Ni-NTA Superflow Cartridge 手册
目录：
包装内容物（4）
储存和稳定性（4）
安全措施（4）
介绍（7）
Ni-NTA Superflow Cartridge说明书（7）
QIA表达系统（7）
Ni-NTA Cartirdge 接头（14）
天然或变性条件下纯化蛋白（15）
说明书
⏹ 天然条件下清澈的E.coli菌液的制备（16）
⏹ 变性条件下清澈的E.coli菌液的制备（18）
⏹ 从E.coli细胞制备6XHis-tag的胞质蛋白（IKRTV19）
⏹ 天然条件下从昆虫细胞中制备细胞菌液（20）
⏹ 使用注射器手动纯化6XHis-tag蛋白（21） ⏹ 使用自动层析系统纯化6XHis-tag蛋白（22）
问题的解决（23）
附录A：Buffer成分（25）
附录B; Ni-NTA Superflow Cartridge的清洁与再生（27）
包装包含物
牙签机Cat no. Ni-NTA Superflow Cartridge（1） Ni-NTA Superflow Cartridge（5） 说明书
30721 5 1
30725 100 1
30760 1 1
30761 5 1
30765 100 1
技术支持
在QIAGEN，我们为我们的技术支持的质量和有效性而感到骄傲我们的技术部门是由有广泛实验经验的技术人员和专家组成的，他们都从事分子生物学而且熟练使用QIAGEN的产品。如果您有任何问题或实验中遇到困难关于Ni-NTA SuperflowCartridge或QIAGEN的产品，请尽快。
QIAGEN用户是我们改进和专业化产品的主要信息来源。这些信息对于我们的科研人员与其他的科学家一样重要。因此您如果有什么关于产品的建议或新的需要和技术等等请尽快。
对于技术支持和更多的信息请联系QIAGEN的技术服务部或者当地经销商
储存和稳定性
Ni-NTA Superflow Cartridge应该储存在2-8度。不要冷冻。Cartridges在这样的条件下可以储存一年而性能不会发生任何改变。
产品局限性
Ni-NTA Superflow Cartridge仅供科研使用。没有声明或表述是用来为诊断，预防或疾病而提供信息。所有预料到的麻烦和注意事项东应该使用中注意。对于重组DNA实验，我们推荐所有用户参照NIH指导方法，或者其他的可用性指导方针。
产品授权和满意的保证
QIAGEN保证产品的效果在我们的产品文献中都有描述。顾客对于产品的特殊用途必须决定它的适用性。如果不是由于使用造成的产品性能问题，QIAGEN将会免费更换或退货。我们有权更换、更改或是调整任何产品以增强性能和设计。如果QIAGEN产品没有达到您的要求，的当地技术部门或是销售商。我们将相信您的理由或者交换产品----只要您愿意。分离条件应用于QIAGEN科学仪器，服务产品，干冰用于产品运输。请询问更多的信息
你还可以要求得到QIAGEN的条款和条件的副本，他会在我们的发票后提供给您。如果您有什么关于产品说明和性能的问题，请联系QIAGEN技术服务和当地经销商。
安全措施
当工作时使用化学药品时，通常要穿实验服装，带一次性手套和护目镜。更多的信息请咨询MSDSs。您可以在网站下载PDF或打印QANGE kit 和kit 组成
以下危险和安全性用语适用于Ni-NTA Superflow Cartridge。
包含乙醇和镍铵酸。伤害性的，感光的，易燃的。危险和安全用语：R10-22-40-42/43。S
13-26-36-46
24小时紧急情况
紧急医疗信息24小时内可以从Poison Information Center Mainz, Germany得到，有英语、法语和德语三种。电话：+49-6131-19240
介绍
QIAGEN Ni-NTA Superflow Cartridge毛毡包是预先装好Ni-NTA Superflow的1ml和5ml柱子，用来纯化6XHis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕动泵，或者液相层析系统（例如AKTA或FPLC）
Ni-NTA Superflow Cartridge
| 1ml Cartridge | 5ml Cartridge |
介质 | Superflow(6%高胶连琼脂糖) |
珠子直径 | 60-169微米 |
柱子体积 | 6.7mmX28mm | 14.7mmX29.8mm |
最大承受压 | 5bar，0.5MPa | 5bar，0.5MPa |
典型背景压力（BufferNP-10,10%甘油） | 1.0Bar，0.1MPa （1ml/min） | 2.0Bar，0.2MPa （5ml/min） |
推荐流速 | 1ml/min（155cm/h） | 5ml/min（170cm/h） |
最大流速 | 10ml/min（1560cm/h） | 40ml/min（1360cm/h） |
柱连接 | 表3，14页 | 表3，14页 |
短期储存PH稳定值(≤2H) | 2-14 | 2-14 |
长期储存PH稳定值(＞2H) | 3-12 | 3-12 |
| 至少20mg(1μ膜@20KDa) | 至少100mg(5μ膜@20KDa) |
系统兼容性 | 自动层析系统（例如AKTA，FLPC，BioLogic，BioCAD，Vision workstation）仓库管理流程 |
Cartridge材料 | 聚丙烯 |
连接器 | 1/16”(入口)；M6(出口) |
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Superflow自身最大可以使用的压力是10Bar。但是，Cartridges的稳定性仅在小于5Bar保证
高流速可能导致恢复6XHis-tagged蛋白减少
蛋白不同吸附能力不同
QIA表达系统
QIA表达系统以6Xhis tag为基础，这是一个亲和标签由6个连续的His残基组成。这个亲和标能够被QIAGEN独特的专利产品Ni-NTA金属吸附层析柱显著的选择吸附。QIA表达系统这个独特的特性提供了大量的显著优势（表一）而并不适合其他亲和标签和层析方法
表一：QIA表达系统的特点和优势
特点 | 优势 |
在6XHis和Ni-NTA间高亲和性和选择性吸附 | 在一步法标准纯化过程中的祷告纯度蛋白 |
6XHis tag与Ni-NTA作用不受基质结构约束 | 一步纯化能够在天然和变性条件下 |
使用温和的洗脱条件 | 吸附、冲洗、洗脱失高度的可再生，对蛋白结构没有影响 纯化蛋白可以直接应用于下游软件 |
6XHis tag比其他常用标签小的多 | 标签不会影响重组蛋白的结构和功能 |
6XHis tag在生理PH不带电荷 | 6XHis tag不会干扰分泌 |
6XHis tag不会产生抗原性 | 重组蛋白不用事先切除标签 |
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Ni-NTA Superflow
Ni-NTA Superflow由连接Superflow树脂的Ni-NTA组成。它将出众的机械稳定性和显著的流动特性及高效的动力吸附能力相结合。吸附6XHis-tagged蛋白的能力是5-20mg/ml。这种树脂对于效率生产登记和FPLC的要求允许使用一步法纯化6XHis-tag蛋白。Ni-NTA能力出众，适应试剂范围广泛，例如2M NaCl，10mM DTT，8M尿素，及许多去污剂（表二）
局限性
Ni-NTA基质不要暴露在高浓度的还原剂中，例如DTT，DTE；高浓度下，这些试剂还原Ni离子还可能阻止吸附6XHIS-Tag蛋白。Ni-NTA基质在还原剂中会变成棕。很多情况下，β-巯基乙醇能够在浓度不高于20mM时使用，DTT兼容性证明浓度可以到10mM。
EDTA，EGTA或其他任何强螯合剂吸附Ni离子并将他们从NTA上夺走。NTA基质缺乏NI时变白。使用任何还原剂或螯合剂都要当心，如果不确定，就在小量的Ni-NTA基质上作检测。高浓度的Buffer包含强的给电子集团或者氨基酸例如Arg、Glu、Gly、His，菌液中应该尽量避免。
细胞应该被溶解。不要用强的螯合剂如EDTA，强的还原剂如DTT，或者离子去垢剂如SDS。虽然有些例子表明这些试剂小剂量的应用没有问题，但是我们还是不推荐使用。
更多的详细信息，见表二
Ni-NTA Superflow试剂的兼容性
试剂 | 作用 | 建议 |
缓冲液试剂 Tris，HEPES，MOPS | 二级胺或三级胺会还原Ni离子 | 可以用低于100mM。推荐使用磷酸盐 |
螯合剂 EDTA，EGTA | 从基质螯和Ni离子 | 低于1mM有成功的先例，但是应该小心使用 |
硫化试剂 β-巯基乙醇 DTT，DTE | 阻止二硫键形成。高浓度还原Ni离子 高浓度（大于1mM）基质可逆的变棕，取决于Ni的还原。低于10mM证明没有影响纯化和增加Ni的脱落 | 低于20mM可以使用。还原条件下不要储存基质 低于10mM DTT可以使用。还原条件下不要储存基质 |
去垢剂 非离子去垢剂（Triton，Tween，NP40） 阳离子去污剂 CHAPS 阴离子去污剂（SDS、sarkosyl） TritonX-114 | 恒温阀门去除背景蛋白和核算 去除内毒素 | 低于2%可用 低于1% 低于1% 不推荐，但是低于0.3%有成功地先例 低于2% |
变性剂 盐酸胍 尿素 | 增溶蛋白 | 低于6M 低于8M |
氨基酸 Gly Glu Arg His | 与Ni-NTA吸附，并与6XHis tag 竞争 | 不推荐 不推荐 不推荐 低浓度可用（20mM）于阻止非特异性吸附，高浓度（大于100mM）从Ni-NTA基质洗脱6XHis-tagged蛋白 |
其他添加剂 NaCl MgCl2 CaCl2 甘油 乙醇 BugBuster蛋白提取试剂 咪唑 碳酸氢钠 血红蛋白 铵 柠檬酸酸盐 | 阻止离子间互作 阻止蛋白的疏水作用 阻止蛋白的疏水作用 与Ni-NTA吸附，并与6XHis tag 竞争 | 环境模拟舱300mM至2M都可以用 小于4M 小于5mM 小于50% 小于20% 按推荐使用 低浓度可用（20mM）于阻止非特异性吸附，高浓度（大于100mM）从Ni-NTA基质洗脱6XHis-tagged蛋白 不推荐 不推荐 不推荐 低于60mM |
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Cartridge连接器
Ni-NTA Superflow Cartridge可以手动纯化蛋白（用注射器），也可以自动纯化（使用层析系统，例如AKAT或FPLC系统）。Cartridge进样口和出样口的尺寸和要求的连接器及手动和自动纯化所需适配器详细情况如下表
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