文库构建过程中各种酶试剂
一、T4DNA Polymerase
DNA 模板上，从5'→3'方向催化DNA合成反应。T4DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。 特点：T4DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA 外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4DNA Polymerase 所消化。T4DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约200倍。
用途：T4DNA Polymerase可用于催化以下反应：DNA 5'或3'突出末端的平滑化；通过置换反应进行标记DNA探针合成；定点突变过程中第二链的合成；不依赖于连接反应的PCR产物克隆。 来源：本T4DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：67mM Tris-HCl(pH8.8)，6.7mM MgCl
2
，1mM DTT，
16.7mM(NH
4)
2
SO
4
，0.2mg/ml BSA，0.033mM of each dNTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，
0.2mM 热变性且经DNA酶部分消化过的小牛胸腺DNA。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。无线演示控制器
酶储存溶液：20mM potassium phosphate(pH7.5)，200mM KCl，2mM DTT，and 50% glycerol。
Reaction Buffer(5X)：335mM Tris-HCl(pH8.8at25℃)，33mM MgCl
2
，5mM DTT，84mM
(NH
4)
2
SO
4
。
缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中
的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为75-100%。
失活或抑制：70℃加热10分钟可使T4DNA Polymerase失活。金属离子螯合剂可以抑制T4DNA Polymerase的活性。
包装清单：
产品编号产品名称包装
D7051-1 T4 DNA Polymerase(5U/μl) 50U
D7051-2 Reaction Buffer(5X) 0.3ml
－说明书1份保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
二、T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
用途：T4DNA Ligase常用于DNA片段和载体、linker或adapter等的连接。也可以用于缺刻修复及Ligase介导的RNA检测。
来源：本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM(300 μg/ml)。200U等于1个Weiss unit，以Weiss unit计，本产品共200单位。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规连接反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50%(v/v)glycerol。
10X Ligation Buffer：400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl
, 100 mM DTT,
2
5 mM ATP。
失活或抑制：65℃孵育10分钟可以导致T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl 浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA Ligase。
包装清单：
产品编号产品名称包装
D7006-1 T4 DNA Ligase(1000U/μl) 40,000U
D7006-2 10X Ligation Buffer 0.3ml
－说明书1份保存条件：
工业除尘器制造-20℃保存。
注意事项：
对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后再进行电转。
需进行平端连接或快速连接时，推荐使用碧云天的快速DNA连接试剂盒(D7002/D7003)。T4DNA Ligase可以进行平端连接，但效率较低。
普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在65℃孵育10分钟使T4 DNA Ligase失活，以避免T4 DNA Ligase 和DNA结合导致的条带位置迁移(band shift)。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
三、Klenow Fragment
Klenow Fragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶li.DNA polymerase I)的大片断(Large Fragment)。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。
特点：对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。
用途：双链DNA5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA 标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
，1mM 酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl
2
2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
，Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl
2
10mM DTT。
缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment 失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment有抑制作用。
包装清单：
织布机维修产品编号产品名称包装
D7035-1 Klenow Fragment(2U/μl) 100U
D7035-2 Reaction Buffer(10X) 0.3ml
－说明书1份保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
四、T4 PNK
T4 Polynucleotide Kinase，简称T4 PNK，中文名称T4多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。
上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。
当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NTP + NDP →5'-P + NDP + NTP。
T4 Polynucleotide Kinase同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。
电视机高频头
T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、
DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端连接；去除3'端磷酸基团。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl
2
，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
自动启闭阀
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at
机床数据采集
25℃)，100mM MgCl
2
，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at
25℃)，0.18M MgCl
2
，
50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
缓冲液兼容性：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X G、1X O、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X R中的活性为75-100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为50-100%。
失活或抑制：75℃加热10分钟可使T4Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
包装清单：
产品编号产品名称包装
D7096-1
T4 Polynucleotide
Kinase(10U/μl)
100U
D7096-2 Reaction Buffer A(10X) 80μl
D7096-3 Reaction Buffer B(10X) 40μl
D7096-4 24% PEG Solution 40μl
－说明书1份保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议