稳态/瞬态荧光光谱仪（FLS 980-STM）操作说明书 48v转12vFLS980-STM外观图
FLS980-STM单-单光栅内部光路示意图
一、仪器介绍
1.FLS 980 稳态/瞬态荧光光谱仪具有两种功能
1.1稳态测量：激发光谱(荧/磷光强度~激发波长)、发射光谱(荧/磷光强度~发射波长)、同步扫描谱(固定波长差）。 1.2瞬态测量：磷光寿命(1us—10s)使用微秒闪光灯。
荧光寿命(100ps~50us)使用纳秒闪光灯，激发波长200nm-400nm
1.3量子产率测量：使用积分球31au
1.4各向异性，选取偏振片
2.主要应用
自动翻板机高分子和天然高分子自然荧光的研究
溶液中大分子分子运动的研究
固体高分子取向的研究
高聚物光降解和光稳定的研究
光敏化过程的研究
3.主要性能指标
光谱仪探测范围：光电倍增管， 200－870nm
荧光寿命测量范围：100ps－10s光源450w氙灯，us闪光灯，ns闪光灯
二、仪器测试原理(SPC)
时间相关单光子计数原理是 FLS980 测量荧光寿命的工作基础。
时间相关单光子计数法(time－correlated single photon counting)简称“单光子计数(SPC) 法”，其基本原理是，脉冲光源激发样品后，样品发出荧光光子信号，每次脉冲后只记录某特定波长单个光子出现的时间t，经过多次计数，测得荧光光子出现的几率分布 P(t)，此P(t)曲线就相当于激发停止后荧光强度随时间衰减的 I(t)曲线。这好比一束光(许多光子)通过一个小孔形成的衍射图与单个光子一个一个地通过小孔长时间的累计可得完全相同的衍射图的原理是一样的。
三、测量之前需要特别注意的事项
1. 在切换光源、修改设置或放样品之前必须把狭缝（Δλ）关到最小（0.01nm），否则会损坏光电倍增管！如果打开样品室盖子之后，Em1 的 Signal Rate 增加，请与工程师联系 2. 测量样品的瞬态性质之前，请用稳态测量对样品的稳态性质进行表征，了解样品的激发光谱和发射光谱及最佳激发波长和发射波长；增高瘦身鞋
3. 用 PMT 检测时，必须等稳压电源 CO1 的温度示数在－20℃以下才可以开始采集数据；
4. 狭缝范围 0.01～18nm，调节时注意不要超过其上限；
四、稳态荧光光谱的测定
(一)紫外可见区稳态荧光光谱的测定步骤
1、打开 PH1给主机及数据采集供电；
2.、CO1开关给检测器制冷到－20℃；
3、做稳态打开氙灯xe1电源开关，等到氙灯显示ready to start，
4、做磷光打开us闪光灯此时不闪烁，闪烁靠软件控制，
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5、做荧光短寿命打开ns闪光灯nf920开关，要预热10分钟
6. 打开计算机，双击桌面上 F980 图标，进入工作站
进入 Signal Rate 设置窗口，显示默认值，更改设置按回车键(Enter)或者点击 Apply 确认，再将Source 设置为 Xe1，检测器默认设置，然后点击 Apply；
8. 打开样品室的盖子，放入待测样品，然后盖好；
9.在Signal Rate设置窗口内输入相应的Excitation Wavelength和 Em1 Wavelength值，逐渐加大Δλ，使Em1 获得一个合适的Signal Rate（注意：在设置后需要按下回车或者Apply 按钮设置才真正生效，Em1 的Signal Rate千万不要超过 20 的6 次方）；
10. 激发扫描Ex
单击按钮，
选择 Excitation Scan，进入设置窗口，在 Emission1 栏内，将 Monochromator Wavelength 设置为待检测波长， Detector 默认设置，然后在 Excitation
Scan Parameters 内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（Dwell Time）和扫描次数（Number of Scans），设置完毕后点击 Start 即开始测量，得到激发光谱
11. 发射扫描Em
点击按钮，
选择 Emission Scan，进入设置窗口，在 Excitation 标签内，将
Monochromator Wavelength 设置为合适的激发波长，然后在 Emission Scan Parameters 内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（Dwell Time）和扫描次数（Number of Scans），设置完毕后点击 Start 即开始测量，得到发射光谱(荧光光谱)；
12同步扫描Synchronous设置界面
(二) 数据处理
1. 测量完成后，直接点击保存图标保存原始文件；
2. 数据处理的功能都在 Data 菜单下：
Scale：将当前的谱图坐标乘以输入的数值显示出来
Normalise：归一化，用此功能可以比较峰位是否相同
Subtract Baseline：扣基线
Crop Range：设置横坐标显示范围
Differentiate：显示微分曲线
Integrate：积分
Reverse：将横坐标刻度倒过来显示
Correction：谱图校正
3. 谱图处理完了以后点击 File，选择 Export ASCII 即可以转换成文本文件。
五、荧光寿命（瞬态）的测量
视音频切换器
注：目前仪器的配置只能测量紫外可见区的荧光寿命，FLS980 配有两个脉冲灯(纳秒和
微秒灯)，一般情况下荧光强度在 50微秒内衰减到零用纳秒灯，荧光寿命大于 50 微秒衰减到零用微秒灯，具体设置和步骤如下：
(一)紫外可见荧光寿命(荧光强度在50-100ps微秒内衰减到零)测量步骤
1. 打开PH1， CO1， nF920 开关预热10分钟；
2. 打开计算机，双击桌面上 F980 图标进入工作站；
3. 点击 View 菜单，选择nF Lamp Setup 进入窗口
点击 Switch Lamp On，观察纳秒灯的频率，注意在此窗口不要更改设置，观察正常后关闭窗口。注意压力为0.42bar，如果发现频率不能稳定在 40kHz，请清洗氢灯，如果压力不正确请检查气密性重新
置换充入氢气，（置换氢气要反复15次吸气，充气充气压力不能大于1.5Bar，最后保持在0.42Bar）；
4. 点击软件窗口左上角的按钮，进入 Signal Rate 设置窗口，先将 Excitation Wavelength和 Em1 Wavelength 处的Δλ均设置为 0.01，按回车键(Enter)或者点击 Apply，再将 Source设置为 nF Lamp，Em1 Detector 为默认，然后点击 Apply；
5. 打开样品室，放入样品，盖好盖子，输入样品的 Excitation Wavelength 和 Em1 Wavelength值，逐渐加大Δλ，使 Em1 获得一个合适的 Signal Rate(一般不超过 2000)；stop rate 是star rate的5%
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