本说明书用于产品G8230, G8231, G8232和G8233。
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I.描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1
II. 产品组成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
III. 进行BacTiter-Glo TM检测的操作指南 (5)
B.检测细菌中ATP的操作方法 (5)
C.制作ATP标准曲线（选做）的操作方法 (5)
Ⅳ附录 (6)
.
A. BacTiter-Glo TM检测概述 (6)
B.更多的考虑 (6)
电解抛光液C.BacTiter-Glo TM检测应用举例 (8)
熟练使用者的操作指南 (10)
I.描述
BacTiter-Glo TM微生物细胞活性检测系统用均质的方法，依据对所存在的ATP的定
量结果，确定培养物中活细胞的数目。ATP是具有代谢活性的细胞的指示物。
BacTiter-Glo TM的设计既可以用于单管检测，也可用于多孔板形式的高通量筛选（HTS）。均质的检测步骤意味着只需要直接向培养在培养基中的细菌细胞中加入一
次试剂（BacTiter-Glo TM试剂），然后测量萤光即可（图1）。不需要洗涤细胞，去 除培养基，进行多次移液步骤等。
独特的试剂配方既可裂解细菌细胞，又可产生萤光信号，并支持这种“加入，混合， 测量”的均质检测格式。萤光信号与存在的ATP量成正比，而ATP与存在于培养
基中的细胞数目直接成正比（图2）。BacTiter-Glo TM试剂的基础有两点，其一是一
种受专利保护的热稳定萤光素酶（Ultra-Glo TM重组萤光素酶）的性质，其二是从细
菌中提取 ATP的专利试剂配方。BacTiter-Glo TM检测产生“辉光型”萤光信号，
由图3所示的萤光素酶反应产生，其信号半衰期随菌株和培养基而不同，一般超过
30分钟。数据表明这个检测可用于不同的细菌，酵母和真菌（表1）。由于是均质
检测格式，所以减少了其它ATP测量方法由于需要多个步骤而可能带来的移液错
误。
优点
z简化您的检测：加入、混合、测量方案将操作步骤减少到少于其它类似的ATP检测的数目，不需进样器。
z很快得到结果：加入、混合试剂5分钟之后就能记录数据。由于灵敏度高，可以更早地检测到生长。
z提高灵敏度：可以从少至10个细菌细胞中测量到ATP。
z自由选择形式：可用于各种多孔板，也可用于单管；可用萤光发光计，也可用CCD 相机记录数据。
z获得皮实的信号：萤光信号稳定，半衰期30分钟。3d打印机制作
图1. BacTiter-Glo TM微生物细胞活性检测操作过程概览。这里显示的检测既适合单管，也适合多孔板。
图2. （
图3.
图
录号LB
要得到最佳性能，混合好的BacTiter-Glo TM试剂（缓冲液加底物）在室温存放时，应在8小时之内使用。混合好的BacTiter-Glo TM试剂可在4o C存4天，在-20o C存一星期或-70o C存一个月，活性丧失小于20%。
III. 进行BacTiter-Glo TM检测的操作指南
由使用者准备的材料
z不透明壁多孔板
z多道移液器或自动移液器
z摇板机或其它能混合多孔板内容物的仪器
z萤光发光计（例如，Veritas TM微孔板萤光发光计（目录号# E6501）或Turner TD 20/20萤光发光计（目录号# E2041, E2051）或能够读微孔板的CCD照相机。
z自选：制作标准曲线的ATP
A.试剂制备
1.融化BacTiter-Glo TM缓冲液，使用前在室温平衡。为方便起见，在使用前48
小时融化BacTiter-Glo TM缓冲液并在室温保存。
2.在使用前将冻干粉BacTiter-Glo TM底物在室温平衡。
3.将适当体积（目录号#G8230, G8231取10ml, 目录号#G8232, G8233取100ml）鞋楦机
的BacTiter-Glo TM缓冲液转移到装有BacTiter-Glo TM底物的安碚瓶中，溶解冻
干粉状的酶/底物混合物。这就形成了BacTiter-Glo TM试剂。
4.轻轻震荡混合，摇晃或上下颠倒小瓶使溶液均一。BacTiter-Glo TM底物应在1
分钟内很容易地完全溶解。
5.将试剂在室温平衡至少15分钟。
B.从细菌中测量ATP的操作过程指南
注意：所有步骤均在室温下（22o C-25o C）完成。
1.在一块孔壁不透明的多孔板上培养好微生物细胞（带培养基）（例如，100µl/
调浆桶
孔在96孔板或25µl/孔在384孔板上）。
2.准备只含培养基不含细胞的对照孔，以得到背景萤光值。
接地电缆3.将平板及其内容物平衡到室温。
4.向每孔中加入与细胞培养基相等体积的BacTiter-Glo TM试剂（如向96孔板内蜜饯LH
含100µl/孔的培养基中添加100µl试剂，向384孔板内添加25µl试剂）。
5.在一个定轨振荡器上混合内容物，并孵育5分钟。
6.记录萤光强度。
C. 做出ATP标准曲线的方法（自选）
注意：所有步骤均在室温下（22-25o C）完成。
1. 在培养基中配制1µM ATP (100µl的1µM ATP含10-10 摩尔 ATP)。
2. 在培养基中对ATP进行10倍系列稀释（1µM到10pM; 100µl体积将含有10-10
到10-15摩尔的ATP）。
！小心。
…皮肤含有ATP。由于这个检测非常灵敏，我们建议戴上手套以避免污染。
！平衡
…试剂要在室温至少15分钟。为了得到最高的灵敏度，可能需要更长的平衡时间。更多的信息见第IV.B部分“试剂背景”。
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