AP最前沿TRO40303通过降低脂肪酸乙酯引起的线粒体损伤和细胞坏死改善酒精性胰腺炎 【据Pancreas 2018年1月报道 题：TRO40303 Ameliorates Alcohol-Induced Pancreatitis Through Reduction of Fatty Acid Ethyl Ester–Induced Mitochondrial Injury and Necrotic Cell Death 作者：Muhammad Ahsan Javed等】
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飞轮壳
背景
数字调节器每年100000个人中可能有100个患急性胰腺炎（AP），他们主要是由胆石症或酒精摄入过多引起的。其中20%病例为重症，常伴有胰腺坏死、多脏器衰竭、住院时间延长、死亡等并发症。尽管迄今为止已进行数百个临床随机试验，但对于这种常见的疾病国际上尚无明确的特异物。这种最常见的胃肠急症在美国住院每年花费约26亿美元。
胰腺的坏死以严重的病理生理改变为特征，包括线粒体肿胀、质膜破坏以及活化的消化酶和其他细胞内容物的渗漏，从而触发胰腺周围组织的急性渗出性炎症。坏死是预测AP患者预后的关键，因为临床胰腺坏死通常在几天而不是几小时内发展，那么可以在窗口期内通过合适的机制靶向来预防坏死。胰腺炎毒素使内质网钙库过度释放从而导致腺泡细胞（PAC）胞浆钙超载。胞浆钙超载引起线粒体基质钙超载，进而诱导线粒体通透性转换孔（MPTP）。MPTP是一个非特异性的线粒体内的膜通道，导致产生ATP所必需的线粒体膜电位（Δψm）丢失。抑制MPTP 可以使PACs在应激状态下维持ATP的产生，这可能是AP的策略。
脂肪酸乙酯（FAEES）是一类重要的胰腺炎毒素，在胰腺中的单位重量超过其他任何器官，乙醇过度非氧化代谢后将使其达到很高浓度。我们已经证明FAEES通过诱导内质网的
第二信使受体钙通道释放引起胰腺腺泡胞浆钙超载，导致线粒体损伤和ATP生成减少，伴随细胞内消化酶过早激活。我们通过同时给予乙醇和脂肪酸（FAEE-AP）已经建立了一个体内AP模型。抑制FAEE合成或促进FAEE水解可以降低AP的严重性表明FAEES是主要毒素来源。初始的数据使用环孢菌素A拟似物Debio-025已经证明在FAEE-AP中抑制MPTP可以产生保护作用，这与在其他模型的结果一致。
油烟机油杯TRO40303（3,5-环-4-去甲胆甾烷-5-酮肟-3-醇）是一种胆固醇肟类细胞保护化合物，与外线粒体转移蛋白（TSPO）结合可以延缓心肌细胞MPTP开放和细胞死亡，已被证明显著减少大鼠心肌坏死的程度。TRO40303保护HepG2细胞和小鼠胚胎肝细胞免受棕榈酸毒性，并显著降低在FAS诱导肝脏毒性的小鼠死亡率。第1阶段临床试验表明，TRO40303在人体内通过静脉给药是安全的。我们原先已经证实10μM TRO40303能保护PACs免受胆汁酸引起的线粒体损伤和坏死，而3 mg/kg TRO40303可以降低雨蛙素（CER-AP）诱导和胆汁酸（牛磺胆酸-3-硫酸酯[TLCS] -AP）诱导的实验AP的严重程度。本研究评估不同浓度的TRO40303对暴露于FAEES或TLC的小鼠和人PACs的影响。由于亲环素D（Cyp- D）是调节MPTP开放不可或缺的部分，我们还评估了Cyp-D是否为TRO40303的潜在靶点。为了确定体内效应，我们评估了TRO40303 24小时内的药代动力学。
一体机教学
材料与方法白酒瓶盖
我们在皇家利物浦大学医院内选择没有黄疸或慢性胰腺炎病史，接受过选择性左侧胰腺切除术、十二指肠肿瘤切除或非梗阻性右侧肿瘤切除的正常人的胰腺组织样本。利用野生型8-12周的，重约30g的CD1小鼠进行PAC分离和细胞实验。超过25g的C57B1/6小鼠进行体内动物实验。
1. 共聚焦显微镜
我们选择具有完整荧光染料外形的双染或三染的腺泡细胞，记录它们的n0492∆ψm 和 [Ca2 +]c。将活腺泡细胞与置于50nM四甲基罗丹明甲基酯(TMRM)测量∆ψm。同样地测量 [Ca2 +] c 的变化, 细胞置于3μM的Fluo-4中测定[Ca2 +]c的变化。阳性对照组细胞先用 TRO40303预处理30min，在测定荧光基线水平（F0）后，用100μM棕榈油酸乙酯（POAEE）或500μM TLC刺激细胞，最后加入10μM的羰基氰间氯苯肼。每隔5至10秒拍照一次测量∆ψm 和 [Ca2 +]c。TMRM和FLUO-4荧光信号均归一化为基线荧光（F/F0）。
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