张亦琳;延永;葛颖;程敏
【摘 要】以棕榈油皂粒为皂基制备熊果酸香皂,按照国家标准方法对香皂中游离苛性碱、水分和挥发物含量进行检测,采用平板计数法和动物实验对该香皂的体外抑菌作用和安全性进行研究.结果表明,熊果酸香皂对白假丝酵母、肺炎克雷伯氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、MRSA1和MRSA2均具有明显抑菌作用,在熊果酸质量分数为7.5％时抑菌效果最为显著,动物实验表明香皂对小鼠皮肤和眼睛黏膜无不良反应和毒副作用,长期使用不会对皮肤产生刺激性. 【期刊名称】《日用化学品科学》
煤矸石烧结砖【年(卷),期】2018(041)001
【总页数】4页(P15-18)
【关键词】香皂;熊果酸;抑菌效能;生物活性
【作 者】张亦琳;延永;葛颖;程敏
【作者单位】商洛学院生物医药与食品工程学院,陕西商洛726000;商洛学院生物医药与食品工程学院,陕西商洛726000;西北大学化学与材料科学学院,陕西西安710069;商洛学院生物医药与食品工程学院,陕西商洛726000
【正文语种】中 文
【中图分类】TQ648
熊果酸（Ursolic Acid）属于五环三萜类化合物，主要以游离形式或与糖结合成苷的形式分布于约7个科46个属62种植物的叶子或果实中[1]。熊果酸具有抗炎[2,3]、抑菌[4,5]和抗氧化活性[6]，可广泛应用于医药和化妆品行业[7]。目前，熊果酸在香皂领域的应用鲜有报道，笔者研究在传统香皂制作基础上加入不同量抑菌成分熊果酸制备熊果酸香皂，分别对其游离苛性碱含量、水分和挥发物含量进行检测，并采用琼脂扩散法对白假丝酵母、肺炎克雷伯氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、MRSA1、MRSA2等6种细菌进行体外抑菌效果研究，通过小鼠实验进行急性皮肤毒性试验、皮肤刺激性试验和急性眼刺激试验考察
其生物安全性，比较香皂性能及安全性，以期获得制备熊果酸香皂的最佳配比，同时为拓展熊果酸的应用领域提供一定理论依据。
1 实验部分
1.1 主要试剂与仪器
熊果酸，w=80%，陕西森弗天然制品有限公司；白假丝酵母（Canidia Albicans）ATCC10231、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC9027、伤寒沙门氏菌（Salmonella Enterica）CMCC（B）50071、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella Pneumoniae）CMCC46117，陕西微生物研究所；MRSA1（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 1）、MRSA2（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 2），第四军医大学临床病人分离所得，质控菌株为金黄葡萄球菌标准菌株；胰蛋白胨、琼脂粉、牛肉膏，西安科昊生物工程有限公司；生理盐水、高纯水，自制；其他化学试剂均为分析纯。SW-CJ-2D超净工作台，上海树立仪器仪表有限公司；YX600W高温灭菌锅，上海三申医疗器械有限公司；LRH-150F恒温培养箱，上海齐欣科学仪器有限公司；HY-2恒温调速振荡器，上海皓庄仪器有限公司；PB-10 pH计，赛多利斯科学仪器有限公司；UV-1780紫外可见分光光度
计，日本岛津仪器公司。
皮衣加工1.2 实验方法
1.2.1 熊果酸香皂制备
准确称取适量市售棕榈油皂粒，以670 g/L质量浓度与蒸馏水混合，于95 ℃水浴加热搅拌至糊状[8]，然后分别加入质量分数为1.25%、2.5%、7.5%、10%的熊果酸，充分混匀后浇筑至模具中，置室内干燥处塑形干燥即得熊果酸香皂。
1.2.2 性能测试
1.2.2.1 游离苛性碱测定[9]
根据QB-T 2623.1-2003，采用化学滴定法用0.1 mol/L盐酸乙醇标准液进行测定。实验室配制0.1 mol/L的盐酸乙醇标准溶液，现配现用，分别滴定1.2.1中所得香皂游离苛性碱含量并计算。
工艺拖鞋1.2.2.2 水分和挥发物含量测定[10]
根据QB-T 2623.4-2003，将制备成型并进行真空干燥的香皂分别称量后捣碎，80 ℃下置于电热恒温干燥箱中干燥30 min，冷却至室温称量，再放入电热恒温干燥箱中于80 ℃加热30 min，冷却至室温称量，直至连续2次称量值差距在0.01 g范围内。水分和挥发物含量=（m0-m1）/（m0-m2）×100%（m0为干燥前质量，m1为干燥后质量，m2为称量纸质量）。
1.2.2.3 抑菌实验[11]
采用琼脂平板培养法，以白假丝酵母、肺炎克雷伯氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、MRSA1、MRSA2为指标菌，每种菌均分为实验组和空白对照组，平行3次进行体外抑菌实验。
培养基的制备：首先取适量1.2.1制得的香皂，将其捣碎成粉末，准确称取0.3 g香皂粉末于10 mL容量瓶中，高纯水定容，通过滤膜过滤除去杂菌即制得无菌香皂水溶液。将制得的无菌香皂水溶液以体积分数为2%加入到无菌营养琼脂培养基中，以此作为实验组。同样方法制备空白对照组，即不加香皂水溶液的培养基。
接种菌：在菌瓶中加入15 mL牛肉膏培养基溶液，用无菌接种环挑取3～5个相似菌落于菌瓶中，将菌瓶置于恒温振荡器中37 ℃培养4～6 h，细菌增长量达到对数生长期后，用比浊计校正菌液至0.5麦氏比浊度，即O.D.600=0.1；在每个培养基中加入稀释好的菌液5 μL，均匀涂布于实验组和对照组培养基平板表面，置于恒温培养箱中37 ℃左右培养14 h后取出。细菌减少量计算公式为：细菌减少量=（空白组菌落数-实验组菌落数）/空白组菌落数。
1.2.2.4 皮肤毒性和刺激性实验[12]
根据GB/20609-2008，取健康大鼠4只，雌雄各半，在大鼠背部两侧选取完整皮肤去掉背毛，露出大小约为6.25 cm2的无破损皮肤。香皂使用剂量为3.00 g/kg [17]，称取0.90 g熊果酸香皂粉末（3种含不同质量分数熊果酸的香皂）与10.00 g凡士林混合，涂在大鼠背部皮肤一侧，另一侧涂有相同剂量凡士林为自身对照。观察7 d内大鼠皮肤出现的健康损害效应并记录。同上，在大鼠背部选取健康无破损皮肤涂以香皂，分别在涂敷后1、24、48和72 h观察所涂部位皮肤的刺激反应。 1.2.2.5 急性眼刺激实验[13]
根据GB/20609-2008，剂量设计为0.40 g/kg，将0.12 g研成粉末的熊果酸香皂用10 mL生理盐水充分溶解，在大鼠左眼结膜囊处滴入溶解的熊果酸皂液，使皂液充分融入，右侧眼不处理，为自身对照。1 h后观察大鼠眼睛被刺激的程度并记录，之后每天观察1次，连续观察7 d。
音频切换器2 结果与讨论
按1.2.1制备香皂，实验结果表明，当熊果酸质量分数为10%时，因加入量过大，不能很好融入皂基混合液中，当熊果酸质量分数为1.25%、2.5%、7.5%时，均可获得质地均一的产品。
2.1 游离苛性碱
压延加工游离苛性碱分析结果见表1。由表1可知，含有熊果酸质量分数为1.25%、2.5%、7.5%的熊果酸香皂中游离苛性碱含量分别为0.08%，0.10%，0.06%，均在QB/T 2486-2008规定范围（≤0.1%）[14]，质量分数为7.5%时，游离苛性碱含量最低。
表1 游离苛性碱含量Tab.1 Content of free caustic alkali
激光熔覆工艺
2.2 水分和挥发物
按1.2.2.2方法测定水分和挥发物含量，实验结果见表2。由表2可知，含有熊果酸质量分数为1.25%、2.5%、7.5%的香皂中含水分与挥发物含量分别为27.13%、22.75%、18.23%，均符合国家标准中II类规定（≤30%）；当熊果酸质量分数为7.5%时，水分和挥发物含量最低，并且随着熊果酸添加量的减少，水分和挥发物含量逐渐增加。
表2 水分和挥发物含量Tab. 2 Contents of water and volatiles
2.3 抑菌活性
体外抑菌实验结果见表3。由表3可知，虽然熊果酸质量分数不同，但较空白对照组相比，其培养基平板上的6种细菌菌落明显减少，并呈现出随着熊果酸含量增加，抑菌效果呈显著上升趋势。与空白组比较，当熊果酸质量分数为7.5%时，香皂的抑菌效果最好。
表3 熊果酸香皂体外抑菌实验Tab.3 Bacteriostatic effects in vitro of the ursolic acid handmade soap白假丝酵母 18.70 43.50 58.80
2.4 急性皮肤毒性
观察期间，受试大鼠均没有出现抓挠皮肤、骚动不安、萎靡、抽搐和意识障碍等不良行为，受试大鼠皮肤也没有干燥、红肿、疱疹、渗出等异常变化。经3次平行实验，涂敷部位均没有出现急性毒性作用现象。
2.5 皮肤刺激性
对大鼠皮肤刺激性的观察结果显示，含熊果酸质量分数为2.5%和7.5%的香皂在涂敷1 h后，观察到有2只受试大鼠的涂敷部位稍有红斑，但没有出现水肿现象。参照皮肤刺激强度分级标准，求得积分值均为0.5，属于轻刺激性。随着涂敷时间的延长，观察到皮肤被刺激出现的红斑症状逐渐缓解并慢慢消失， 72 h时完全消失，涂敷熊果酸香皂粉末的受试大鼠背部再未观察到有红斑及水肿症状。含熊果酸质量分数为1.25%的香皂在72 h既没有观察到受试大鼠的涂敷部位有红斑也没有观察到有水肿，根据皮肤刺激强度分级标准计算积分值均为0，即为无刺激性。
2.6 急性眼刺激
熊果酸香皂液分别滴入大鼠眼睛，与眼睛黏膜接触1 h后观察大鼠角膜均无浑浊，受损面积
均小于1/4；虹膜有轻微肿胀，出现皱褶，但没有出现充血现象；结膜未观察到有充血，但分泌物有所增加，稍有水肿。接触24 h后观察，虹膜肿胀症状消失，没有充血现象，瞳孔对光有反应，正常反射；结膜血管充血正常，仍有分泌物和水肿症状，但与1 h时对比并未加重。接触48 h后观察，结膜中分泌物有明显减少，而且水肿症状也有缓解。接触7 d后观察，受试大鼠眼刺激症状全部消失，各项指标均正常。由表4可知，所制熊果酸香皂对大鼠眼部无刺激性。
表4 熊果酸抑菌皂对眼黏膜刺激性Tab. 4 The eye mucosal irritation of the ursolic acid antimicrobial soap注：皮肤刺激强度评价0～0.4无刺激性；0.5～2.9轻刺激性；3.0～5.9中等刺激性；6.0～8.0强刺激性。1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0
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