生物化学与分子生物学常用试剂配方

配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)

0.125M Tris

1.25M glycine(甘氨酸)

0.5%(W/V)SDS

30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL

【组分浓度】

各种组分名称	配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
30%Acr-Bis(29:1)	1000ml 钽酸锂晶片	100ml
29%Acrylamide(丙烯酰胺)	290g	29g
1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺)	10g	1g

【配制方法】

将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】

4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存
【注意事项】

丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）

【组分浓度】

【配制方法】

称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5煅后焦倍。

【保存条件】

室温保存，两年有效。

【注意事项】

配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。

双面针织机

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL

【组分浓度】10%(w/v)SDS

【配制方法】

称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

保存条件：
4℃保存。
注意事项：
易燃，有腐蚀性，请注意防护。
易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。保存条件：

4℃保存。
注意事项：
易燃，有腐蚀性，请注意防护。
易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套对人体有害，请注意防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

膜转移缓冲液(Transfer Buffer)配方一：takara

【组分浓度】

获取信息的方法

各种组分名称	配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
	1000ml	100ml
39mM glycine(甘氨酸)	2.9g
48mM Tris	5.8g
0.037%(w/v)SDS	0.37g
20%(v/v)methanol(甲醇)	200ml

【配制方法】

称取2.9g甘氨酸（glycine），5.8gTris碱，0.37g SDS溶于约600mL的去离子水，充分搅拌溶解，定容至800mL后，并加入200ml甲醇，摇晃混匀，室温保存。

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可

以不加 SDS。

2保持 20%的甲醇浓度

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

膜转移缓冲液(Transfer Buffer)(pH8.5)配方二：cell signal

【组分浓度】

各种组分名称	配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
	500ml	100ml
0.2M glycine(甘氨酸)
25mM Tris
20%(v/v)methanol(甲醇)	100ml
PH值8.5

【配制方法】500ml

先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,PH约11

1M 12.5ml Tris base + 7.5g glycine(MW:75.05) +100ml methanol+ ddH2O 至400ml,调好PH值8.5, 再加ddH2O至500ml. 先置于4℃保存备用。

【保存条件】

4℃保存

【注意事项】

1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可

以不加 SDS。

2保持 20%的甲醇浓度

摘自Cell signal Technology Protocol

llsignal/support/protocols/Western.html

1MTris-HCL（pH6.8）配制10mL

【组分浓度】1MTris-HCL

【配制方法】

称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定消声室制作pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】

室温保存。

【注意事项】

对人体有刺激性，请注意适当防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

1.5MTris-HCL（pH8.8）配制20mL

【组分浓度】1.5MTris-HCL

【配制方法】1L

称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。）

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。摘自Takara 商品目录--实验室常规

试剂配制方法

5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer 需要3ml

【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；

10%(W/V)SDS；

0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；

50%(V/V) 甘油；

5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)

各种组分名称	配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
	5ml	3ml
1MTris-HCL(pH6.8)	1.25ml
SDS	0.5g
BPB(溴酚蓝)	25mg
甘油	2.5ml
（0.5mL/份）分装，室温保存，使用前加25μL 2-ME/小份，保存一个月左右。
β-巯基乙醇(2-ME)	0.25ml

【配制方法】

量取1.25mL 1MTris-HCL（pH6.8），0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保存。使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

【保存条件】

-20℃保存，至少一年有效。

【注意事项】

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)AP 1ml

【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵

【配制方法】

称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1ml去离子水吹打溶解，4℃保存

【保存条件】

4℃保存

【注意事项】

10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用

一次性称取4、5管过硫酸铵（0.1g/管），使用时加1ml去离子水溶解

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

TBST Buffer

【组分浓度】20mMTris-HCL

150mM NaCl；

0.05%（v/v）Tween 20

各种组分名称	配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)
	1000ml	400ml
NaCl	8.8g	3.5g
1MTris-HCL(pH8.0)	20ml	8ml
Tween 20	0.5ml	0.2ml

【配制方法】

称量8.8g NaCl , 20ml 1MTris-HCL(pH8.0)置于1L烧杯中，加约800ml的去离子，磁力搅拌30min充分溶解，加入0.5ml Tween20后充分混匀，去离子水定容至1L，4℃保存

【保存条件】

4℃保存

【注意事项】

Tween20 非常粘稠，用头不易吸取，请确定加入准确的量

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

10xTBS (concentrated TBS)-- 10X Tris Buffered Saline

伪装无线摄像头【组分浓度】 200 mM Tris

1.37M NaCl(Sodium Chloride)

【配制方法】1L

称量24.23g Tris base, 80.06g NaCl，加约 800 ml 超纯水，用纯HCl调pH 至7.6，定容至 1 L.

【保存条件】

【注意事项】

摘自Cell signal Technology Protocol

llsignal/support/protocols/Western.html

Tris Buffered Saline with Tween 20 (TBST-1X)

【组分浓度】 20mM Tris,

137mM Sodium Chloride,

本文发布于:2024-09-22 15:42:22，感谢您对本站的认可！

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