水质8种喹诺酮类抗生素的测1
型采定高效液相谱-串联质谱法
1范围
本文件描述了高效液相谱-串联质谱法测定水中8种喹诺酮类（沙星类）抗生素的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、实验步骤、结果计算、精密度、检出限和定量限。 本文件适用于地表水和废水中麻保沙星（Marbofloxacin）、氟罗沙星（Fleroxacin）、氧氟沙星（Ofloxacin）、恩诺沙星（Enrofloxacin）、奥比沙星（Orbifloxacin）、沙氟沙星（Sarafloxacin）、双氟哌酸（Difloxacin）和司帕沙星（Sparfloxacin）共8种喹诺酮类抗生素的测定，其他喹诺酮类化合物经适用性验证可参照执行。2
规范性引用文件电价查询
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法HJ/T 91地表水和污水监测技术规范
HJ/T 92水污染物排放总量监测技术规范3
术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。4
原理
水中的喹诺酮类抗生素采用固相萃取柱富集，用液相谱—三重四极杆串联质谱（行检测。根据保留时间和特征离子峰定性，外标法定量LC-MS/MS）仪进。5
试剂和材料
5.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水的要求。5.25.35.45.CH 3CN）：谱纯。CH 3OH）：谱纯。
5乙腈（甲醇（甲酸（硫酸（HCOOH）：ρ（H 2SO 4）：ρ（HCOOH）=1.22g/mL。H 2SO 4）=1.84g/mL。5.6氢氧化钠（NaOH）。
乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。
氢氧化钠溶液：ρ（NaOH）=0.4g/mL。称取40g 氢氧化钠（5.6）溶于水中，定容至100mL。甲酸溶液：1+2000。取1mL 甲酸（5.75.85.95.1 5.4）加入2000mL 水中。
0甲酸/甲醇混合溶液：1+1000。取1mL 甲酸（5.4）加入1000mL 甲醇（5.3）中。
5.11喹诺酮类抗生素标准贮备液：ρ=100μg/mL（甲醇介质）。可直接购买有证标准溶液，也可用固体标准物质制备，组分包括麻保沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、奥比沙星、沙氟沙星、双氟哌酸和司帕沙星。贮备液在-20℃以下避光保存或参照制造商的产品说明。使用时应恢复至室温，并摇匀。
5.12
2喹诺酮类抗生素标准使用液：ρ=1.0μg/mL (参考浓度)。将喹诺酮类抗生素标准贮备液（5.11）按需要用甲醇（5.3）稀释。标准使用液现配现用。5.13滤膜：13mm，0.22μm，有机相。5.14氮气：纯度≥99.99％。6
仪器和设备
6.1液相谱—串联质谱仪：配有电喷雾电离源（ESI）。
6.2柱。6.36.46.谱柱：填料为3.5µm ODS，柱长10cm，内径2.1mm 的反相谱柱或其他等效C 18反相液相谱5固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。
双面绣是谁发明的固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或等效萃取柱，规格为6mL/200mg。浓缩装置：旋转蒸发装置或氮吹浓缩仪等性能相当的设备。6.6pH 计：精度为0.01个pH 单位，具有温度补偿功能。
6.7微量注射器或移液：10μL、50μL、100μL、250μL、1000μL。6.8采样瓶：250mL 或500mL 具磨口塞的棕玻璃瓶。
7样品制备7.1
样品采集
7.1.1按照HJ/T 91和HJ/T 92的相关规定采集样品。
7.1.2用预先洗涤干净并干燥的磨口棕玻璃瓶（6.8）采集水样，采样前不应用水样预洗采样瓶，采样瓶应完全注满不留气泡。7.2
样品保存
水样4℃以下冷藏，避光保存，3d内萃取完毕。7.3试样制备7.3.1
直接进样法
取适量水样经0.22μm滤膜（5.13）过滤，置于进样瓶中，等待进样。7.3.2
固相萃取法
分别用10mL甲醇（5.3）和10mL水活化固相萃取柱（6.4），在活化过程中应确保小柱中填料表面不露出液面。量取200mL水样，加入0.5g EDTA（5.7），使用硫酸（5.5）或氢氧化钠溶液（5.8）调节水样的pH值至3.0±0.1，水样以约5mL/min的流速通过固相萃取柱。再用10mL水淋洗小柱，去除杂质。5.14）吹干小柱。用3mL甲酸/甲醇混合溶液（之后用氮气（甲醇混合溶液 5.10）洗脱富集后的小柱，再用3mL甲酸/（5.10）浸泡小柱5min，用6mL甲酸/甲醇混合溶液（5.10）以1mL/min的速度洗脱样品，收集全部洗脱液。用浓缩装置（6.5）将上述洗脱液浓缩至1.0mL以下，用甲醇（5.3）定容至1.0mL，混匀后过0.22μm滤膜（5.13），置于进样瓶中，待测。7.4空白试样的制备7.4.1实验室空白
7.4.1.17.4.1.27.4.7.3.1）相同操作步骤，制备直接进样法空白试样。7.3.2）相同操作步骤，制备固相萃取法空白试样。2
以水代替样品，按照水样处理（以水代替样品，按照水样处理（全程序空白
采样前按照样品采集（7.1）和样品保存（7.2）方法，用水代替样品，在采样现场制备全程序空白样品。8
实验步骤
8.1
仪器条件
8.1.1液相谱条件3
：
5.9），流动相B 乙腈（——流动相：流动相A 甲酸溶液1+2000（——流速：0.5mL/min；——柱温：25℃；
——进样体积：5.0μL 5.2），梯度洗脱程序见表1；。
表1
液相谱流动相梯度洗脱程序
时间min 流动相A
%流动相B
%090107.075257.1356512.0208012.1901014.0
90
10
8.1.2质谱条件：
拉丝模激光打孔机——电喷雾离子源（ESI），正离子模式；——毛细管电压：4.0kv；——干燥气温度：350℃；——干燥气流速：11L/min；——雾化气气压：25psi；
——多离子反应监测方式（MRM），条件见表2。
表2
目标化合物的多离子反应监测条件
母离子m/化合物z 子离子m/z 驻留时间
s 碎裂电压V 碰撞能eV 麻保沙星344.363.09120.0502072.1*12025氟罗沙星326.0369.9*140.05015269.014025氧氟沙星317.9361.9*140.05015260.814025恩诺沙星341.9360.0*130.05020316.013015奥比沙星378.0359.9*140.05015352.014015沙氟沙星367.8386.0*140.05020342.014015双氟哌酸381.9400.0*140.05020356.014015司帕沙星
349.0393.0
*0.0515015291.8
编织袋缝底机0.05
150
25仓储室内定位系统
注：带*的为定量离子。
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