蛋白质的十种提取方法.txt大人物的悲哀在于他们需要不停地做出选择;而小人物的悲哀在于他们从来没有选择的机会。男人因沧桑而成熟,女人因成熟而沧桑。男人有了烟,有了酒,也就有了故事;女人有了钱,有了资,也就有了悲剧。蛋白质提取方法-------列举10种方法 [ 来源: 绿谷生物网 点击数: 4587 更新时间: 2008年05月30日 ][ 收藏本文 ]
一、
植物组织蛋白质提取方法(summer)
1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清夜,样品制备完成。
蛋白质提取液:300ml
碳海绵
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
柜台制作
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
二、
植物组织蛋白质提取方法 (summer)
涂料过滤器三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
水辊清洗剂3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1
小时),然后真空
干燥沉淀,备用。
生物塑化4、上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小
红外感应水龙头
时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
药品:
提取液:含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M 的