剖结构。
3.手术操作应细心，尽量防止出血，若遇大量出血须完全止血后再行分离手术。
4.电刺激强度要适中，不宜过强。
5.胆囊管要结扎紧，使胆汁的分泌量不受胆囊舒缩的影响。
6.剥离胰液管时要小心谨慎，操作时应轻巧仔细。
[实验结果]剪贴实验记录，做好标记和注释。从对各项结果进行分析讨论，总结胰液和胆汁分泌的神经-体液调节特征。
[组织建议] 视时间和学生情况，可只要求胆汁内容，胰液分泌仅做插管练习，或选取较好的1～2组演示。
[思考题]
1.向十二指肠腔内注入37℃的0.5% HCl溶液，胰液和胆汁分泌有何变化?为什么?
2.静脉注射促胰液素后，胰液和胆汁的分泌有何变化?为什么?
3.静脉注射胆囊胆汁，胰液和胆汁的分泌有何变化?为什么?
[附]
1.促胰液素的制备方法将急性动物实验用过的狗，从十二指肠首端开始取70 cm小肠，将小肠冲洗干净，纵向剪开，用刀柄刮取小肠粘膜放入研钵，加入10～15 m1 0.5%盐酸研磨，将研磨液倒入烧杯中，加入0.5%盐酸100～150 ml，煮沸10～15 min。然后，用10%～20% NaOH趁热中和(用石蕊试纸检查)至中性，用滤纸趁热过滤，即可得到促胰液素，将其在低温下保存。
2.迷走神经变性法刺激迷走神经可引起胰液和胆汁分泌，但迷走神经中的运动神经纤维发放冲动可使心跳抑制、胰导管收缩，难以观察到胰液流出，故需要将迷走神经的运动纤维变性，而保留传入纤维（传入纤维的变性时间较长）。
使迷走神经变性的方法是：将兔或狗浅麻，无菌操作剖开颈部皮肤，游离一段迷走神经并做双结扎，从中间剪断，将向中端的线头剪短弃去。离中端的线头用缝针引导穿出皮肤，并縛于一
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