实验室常用试剂、缓冲液的配制
1 M Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度 1 M Tris-HCl
配制量 1 L
配制方法 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温
度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
1.5 M Tris-HCl(pH8.8)
组份浓度 1.5 M Tris-HCl
配制量 水电安装开槽机1 L
配制方法 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温
度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
10×TE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
配制量 1 L
配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
降膜吸收塔
3 M 醋酸钠 (pH5.2)
组份浓度
配制量
配制方法
PBS Buffer
组份浓度 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
配制量 1 L
配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
10 M 醋酸铵
组份浓度 10 M 醋酸铵
配制量 100 ml
配制方法 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
Tris-HCl平衡苯酚
配制方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红或黄，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
ee222. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作
均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡
使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下
放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完
全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄，有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层
后，除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分
层后，除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕玻璃瓶中4℃避光保存。
苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白
质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕玻
璃瓶中4℃保存。
10% (W/V) SDS
2 N NaOH
eva母
组份浓度 2 N NaOH
配制量 100 ml
配制方法
1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
2.5 N HCl
组份浓度 2.5 N HCl
配制量 100 ml
配制方法 1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N），均匀混合。
2. 室温保存。
5 M NaCl二维力传感器
组份浓度 5 M NaCl
配制量 1 L
配制方法 1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
20% (W/V) Glucose
组份浓度 20% (W/V) Glucose
配制量 100 ml
配制方法
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
Solution I(质粒提取用)
组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0）, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
配制量 1 L
配制方法 1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 ml的恒温阀门Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml）。
Solution II (质粒提取用)
组份浓度
配制量
配制方法
Solution III (质粒提取用)
组份浓度 3 M KOAc, 5 M CH3COOH
配制量 500 ml
配制方法 1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA (pH8.0)
组份浓度 0.5 M EDTA
配制量 1 L
配制方法 1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
1 M DTT
组份浓度 1 M DTT
配制量 20 ml
配制方法 1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
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