药相比，局部用药制剂阴道炎优势明显。首先，由于制剂能在局部起效，达到同等疗效所用的剂量明显减低；其次，阴道局部用药可避免或减少全身性不良反应；再者，阴道局部血管分布丰富，血流经会阴静脉丛流向会阴静脉，最终流向腔静脉，可避免药物的肝脏首过效应，制剂的生物利用度较高[21]。目前用于阴道炎的阴道局部用药制剂主要有泡腾片剂、栓剂、乳膏剂、膜剂以及阴道环和凝胶剂等[22]。软胶囊剂型是指继片剂、硬胶囊、针剂等后发展起来的一种新剂型，能将油状功能性物质、功能性物质溶液或功能性物质粉末定量压注并包封于胶膜内，形成大小、形状各异的密封胶囊。软胶囊具有可以掩盖不良气味，减少刺激性，稳定性高，抗氧化，生物利用度高等特点。外用软胶囊是在口服软胶囊的基础上发展起来的一种新型的给药方式，妇科外用软胶囊具有体积小、分布均匀、跟用药部位契合度好、使用方便、疗程短等优势[23]。目前已经销售的外用软胶囊有硝酸咪康唑阴道软胶囊、硝呋太尔制霉素阴道软胶囊、氯霉素阴道软胶囊、双唑泰阴道软胶囊，四者均为西药，目前还未见中药妇科外用软胶囊的报道，本研究旨在研究一个工艺稳定、质量可控、疗效确切的贵州苗药妇科外用软胶囊。 第一部分制剂工艺研究
第一节体外抗菌实验验证处方
正常健康妇女的阴道从生理学角度上讲是一个闭合的体腔，其内寄生着许多细菌，称为阴道正常菌。
这些菌以乳酸杆菌为主，还有表皮葡萄球菌、大肠杆菌、棒状杆菌、B族链球菌、粪链球菌、支原体、白念珠菌、消化球菌和类杆菌。各种菌之间相互制约，相互作用，相互依赖和相对统一，它们之间或是共生关系或拮抗作用，共处于阴道微生态环境中，保持着协调平衡关系。多种原因（如病原体的侵入、机械、化学物质）致阴道内微环境破坏，使得阴道自然防御功能受到破坏，这样病原体就容易侵入而导致发生阴道炎症，常见的病原菌有白念珠菌、大肠杆菌、金黄葡萄球菌等[24]。
通过查阅相关文献，本处方中的药物苦参提取物具有一定的抑菌作用[25-28]，龙血竭提取物对真菌有一定的抑制作用[29]。本实验对苦参提取物和龙血竭针对女性生殖道常见病原菌体外抑菌作用进行研究。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1 仪器
超净工作台SW-CJ-IF苏净集团安泰公司制造
压力蒸汽灭菌器YXQ-SG46-280SA上海讯博实业有限
公司医疗设备厂
电子天平AB104-N Mettler型（梅特勒-托利仪器
有限公司）
不锈钢立式电热干燥箱202A V-2武汉精华科教仪器有限公司加样Dragon PIPETTOR(大龙兴创实验仪器
公司)
内螺旋涡流金属分选机
1.1.2 试药
龙血竭西双版纳药业责任有限公司
苦参提取物实验室自制
cap3苦参总碱陕西天之润生物科技有限公司
道路广角镜生理盐水四川科伦药业股份有限公司
二甲基亚砜天津科密欧化学试剂有限公司
人造板生产线
注射用头孢曲松钠山东瑞阳制药有限公司
氟康唑注射液江苏润邦药业有限公司
金黄葡萄球菌ATCC25112
大肠杆菌ATCC25922
枯草芽孢杆菌由贵阳医学院微生物教研室分离检定白念珠菌ATCC10231
葡萄糖成都金山化学试剂有限公司
蛋白胨上海博微生物科技有限公司
琼脂上海盛思生化科技有限公司
1.2 方法
1.2.1 药敏试验
1.2.1.1 药物的配制
龙血竭粉碎，过100目筛，称取5g用60% DMSO溶解并定容至50mL；苦参提取物5g，用60% DMSO溶解并定容至50mL；苦参总碱5g，用60% DMSO 溶解并定容至50mL；龙血竭2.5g、苦参提取物2.5g，用60% DMSO溶解并定容至50mL。
1.2.1.2 培养基的配制
营养琼脂培养基：称取营养琼脂3.3g，加水1000mL溶解，121℃灭菌20min。
沙保氏琼脂培养基：称取葡萄糖2g，蛋白胨0.5g，琼脂1g，加水100mL溶解，115℃灭菌15min。
1.2.1.3菌液制备
采用直接菌落法制备菌悬液[30]，无菌操作下将金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别划线接种于营养琼脂斜面培养基上，将白念珠菌划线接种于沙氏斜面培养基上，37℃培养24h。用接种环挑取适量菌落到无菌生理盐水中，混匀，校正到浓度相当于0.5麦氏标准比浊管，用无菌生理盐水稀释100倍备用，
此时菌液为1.5×106CFU·mL-1。
1.2.1.4药物敏感性测定
采用药敏试验的平皿打洞法，即用灭菌棉签蘸取供试菌液，均匀涂布于营养琼脂平板上，然后用直径6mm的琼脂打孔器均匀打孔，每板5孔，将阴性对照、苦参提取物（mg·mL-1）、阳性对照（头孢曲松钠或氟康唑）、龙血竭（10mg·mL-1）打入孔中，以满而不溢为宜（30μL左右）并做好标记，置于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。
1.2.2 最低抑菌浓度MIC及最低杀菌浓度MBC的测定
1.2.2.1含药培养基的配制
无菌操作下按照二倍稀释法[31]将药物稀释成100，50，25，12.5，6.25，3.125，1.5625mg·mL-1的浓度梯度，同法稀释60%的DMSO空白溶剂做阴性对照。同法稀释0.128mg·mL-1的头孢曲松钠，1.28 mg·mL-1氟康唑作阳性对照。取7个直径60mm的无菌平皿编号后按顺序分别加入配好的药物0.5mL，同法处理阴性对照和阳性对照。营养琼脂培养基经121℃灭菌20min，稍微放冷至60℃左右，用无菌刻度吸管取4.5mL到一份加好药的平皿中，轻摇使药液和琼脂充分混匀，放置，冷却，该含药平皿将接种金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌这三种菌，先做好标记。白念珠菌须用沙保氏培养基培养，将沙保氏培养基经115℃灭菌15min，然后按照上述方法制备含药培养基。
1.2.2.2菌悬液的制备
采用直接菌落法制备菌悬液[30]，无菌操作下将金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别划线接种于营养琼脂斜面培养基上，将白念珠菌划线接种于沙氏斜面培养基上，37℃培养24h。将各种菌用接种环挑取适量到无菌生理盐水中，校正到浓度相当于0.5麦氏标准比浊管，用无菌生理盐水稀释100倍备用，此时菌液为1.5×106CFU·mL-1。
1.2.2.3最低抑菌浓度MIC值的测定
无菌操作下用接种环取配制好的菌悬液一环，按照标记将各个细菌均匀涂在含药营养琼脂平皿的圆圈内，白念珠菌涂在含药沙保氏平皿的圆圈内，同法处理阴性对照和阳性对照。将平皿倒置放入37℃培养箱中培养24h，观察细菌在不同浓度药物平皿上的生长情况，以抑制细菌生长的平皿所含药物浓度测得MIC。
1.2.2.4 最低杀菌浓度的测定
将MIC测定中未生长细菌的琼脂用镊子小心取下来，反过来涂于营养琼脂平板上，做好标记，37℃培养24h，观察结果，以仍无细菌生长的管内的药物浓度为该药的最小杀菌浓度。
采集程序
1.2.3 苦参提取物和龙血竭的联合抑菌试验ngd071
1.2.3.1 苦参提取物和龙血竭联合后MIC值的测定
按照棋盘格法[32]进行实验，将两种药物稀释成100，50，25，12.5，6.25，3.125mg·mL-1的浓度梯度，苦参提取物0.5mL，龙血竭药0.5mL，培养基4mL，摇匀，放冷，接种细菌。37℃恒温培养24h，观察记录，以最佳组合时无菌生长的最高药物稀释度作为最低抑菌浓度。（其中金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌用营养琼脂培养基，白念珠菌用沙保氏培养基。）
1.2.3.2 FIC值计算与判断
FIC指数=MIC A药联用/ MIC A药单用+MIC B药联用/ MIC B药单用
当FIC指数≤0.75时表示有协同作用；0.75＜FIC指数≤1时表示有累加作用；1＜FIC指数≤2时表示无关；FIC指数＞2时表示拮抗。
2 结果
2.1 药敏试验结果
苦参提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用，对白念珠菌的抑制作用较差，龙血竭对金黄葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用，对大肠杆菌和白念珠菌的抑制作用较差。结果如图1-1。
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