AFP检测——ELISA法
【申请单】
×××市人民医院检验申请单
姓名 |
性别 年龄 |
门诊号 住院号 |
诊断或症状 |
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检验目的 |
送检科室 医师 |
送检日期 年 月 日 |
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【方法选择】
方法 | 电化学发光法 | ELISA法 | RIA法 |
本次检查选择 | | √ | |
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【材料准备】
1.人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量检测试剂盒。
2.受检者血清。
3.水浴箱/37℃恒温箱。
4.加样。
5.酶标仪。
【操作方法】
按试剂盒使用说明书或实验室制定的SOP进行操作，主要操作流程如下：
1.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 2.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6.显：每孔先加入显剂A50μl，再加入显剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显10 分钟.
7.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝立转黄)。 8.测定：以空白空调零，450nm酮康唑香波波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【结果计算】
以标准品浓度（ng/ml）为横坐标，OD值（450）为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的OD值，计算出待测样品中AFP的实际浓度。
【参考区间】
1.正常人血清AFP<20ng/ml。
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2.由于ELISA法受人工因素干扰大，重复性相对较差，因此在每次测量时都要加标准品做标准曲线。
【注意事项】
1.标本的采集和保存 血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血，避免细菌污染，血清标本宜在新鲜时检测，一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过1周测定的需低温冰存。标本储存时间过长，IgG可聚合成多聚体,在间接ELISA测定中导致本底过深，甚至造成假阳性。
2.试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离
子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3.雷锋帽加样 加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。
4.保温 ELISA法一般均采用37℃水浴,可将ELISA板底置于水浴箱中,使温度迅速平衡。为避免蒸发，一定要用封板条封住反应孔。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,在盒底垫湿的纱布,最后将ELISA板放在湿纱布上。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。
5.洗涤 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。因此要严格按照实验室制定的SOP进行洗涤，控制洗板时间和次数，避免因洗板不干净或洗板过度造成的假阳性和假阴性。
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6.比与结果判定 显后一定要在规定时间内进行比。判读结果不能仅用目测，一定要用酶标仪测定。测定中应注意滴加显剂及终止液的量，上酶标仪时板条各孔中比液体积要一致，否则会产生误差。
【报告单】
××× 市人民医院检验报告单 质评合格，省内参考
检查项目：血清AFP 采集时间 : 接收时间:
姓名 | | 患者编号 | | 标本号 | | 报告时间 | | |
性别 | | 床号 | | 送检医师 | | 临床诊断 | | |
年龄 | | 科别 | | 标本种类 | | 备注： | | |
序号 | | 项目 | | 结果 | | 参考值 | | 单位 |
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此结果仅对此标本负责，如有疑问，请当日咨询 检验者： 审核者：
【原理】
使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率高，故可放大反应效果，提高反应的敏感度。
1 范围
本文件规定了B2C电子商务平台经营者交易规则制定时宜遵守的基本原则、程序和交易规则基本类别及关键要素。
本文件适用于B2C电子商务平台经营者制定交易规则等相关事项。
2 规范性引用文件
下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
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3 术语和定义
GB/T 3金属表面喷涂5408、GB/T 38652界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
电子商务平台 e-commerce platform
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