行业研究
刘朝阳１,２，赵㊀方１,２，栾大伟１,２，李雅慧１,２，刘㊀萍１,２，卢晋英３ә
１．博奥赛斯(天津)生物科技有限公司，天津３００３００;２．天津市化学发光与快速诊断
分析技术企业重点实验室，天津３００３００;３．天津市第三中心医院，天津３０００００
㊀㊀摘㊀要：建立一种荧光定量层粘连蛋白(L N)检测方法，定量检测人血清L N水平.将鼠抗L N抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线(T)，将链霉素亲和素用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为质控线(C)；用生物素荧光微球标记鼠抗L N抗体作为缓冲液.利用双抗体夹心法原理定量检测L N水平，对方法的线性㊁精密度㊁空白限㊁回收率㊁相关性等性能指标进行验证，并使用市售化学发光L N试剂盒比对.荧光免疫分辨检测L N方法的回收率为８６．０３％~９７．５０％，空白限为４．２２n g/m L，线性范围为２０~８００n g/m L，相关系数(r)为０．９９８９；批内精密度为６．５１％，批间精密度为６．２３％.与市售L N试剂平行检测１００份血清标本，有良好的相关性(Y＝１．０２１９X－１．１７２０,r＝０．９８７１).本研究建立了L N荧光免疫检测方法，各项性能指标均达到临床检验要求，操作便捷㊁结果准确，可用于临床血清L N水平的检测.
D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０２１．０６．０２０中图法分类号:R４４６．６
文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０２１)０６Ｇ０７２５Ｇ０５文献标志码:A
E s t a b l i s h m e n t a n d p e r f o r m a n c e e v a l u a t i o no f a f l u o r e s c e n c e i m m u n o c h r o m a t o g r a p h i c
a s s a y f o r d e t e c t i o no f s e r u ml a m i n i n∗
L I UC h a o y a n g１,２,Z HA OF a n g１,２,L U A N D a w e i１,２,L IY a h u i１,２,L I U P i n g１,２,L UJ i n y i n g３ә１．B i o s c i e n c e(T i a n j i n)D i a g n o s t i cT e c h n o l o g y C o．,L t d．,T i a n j i n３００３００,C h i n a;２．T i a n j i nE n t e r p r i s e K e y L a b o r a t o r y,C h e m i l u m i n e s c e n c e a n dP O C T D i a g n o s t i cT e c h n o l o g y,
T i a n j i n３００３００,C h i n a;３．T i a n j i n g T h i r dC e n t r a lH o s p i t a l,T i a n j i n３０００００,C h i n a
A b s t r a c t:T o e s t a b l i s ha q u a n t i t a t i v e d e t e c t i o n m e t h o d f o rL a m i n i n(L N)b a s e do nT i m eＧR e s o l v e dF l u oＧr e s c e n c e I mm u n o a s s a y．T h em o u s e a n t iＧL Na n t i b o d y w a s s p r a y e do n t o t h e s u r f a c e o f t h e n i t r o c e l l u l o s em e mＧ
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e t e c t i o n l i n e(T)．S t r e p t o m y c i na v i d i nw a s s p r a y e do n t o t h e s u r
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c e l l u l o s en i t r a t em e m b r a n eb y m a r k i n g m a c h i n e a s t h e q u a l i t y c o n t r o l l i n e(C)．M o u s e a n t iL Na n t i b o
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f l u o r e s c e n tm i c r o s p h e r e s a s b u f f e r．T h eL N w a s q u a n t i t a t i v e l y d e t e c t e db y t h e d o u b l e a n t iＧb o d y s a n d w i c hm e t h o d,t h e l i n e a r i t y,p r e c i s i o n,l i m i t o f b l a n k,r e c o v e r y a n d c o r r e l a t i o n o f t h em e t h o dw e r e v e rＧi f i e d,a n d t h e c o mm e r c i a l c h e m i l u m i n e s c e n c eL Nk i tw a s u s e d f o r c o m p a r i s o n．T h e r e c o v e r y o f t h e f l u o r e s c e n c e i mm u n o a s s a y f o rL N w a s８６．０３％－９７．５０％．T h e l i m i t o f b l a n k o f L N w a s４．２２n g/m L,t h e l i n e a r r a n
g ew a s ２０－８００n g/m L,t
h ec o r r e l a t
i o nc o e f f i c i e n t r w a s０．９９８９,t h ew i t h i nＧr u n p r e c i s i o nw a s６．５１％,a n dt h eb eＧt w e e nＧr u n p r e c i s i o nw a s６．２３％．C o m p a r e dw i t h t h e c o mm e r c i a l l y a v a i l a b l e p r o d u c t(１００s e r u ms a m p l e s),L N s h o w e d t h e h i g h c o n s i s t e n c y(Y＝１．０２１９X－１．１７２０,r＝０．９８７１)．I n t h i s s t u d y,t h e f l u o r e s c e n c e i mm u n o a sＧs a y d e t e c t i o nm e t h o do fL N w a s e s t a b l i s h e d．A l l t h e p e r f o r m a n c e i n d e x e sm e t t h e r e q u i r e m e n t s o f c l i n i c a l e xＧa m i n a t i o n．I tw a s e a s y t o o p e r a t e a n d a c c u r a t e,a n d c o u l d b e u s e d f o r t h e d e t e c t i o n o f s e r u mL N l e v e l i nc l i n i c．
K e y w o r d s:f l u o r e s c e n c e i mm u n o a s s a y;㊀l a m i n i n;㊀l i v e r f i b r o s i s
㊀㊀近年来，肝纤维化日益受到人们的重视，已成为肝病研究领域的热点.诸多病因如病毒㊁乙醇㊁药物等所致的肝细胞炎症㊁坏死均可引起肝纤维化.肝纤维化为慢性肝病发展至肝硬化过程中的病理组织学
５２７
国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６
∗基金项目：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项项目(２０１８Z X１０７３２２０２).
㊀㊀作者简介：刘朝阳，女，中级工程师，主要从事荧光免疫层析检测技术相关研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:h e n r y＠b i o s c i e n c eＧt j．c o m.
㊀㊀本文引用格式：刘朝阳，赵方，栾大伟，等．血清层粘连蛋白荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价[J]．国际检验医学杂志,２０２１,４２(６):７２５Ｇ７２８．
变化，是发展到肝硬化的必经阶段[１].其疾病过程为：慢性肝病－肝纤维化－肝硬化－肝癌.研究认为
肝纤维化尚有逆转至正常肝的可能，而肝硬化则不能[２Ｇ３].所以，肝纤维化在一定条件下可被逆转，早期发现㊁阻断肝纤维化对慢性肝病十分重要[４].
层粘连蛋白(L N)是细胞间外间质(E C M)中的非胶原糖蛋白，大量沉积于基质膜的透明层[５Ｇ６].在肝纤维化发生过程中，患者细胞外基质的代谢产物可释放到人体血液之中,L N即为该种代谢产物，研究发现其可作为非酒精性脂肪肝㊁肝癌等肝脏疾病中肝纤维化的血清学标志物[７Ｇ１１].本研究旨在建立一种L N荧光免疫检测方法，用于定量检测人血清L N水平，现报道如下.
１㊀资料与方法
１．１㊀一般资料㊀选取天津市三中心医院肝纤维化和肝硬化患者的血清标本，溶血㊁黄疸㊁脂血等标本剔除.标本血清为空腹静脉采血，分离出血清立即用于分析，可于４ħ冰箱中保存，长期存放应保存在－２０ħ以下，并避免反复冻融.
１．２㊀仪器与试剂㊀喷金划线仪HM３０３０㊁宽型切条机C M３０２０㊁微电脑斩切机，荧光免疫分析仪P２００为博奥赛斯(天津)生物科技有限公司研制生产.L N化学发光检测试剂由博奥赛斯(天津)生物科技有限公司提供.荧光微球购自T h e r m o公司，链霉亲和素购自S i g m a公司，硝酸纤维素膜(N C膜)购自P A L L公司，其他试剂均为国产分析纯.L N抗原㊁抗体均购于梅迪赛斯生物科技有限公司.
１．３㊀方法
１．３．１㊀L N固相抗体制备㊀分别将L N抗体及链霉亲和素配置成一定浓度的溶液，使用喷金划线仪分别包被在N C膜的检测区和质控区,３７ħ干燥后密封室温保存备用.
包被浓度的选择试验方法：分别选用以下３种缓冲液稀释L N抗体及链霉亲和素进行包被，测定其包被效果.缓冲液１＃:p H８．０，缓冲液２＃:p H６．４，缓冲液３＃:p H７．２.
１．３．２㊀荧光标记抗体制备㊀取０．１０m L荧光微球，清洗１次(０．１０m o l/L硼酸盐缓冲液)加入０．１２m g/ m L的活化剂可溶于水的碳二亚胺(E D C)，混匀，加入L N抗体至１００．００μg/m L.交联４h，加牛血清清蛋白(B S A)至２０．００μg/m L，封闭过夜,４ħ保存备用.
荧光标记抗体稀释比例选择试验方法:L N抗体微球分别以１ʒ３０㊁１ʒ５０㊁１ʒ１００比例稀释，测定其效果.１．３．３㊀层析时间的选择㊀比较层析１２㊁１５㊁１８m i n 不同时间下对试验结果的影响.１．３．４㊀试剂盒的组装㊀将吸水纸㊁N C膜㊁样品垫按顺序粘贴组成试剂板，用斩切机将试剂板分切成(４．０ʃ０．２)mm的试剂条.将试剂条装入卡中扣合，即为完整检测卡.
１．３．５㊀检测缓冲液配置㊀L N荧光标记抗体终浓度以１/１００，质控荧光标记抗体浓度以１/５００，其他以稀释液补充，配置检测缓冲液.
１．４㊀荧光免疫层析分析
１．４．１㊀灵敏度㊀灵敏度以空白限数据来评估.平行测定２０次零值标准品的相对荧光强度(T/C)，计算T/C的平均值(x)和标准差(s).根据零值标准品和相邻标准品之间的浓度Ｇ相对荧光强度结果进行两点回归拟合得出一次方程，将x＋２ˑs带入上述方程，计算出对应的浓度值，即为检测卡空白限数据.１．４．２㊀精密度㊀抽取３个批次的L N检测卡，选取高值和低值标本分别重复测试各１０次，进行精密度检测.计算批内变异系数(C V)与批间C V，可得出检测卡的精密度数据.
１．４．３㊀线性试验㊀将接近线性范围上限的高值标本按一定比例稀释为５种浓度，其低值浓度的标本需接近线性范围下限，使用L N测定试剂盒(荧光免疫层析法)测定，每一种浓度重复测定３次，计算其平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数(r).rȡ０．９９００判定为符合标准.
１．４．４㊀准确度㊀准确度以回收试验来评估.取L N 的临床检测高值标本，与低值标本以１．０ʒ９．０的体积比例混合，测试高值标本㊁低值标本与混合标本的实际浓度值，各平行测定３次取均值.
回收率＝(混合标本测值ˑ１０－低值标本测值ˑ９)/高值标本测值手提式割草机
１．４．５㊀钩状效应(H o o k效应)㊀用灭活的小牛血清作稀释液，将L N高值校准品配置成一系列浓
度，平行测定每种浓度校准品两次荧光强度值，取其均值.１．４．６㊀对比试验㊀与市售L N检测试剂盒(化学发光法)平行检测１００份临床血清标本，记录结果，计算相关性.市售L N检测试剂盒按照其说明书进行检测操作.
１．５㊀统计学处理㊀采用２０１０版本E x c e l进行趋势分析，采用S P S S２０．０对检测结果进行统计分析.
２㊀结㊀㊀果
２．１㊀方法学建立
２．１．１㊀包被浓度的选择㊀随标本浓度值的升高，测试所得T/C值随之升高，缓冲液１＃测试结果与标本相关性较好，选择缓冲液１＃.见图１.
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铝合金切削液配方
图１㊀㊀包被浓度的选择２．１．２㊀荧光标记抗体稀释比例的选择㊀L N抗体微球稀释实验结果显示,１ʒ５０比例稀释的检测缓冲液，随标本浓度值的升高，测试所得T/C值随之升高,１ʒ３０比例稀释的检测缓冲液测试T/C值偏高，表明L N 抗体微球浓度偏高.综合考虑，以１ʒ５０为基础稀释比例.见图
２.
图２㊀㊀荧光标记抗体稀释比例的选择２．１．３㊀层析时间的选择㊀层析时间试验结果显示,２０n g/m L标本在７．５m i n后测值已经稳定,１００n g/m L标本在１０m i n后测值趋于稳定,８００n g/m L 标本在１２．５m i n后较稳定.C V结果显示，层析１２m i n标本C V＞１０．００％,１５㊁１８m i n C V均＜１０．００％；综合以上，同时考虑时间效率因素，选择层析时间为１５m i n.见图３㊁表１.
２．２㊀方法学验证
２．２．１㊀灵敏度㊀L N检测卡的空白限分别为３．３５㊁３．２７㊁４．２２n g/m L，符合行业标准.见表２.２．２．２㊀精密度㊀经过３个批次的C V测试，可得出３批L N检测卡的低值批内精密度分别为６．１２％㊁３．１８％㊁６．０８％，高值标本批内精密度分别为６．５１％㊁４．７４％㊁５．２１％，选取最大值６．５１％为本检测试剂盒的批内精密度；高低值标本的批间精密度分别为５．８７％㊁６．２３％，选取最大值６．２３％为本检测试剂盒的批间精密度.见表３.
表１㊀㊀不同层析时间的标本C V(％)
时间(m i n)２０n g/m L１００n g/m L８００n g/m L １２１０．２３１０．４５１０．３２
１５５．５１６．３２５．８７
１８６．３６６．２１６．６
５
气浮垫图３㊀㊀层析时间的选择
表２㊀㊀空白限试验结果
批次检测次数x(n g/m L)s空白限(n g/m L)１２００．１８６０．００５３．３５
２２００．１８７０．００５３．２７
３２００．１８８０．００７４．２２
表３㊀㊀检测卡精密度分析
标本浓度批次
x
(n g/m L)s
批内C V
(％)
批间C V
(％)低值标本１５１．４７１３．１５０６．１２５．８７
２４７．９５６１．５２５３．１８
３４８．８３２２．９６９６．０８
高值标本１２５６．９４３１６．７２７６．５１６．２３
２２４０．１６９１１．３８４４．７４
３２５９．５３９１３．５２２５．２１２．２．３㊀线性㊀在２０~８００n g/m L的线性范围内,L N 检测卡的线性r为０．９９８９.见表４㊁图４.
表４㊀㊀线性试验结果(n g/m L)
稀释比例理论浓度实测浓度１实测浓度２实测浓度３实测均值１ʒ１６３．３２０．００１９．２６２０．６８１９．１６１９．７０１ʒ６５．３５０．００５５．４０５１．０５５１．９５５２．８０１ʒ３２．７１００．００１０３．８０９８．８０８７．６０９６．７３１ʒ１３．１２５０．００２６７．２５２８１．７５２８５．００２７８．００１ʒ４．１８００．００７８７．２０７７４．８０７８８．００７８３．３３ ７２７
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２．２．４㊀准确度㊀经过３批L N检测卡的回收率测试可知，回收率为８６．０３％~９７．５０％，产品重复性较好.见表５.
图４㊀㊀拟合方程图
表５㊀㊀检测卡回收率分析
批次高值标本测值
(n g/m L)
低值标本测值
(n g/m L)
混合标本测值
(n g/m L)
回收率
(％)
１６１８．００１０８．１５１５０．５８６．０３２６０２．００１０３．６０１４７．５０９０水润滑轴承
．１３３６０４．００１０２．９０１５１．５０９７．５０２．２．５㊀H o o k效应分析㊀L N浓度从８００n g/m L升至８０００n g/m L时，检测的荧光强度值随浓度增加而升高，没有出现H o o k效应.见表６.
表６㊀㊀H o o k效应分析
标本浓度(n g/m L)T/C值平均值(n g/m L)
８００１．９８３
２．０９４２．０３９
１５００２．８４２
２．９００２．８７１
４０００３．８３２
３．９１０３．８７１
８０００４．９２０
４．８２２４．８７１２．２．６㊀方法学比较㊀与化学发光L N试剂盒比对，检测１００份临床标本，两种方法学的检测结果回归方程为Y＝１．０２１９X－１．１７２０,r＝０．９８７１.见图５.
图５㊀㊀两种试剂盒测定血清标本L N水平的相关性图３㊀讨㊀㊀论
L N属于细胞外基质成分，随着肝纤维化病情发展越来越严重，细胞外基质成分在血清的浓度会明显上升，因此对判断肝病和肝纤维化的严重程度具有重要价值.
本研究开发的L N测定试剂盒为荧光免疫分析测定系统，采用荧光示踪物标记抗原或抗体，与待测物进行一系列免疫反应，通过测定反应产物的荧光强度以分析待测物浓度.本研究结果显示荧光免疫分辨检测L N方法的回收率为８６．０３％~９７．５０％，空白限为４．２２n g/m L，线性范围为２０~８００n g/m L,r＝０．９９６５；批内精密度为６．５１％，批间精密度为６．２３％.与市售L N试剂平行检测１００份血清标本，有良好的相关性(Y＝１．０２１９X－１．１７２０,r＝０．９８７１).这表明本试剂盒测试重现性好，与市售试剂盒有良好的相关性.
时间分辨免疫测定荧光是目前应用非常广泛的微量分析技术之一[１２Ｇ１６]，具有专一性强㊁灵敏度高㊁实用性好㊁检测时间短㊁价格低廉等优点.时间分辨免疫层析以铕荧光微球为标记物，与传统荧光标记物相比，其有独特的荧光特性：荧光寿命长㊁s t o k e s位移大㊁激发光谱和发射光谱无交叉㊁特征峰尖锐㊁标记物体积小㊁灵敏度高㊁可定量.该方法最快１５m i n出结果，可用于快速对大量患者
的血清学标本进行检测.高通量的免疫学筛查无实验室限制，便于在二级及其以上医院快速推广.同时，基于L N检测试剂制备低成本的快检试剂，可以用于社区等基层医疗机构对就医人进行快速㊁低成本的筛查，以便实现集中患者㊁集中资源㊁集中专家㊁集中收治，以及实现医疗资源的高效运转.
综上所述，本研究建立的L N荧光免疫分析检测方法符合临床检验需求，在临床检验中具备应用价值，值得推广使用.
参考文献
[１]贾海英，郭淑丽，王玲玲，等．血清肝纤维化指标在慢性乙型肝炎不同阶段中的对比分析[J]．实验与检验医学,２０２０,３８(６):１０７８Ｇ１０９３．
[２]方亮，王芬，刘献文，等．人血清层粘连蛋白直接化学发光免疫分析法的建立及评价[J]．国际检验医学杂志,２０１７,３８(２１):３０５５Ｇ３０５７．轨道交通系统
[３]张燕．分析血清透明质酸对肝纤维化的诊断价值[J]．世界最新医学信息文摘,２０１８,４９(１８):１２５．
[４]贡雪．肝纤维四项检测在诊断肝纤维化程度中的应用[J]．中国现代药物应用,２０２０,１４(１８):６１Ｇ６３．[５]张洋，王健，吴铮，等．层粘连蛋白对乙肝病毒感染相关肝癌患者术后复发的预测
效果[J]．中华(下转第７３３页)
８２７ 国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６
一方面，缓冲体系与真实标本血清基质存在差异，即基质效应也可造成测值结果不一致等；此外，还与各测定原理和技术的不同㊁数据处理的曲线拟合方式差异有关等.
除定值结果不理想外,WHO提供的互换性实验结果显示，仅６种方法中的１６/１９０和标本具有互换性,３种方法具有部分互换性,７种方法无互换性.以上结果表明，如果将１６/１９０定为国际标准品，既无溯源依据支持，亦无实际数据支持，实际应用中必然存在一定争议.鉴于上述因素,N I B S C不建议将１６/１９０作为人重组AMH的国际标准品，但是为了进一步促进AMH校准和免疫学分析，他们向WHO推荐１６/１９０作为参考试剂，并且在说明书中明确说明赋值采用的是当前的免疫分析法，笔者亦认为这种做法是合理的.在未来可尝试以人血清为基质建立AMH 参考盘，或者采用提取的人源性AMH制备国际标准品，以协调AMH免疫分析方法之间的差异，促进AMH免疫分析的标准化.
参考文献
[１]R Z E S Z OW S K A M,L E S Z C Z A,P U T OW S K IL,e ta１．
A n t iＧM t i l l e r i a nh o r m o n e:s t r u c t u r e,p r o p e r t i e sa n da p p l iＧ
a n c e[J]．V i aM e d i c a,２０１６,８７(９):６６９Ｇ６７４．[２]林丽淑，龙韵洪，徐丽惠，等．抗缪勒氏管激素的结构㊁功能㊁临床应用与检测技术[J]．国际检验医学杂志,２０１９,４０(２４):３０６１Ｇ３０６６．
[３]罗立梅．抗缪勒氏管激素的临床应用[J]．医学检验与临床,２０１９,３０(８):３４Ｇ３６．
[４]洪艳，李朋，黄煜华，等．血清抗缪勒管激素检测在无精子
症临床诊治中的意义[J]．东南大学学报(医学版),２０２０,３９(１):５３Ｇ５７．
塑料围嘴[５]王思源，王殊．抗缪勒管激素用于戈舍瑞林在年轻乳腺癌患者化疗期间保护卵巢储备功能的评价[J]．北京大学学
报(医学版),２０１９,５１(３):５３６Ｇ５４１．
[６]袁雪菲．抗缪勒氏管激素与性激素水平在卵巢储备功能评估中的应用[J]．中国保健营养,２０１９,２９(２５):３１０．[７]吕云峰．抗缪勒管激素与性激素预测卵巢反应性的临床研究[J/C D]．国际感染病学(电子版),２０２０,９(２):１１１．[８]J AM I LZ,F A T I MASS,A HM E D K,e t a１．A n t iＧM
i i l l eＧr i a nh o r m o n e:a b o v ea n db e y o n dc o n v e n t i o n a l o v a r i a nr eＧs e r v em a r k e r s[J]．D i sM a r k e r s,２０１６,２０(１６):５２４６２１７．[９]P A N K HU R S T M W,M C L E N N A NIS．H u m a nb l o o d
c o n t a i n sb o t ht h eu n c l e a v e
d p r
e c u r s o ro fa n t iＧM u l l e r i a n
h o r m o n ea n dac o m p l e xo f t h eN H２Ｇa n dC O OHＧt e r m iＧ
n a l p e p t i d e s[J]．A mJP h y s i o lE n d o c r i n o lM e t a b,２０１３,３０５(１０):１２４１Ｇ１２４７．
[１０]P E P I N D,M I E N H,F O T I N IN,e t a l．A na l b u m i n l e a d e r s e q u e n c ec o u p l e d w i t hac l e a v a g es i t e m o d i f i c a t i o ne nＧ
h a n c e s t h e y i e l do f r e c o m b i n a n tCＧt e r m i n a lM u l l e r i a n I nＧ
h i b i t i n g S u b s t a n c e[J]．T e c h n o l o g y,２０１３,１(２):６３Ｇ７１．[１１]B U D Z I K G P,P OW E L L S M,K AMA G A T A S,e ta l．M u l l e r i a n i n h i b i t i n g s u b s t a n c e f r a c t i o n a t i o nb y d y e a f f i n iＧt y c h r o m a t o g r a p h y[J]．C e l l,１９８３,３４(６):３０７Ｇ３１４．[１２]C A T ERL,MA T T A L I A N ORJ,H E S S I O NC,e t a l．I s oＧl a t i o no f t h e b o v i n e a n dh u m a n g e n e s f o rM u l l e r i a n i n h i bＧi t i n g s u b s t a n c e a n de x p r e s s i o no f t h eh u m a n g e n e i na n iＧ
m a l c e l l s[J]．C e l l,１９８６,４５(８):６８５Ｇ６９８．
(收稿日期:２０２０Ｇ０７Ｇ１１㊀修回日期:２０２０Ｇ１１Ｇ２７)
(上接第７２８页)
㊀㊀医院感染学杂志．２０２０,３０(２０):３０５８Ｇ３０６１．[６]张新弟，李卫娟，高娅妮，等．血清层粘连蛋白㊁透明质酸诊断肝纤维化的价值[J]．中国医药导报．２０１７,１４(２３):１１１３Ｇ１１２１．
[７]E L F A T A H ED,E L K A D E R E R,A B D E L HA K M T,e t a l．L a m i n i na n d c h r o m o g r a n i nAa s s e r u m m a r k e r s o f l i vＧe r f i b r o s i s i nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a[J]．C l i n M e d D iＧa g n,２０１６,６(２):２１Ｇ３１．
[８]黄伟雄，郑智鑫，陈创坤，等．血清层粘连蛋白检测在肝纤维化诊断中的临床意义[J]．深圳中西医结合杂志,２０１９,２９(８):９１Ｇ９２．
[９]李慧萍，郑雪琴，赵，等．Ⅲ型前胶原㊁Ⅳ型胶原㊁层粘连蛋白和透明质酸酶在诊断肝纤维化程度中的应用[J]．检
验医学与临床,２０１９,１６(５):６６６Ｇ６６８．
[１０]MA K K M,M E IR．B a s e m e n tm e m b r a n e t y p e I Vc o l l aＧ
g e n a n d l a m i n i n:a n o v e r v i e wo f t h e i r b i o l o g y a n d v a l u e a s f i b r o s i sb i o m a r k e r so f l i v e rd i s e a s e[J]．A n a t o m R e c o r d,２０１７,３００(６):１３７１Ｇ１３９０．
[１１]T I A N HU I L,X I A OM I N G W,MO R T E N A,e t a l．M o l e cＧ
u l a r s e r u m m a r k e r so f l i v e r f i b r o s i s[J]．B i o m I n s i g h t s,２０１２,７(２):１０５Ｇ１１７．
[１２]史咏梅，何晖，冯子力，等．时间分辨荧光免疫分析技术在医学领域的应用[J]．国际检验医学杂志,２０１５,３６(１９):２８６６Ｇ２８６９．
[１３]杨眈，王作欢，蒋小武，等．基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速㊁高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用
[J]．菌物学报,２０１９,３８(６):１００３Ｇ１００４．
[１４]王云龙，李娜，李玉林，等．热休克蛋白９０σ荧光免疫层析检测方法的建立[J]．中国免疫学杂志,２０１７,３３(５):７１２Ｇ７１６．
[１５]L I N D A GL,N O R D MA N ES,J OHN S O N M D,e t a l．A l o wＧc o s t,h i g hＧp e r f o r m a n c e s y s t e mf o r f l u o r e s c e n c e l a t e rＧa l f l o wa s s a y s[J]．B i o s e n s o r,２０１３,３(２):３６０Ｇ３７３．[１６]HU IL,D U W,X I A O Q I A N T,e t．a l．T i m eＧr e s o l v e d f l u oＧr e s c e n c e i mm u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y(T R F I C A)f o r a fＧl a t o x i n:a i m i n g a t i n c r e a s i n g s t r i p m e t h o ds e n s i t i v i t y[J]．
F r o n tM i c r o b i o l,２０２０,１１(４):１Ｇ７．
(收稿日期:２０２０Ｇ０７Ｇ１５㊀修回日期:２０２０Ｇ１２Ｇ１０)
３３７
国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６
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