.硏究.
Drug Research China Pharmaceuticals 2018年6月20日第27卷第12期Vol.27，No.l2，June20,2018
•检验检测• doi： 10. 3969/j. issn. 1006 -4931. 2018. 12. 005高效液相谱法测定保健食品中葛根素含量 苏思尹，郭菊玲
(云南省玉溪市食品药品检验所，云南玉溪653100)
摘要：目的建立测定保健食品中葛根素含量的高效液相谱法。方法谱柱为Agilent Lichrospher C18柱（150 mm x4. 6 mm，5 p m)，以甲醇-水(25:75,F/V O为流动相，流速为1.0m L/m in，柱温为40^，进样量为10 —L，检测波长为250 nm。结果葛根素质量浓度在4.8038〜960.7680 p g/m L范围内与峰面积线性关系良好，/■ = 1.0000U=7)；平均加样回收率为105.71%，奶乃为1.99%U=9)。结论该方法操作简便，结果准确可靠，为测定保健食品中葛根素的含量提供了参考。 关键词：高效液相谱法；保健食品；葛根素；含量测定
中图分类号：R284.1;R286.0 文献标识码：A 文章编号：1006-4931(2018)12-0016-03
三维激光扫描系统Content Determination of Puerarin in Health - Care Products by HPLC
Su Siyin, Guo Juling
(Yuxi Institute for Food and Drug Control，Yuxi，Yunnan，China 653100)
Abstract ：Objective To establish an HPLC method for content determination of puerarin in health - care products. Methods The Agilent Lichrospher C18column(150 mm x4. 6 mm,5 pm) was adopted with methanol -water(25 ： 75, V/V)as the mobile phase, the flow rate was 1.0m L/m in, the column temperature was 40 ^,the sample size was 10 pL, and the detection wavelength was 250 nm. Results The puerarin showed good linearity in the range of 4. 803 8 - 960. 768 0 p g/m L, r = 1. 000 0( n = 7),the average recovery rate was 105. 71% , RSD was 1. 99% ( n = 9). Conclusion The method is simple, accurate and reliable, which can provide reference for content determination of puerarin in health - care products.
Key words ： HPLC; health - care products; puerarin; content determination
葛根为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根，有升阳解 广泛应用于保健食品中。市售保健食品质量标准中主要肌、透疹止泻、除烦止渴、清火排毒、调血脂等功效，故被 以检测总黄酮为功效指标，但由于葛根素有改善外周循
第—作者：苏思尹（1983 -)，女，主管药师，主要从事化学药品分析和药械安全性评价工作，（）51097652@qq。
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(收稿曰期=2017-11-12)
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v〇l27, n〇.12, June 2〇,2018China Pharmaceuticals
.硏究. Drug Research
环、抗血小板聚集等临床药理作用，长期、大量使用可能 存在潜在的出血风险，故酿在功效指标中增加标志性
成分葛根素的含量测定，以保证产品的安全性犤1_2]。本 研究旨在遴选保健食品中葛根素的含量测定方法，以控 制功效成分，更合理、安全地开发和利用葛根资源。
1仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200型高效液相谱仪（美国安捷伦公司），配备G1322A在线脱气机，G1311A四元泵，G1329A自动机样机，G1316A柱温箱，G1315D二极管 阵列紫外检测器;SartoriusTB-215D型及T-214型电 子分析天平(德国赛多利斯公司）；HU10260F型超声仪 (天津市恒奥科技发展有限公司）。
1.2 试药
葛根素对照品（批号为110752 - 200912，含量为 96. 0% ，购自中国食品药品检定研究院）；甲醇为分析纯 (德国M erck公司）；乙醇为化学纯(天津医药化学有限 公司）；水为超纯水(实验室自制）；18批次不同厂家含 有葛根药材(或葛根素)的保健品(市场抽验品牘。
2 方法与结果
2. 1谱条件[31
谱柱:Agilent Lichrospher C18柱（150 mm X4.6 mm, 5 pm)；流动相：甲醇-水(25 :75)；流速：1.0 mL/m in；柱温:40 °C ；进样量：10叫；检测波长:250 nm。
2.2 溶液制备犤41
对照品溶液：称取葛根素对照品26. 06 mg，精密称 定，置25 m L容量瓶中，加30%乙醇溶液邏，超声20 min 溶解，冷却至室温，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液：取供试品1.0 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加30%乙醇溶液至30 m L，超声20 m in，冷却 至室温，用30%乙醇定容至刻度，摇勻，经0.45叫微
孔滤膜滤过，取续滤液,gP得。
2.3 方法学考察
线性关系考察：精密量取2.2项下对照品溶液0.05,0. 10,0. 25,0. 50,1.00,2. 00,5. 00 m L，分别置 10 m L容量瓶中，加30%乙醇溶液稀释并定容至刻度，按拟订谱条件进样测定，以峰面积U)为纵坐标⑴、质量浓度（pg/mL)为横坐标（Z)进行线性回归，得回归 方程 r= 0.025 4Z+ 1.481 4,= 1.000 0U= 7)。结果 表明，葛根素质量浓度在4.803 8 ~ 960. 768 0 p g/m L 范围内与峰面积线性关系良好。
检测限和定量限确定：精密量取质量浓度为4.8 pg/m L的对照品溶液1m L，置100 m L容量瓶中，用30%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀。依次改变进样量，测定出定量限和检测限。信噪比（S/W)约为1 :3时，进 样量为5 p L，测定检测限绝对值为0.24 ng;S/ W约为 1 : 10时，进样量为35 p L，测定定量限绝对值为1.68 ng。重复进样5次，结果的聊为3.02% U= 5)。
精密度试验：精密吸取质量浓度为96. 076 8 pg/m L 的对照品溶液，依法连续进样6次，测定峰面积。结果的 为0.08% U= 6)，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取同一供试品（同仁堂牌同仁益健茶）溶液，分别于0,1.5,3,6,12,24,48 h时进样，测定葛根 素峰面积。结果的聊为0.68% U= 7)，表明常温下 供试品溶液在48 h内稳定性良好。
重复性试验：取供试品（纽斯葆牌葛维片）按2.2 项下方法平行配制6份供试品溶液，每份各进样2次，取平均值，依法测定含量。结果的聊为2.35% U= 6)，表明方法重复性良好。
加样回收试验：称取已知含量的供试品（百邦葛灵 胶囊）粉末9份，每份约0.5 g，精密称定，分为3组，每 组分别加入质量浓度为0.576 0 g/L的对照品溶液 0.8,1.0,1.2 mL。按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。
表1葛根素加样回收试验结果U=9)
取样量
(g)
永磁马达
(mg)
加入量
( mg)
测得量
( mg)
回收率
(% )
X
(% )
RSD
(%)
0. 500 40. 518 80. 460 80. 996 1103. 58
0. 501 00. 519 40. 460 8 1.0186108. 33
0. 500 80. 519 20. 460 8 1. 003 1105. 01
0. 500 80. 519 20. 576 0 1. 134 8106. 87
0. 504 50. 523 00. 576 0 1. 129 1105. 22105. 71 1. 99
0. 501 30. 519 70. 576 0 1. 121 7104. 51
0. 501 70. 520 10.6912 1. 259 4106. 95
0. 502 30. 520 70.6912 1. 270 7108. 50
0. 501 90. 520 30.6912 1. 228 1102. 40
2.4 样品含量测定
取18批次保健品，按2.2项下方法制备供试品溶 液，依法测定峰面积，计算样品含量。结果见表2。
2.5 样品处理方法及谱条件选择
测定方法选择：18批保健品中均含有葛根药材或 葛根提取物，但检测标准中仅有4批测定葛根素功效成 分，且有的标准还存在同-指标有多种检验方法的现 象，而不同检验方法测定结果存在较大差异[5-6]。结 果见表3。由于目前国产保健食品多以中草药为原料，而且组分复杂，因此，在检测标志性成分葛根素时，采用 专属性较强的高效液相谱(HPLC)法，以保证检测结 果的可靠性犤7-10]。
提取方法选择：供试品前处理考虑了超声、回流、索
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表2 样品含量测定结果
样品名称批号含量（mg /g)
德惠牌绞股蓝泽泻茶201006210. 000 0
百合康牌葛根提取物肢囊2011032536. 688 2
星久牌力尊肢囊201108037. 880 0
纽斯葆牌葛维片BE263 - A9. 992 7
金奥力牌清宁软肢囊20100910 5. 196 7
百合康牌葛根提取物软肢囊2011052938. 691 7
力克保健液^201106220.0811
纽斯葆牌葛维片BE263 - A10.396 3
九巴乐含片110105 1.626 0
国珍牌松花伴侣片2011 -08-15 2 5. 571 1
国珍牌松花伴侣片2011 -09-10 3 5. 196 7
常青春牌睡得安肢囊20110929 1. 009 9
百合康牌葛根提取物软肢囊2011050542. 121 0
同仁堂牌同仁益健茶110701 4.710 0
百邦葛灵肢囊20110901 1.036 7
怡眠牌三七肢囊201106010. 000 0
一轻松牌舒解片A9703010. 000 0
德惠牌绞股蓝泽泻茶110910230. 101 1注：*力克保健液样品含量单位为g/L。
表3 不同方法样品含量测定结果
样品名称批号
含量（m g/g)
U V法U V法*HPLC法百合康牌葛根提取物肢囊2011032559.29 4. 470 336. 688 2百合康牌葛根提取物肢囊2011052961.7412.990 038.6917百合康牌葛根提取物肢囊2011050564.1710.191642.1210国珍牌松花伴侣片2011 -08- 15 228. 357. 705 7 5.571 1国珍牌松花伴侣片2011 -09 -10 326. 577. 225 9 5. 196 7百邦葛灵肢囊2011090120. 8213.092 5 1.036 7星久牌力尊肢囊2011080341.909. 275 67. 880 0纽斯葆牌葛维片BE263 - A122.89 2. 470 99. 992 7金奥力牌清宁软软囊2010091030. 449. 790 8 5. 196 7一轻松牌舒解片A97030198. 48 2. 465 70. 000 0注：以芦丁为对照品，其余两法以葛根素为对照品。
氏3种提取方法，试验发现，超声提取效率明显高于其 他2种，这与文献报道的黄酮类提取方法结果一致，且 方便、快捷。
流动相选择：试验中比较了乙腈-水(11 :89，流动 相A)，甲醇-水(25 :75，流动相B)对样品测定的影响，发现以乙腈-水为流动相时峰形较好，但部分样品杂 质峰与主峰不能完全分离，雜样品含量及加样回收率均偏大。比较结果见表4。使用甲醇-水作为流动相时，分离效果明显（供试品溶液谱图理论板数不低 于5 000，样品中待测组分与相邻峰的分离度大于1.5)，能保证主峰的分离度，故选用甲醇-水(25 :75) 为流动相。
表4 不同流动相样品含量测定结果
样品名称批号
含量(mg /g)
流动相A流动相B
德惠牌绞股蓝泽泻茶201006210. 000 00. 000 0
百合康牌葛根提取物肢囊2011032537. 077 736. 688 2
星久牌力尊肢囊201108038. 277 27. 880 0
纽斯葆牌葛维片BE263 - A10.795 39. 992 7
金奥力牌清宁软肢囊20100910 6.9391 5. 196 7
纽斯葆牌葛维片BE263 - A11. 121 810.396 3提取溶剂选择：试验中比较了酸加入水解黄酮苷对 提取率的影响，随着PH的增加含量变化不大，故借鉴 了 2015年版《中国药典(一部)》葛根素含量测定方法，直接采用30%乙醇作为提取溶剂。
3 讨论
试验中，有的供试品平行操作的2份样品含量精密 度较差，重新取样配制后测定，精密度仍不能改善，究其 原因可能是：供试品制剂本身均匀度较差，制剂在分装 前未混匀，超声溶解时难免会出现溶解不充分的现象; 个别供试品制剂中的辅料，造成葛根素的峰有一定程度 的拖尾，导致积分后的峰面积稍有差异犤11]。
本研究中建立的高效液相谱法操作简单，检测快 速，分离度好，结果准确可靠，可用于检则保健食品中葛 根素的含量，以有效控制保健品中该功效成分。
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