PTCA(PART B: CHEM. ANAL.)
知识与经验
D01：10.11973/lhjy-hx201911018顶空-气相谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中 2种甲横酸院酯的含量
张莉莉、金珍〃
(1.芜湖市产品质量监督检验所，芜湖241000; 2.苏州大学分析测试中心，苏州215123)
中图分类号：0657.63 文献标志码：B 文章编号：1001-4020(2019)11-1341-04
甲磺酸伊马替尼是一种小分子酪氨酸激酶抑制 剂，该药在2001年获得美国食品药品监督管理局的 认证，被批准在美国用于干扰素失败的慢性粒细胞性白血病。甲磺酸伊马替尼还被美国食品 药品监督管理局、欧盟专利药品评审委员会批准用于胃肠道间质肿瘤的[1_2]。甲磺酸伊马替尼合成过程中用到的甲醇、乙醇，可能在成盐时与甲磺酸 反应，生成甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，这些残留的甲 磺酸烷酯具备潜在的基因毒性，会导致染体重排或变异，并致癌[3<]。
国内关于甲磺酸伊马替尼中杂质的测定已有相 关报道[51°]，其中测定甲磺酸烷酯的方法主要有气相谱法、气相谱-质谱法和液栩谱-质谱法。根据目标物的性质，利用具有强大定性定量能力的气相谱-质谱法来对其测定更有优势，但国内相关 文献报道较少[1°]，且并未对甲磺酸乙酯做相关研究。本工作建立了气相谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的分析方法，衍 生化过程参考欧洲药典的方法，使甲磺酸烷酯与碘化钠反应生成易于测定的碘代烷，方法简便、快速，为甲磺酸伊马替尼的安全使用提供了质量控制方法。
1试验部分
1.1仪器与试剂
Agilent 6890-5973N型气相谱-质谱联用仪；Agilent 7694E型顶空自动进样器。
溶液A：称取无水硫代硫酸钠30 m g及碘化钠60.0 g置于50 m L容量瓶中，加水溶解并稀释至刻 度，摇匀。* 收稿日期：2019-04-17
* 通信联系人。zjin@
内标储备溶液：移取甲磺酸丁酯10 p L，置于已
盛有适量乙腈（8 +2)溶液的10 m L容量瓶中，加乙
腈（8 +2)溶液稀释至刻度，摇匀。
内标溶液：移取内标储备溶液20 y L，置于 100 m L容量瓶中，加乙腈（8 +2)溶液稀释至刻度，
摇匀。
甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯标准储备溶液：10.0 g • L—1，称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯各
50.0 m g，置于已盛有适量甲苯的5 m L容量瓶中，
加人甲苯稀释至刻度，摇匀。三通管接头
甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液：10.0 m g . L—1，移取10.0 g • L—1甲磺酸甲酯、甲磺
酸乙酯标准储备溶液各25 ^L，置于25 m L容量瓶 中，加入内标溶液稀释至刻度，摇匀。使用时用内标
洗肾机溶液稀释至所需质量浓度。
系统空白：由乙腈（8 +2)溶液和溶液A各
0.5 m L混合而成。
甲磺酸甲酯（M M S)、甲磺酸乙酯（E M S)的纯度
均为99.0%，甲磺酸丁酯（B M S)的纯度为99.1%;
乙腈为谱纯；甲苯、碘化钠和硫代硫酸钠均为分析 纯；试验用水为纯净水。
1)顶空条件平衡温度60 °C ，平衡时间30 m i n〇
2)谱条件 Agilent D B-624毛细管谱柱(30 m X0.25 m m，1.4 fim)；载气为氦气（纯度大于 99.999%)，载气流量1.0 m L . m i n—1；分流进样，分
流比10 :1，进样量1.00 m L；进样口温度220 t。
柱升温程序：初始温度为40 °C，保持1m i n；以
10 "C • min-1速率升温至130 °C；再以30 °C . min—1速率升温至240 °C，保持7 m i n。
3)质谱条件电子轰击离子源，离子源温度为
•1341
•
fSUf超睡-圯莩分冊_______________________________张莉莉，等：顶空-气相谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中2种甲磺酸烷酯的含量
230 °C；四极杆温度为150 °C，接口温度为280 X：；质谱采集模式为选择离子监测（SIM);M M S质荷比 (w/z)S142，127;E M S w/z S156,127;BMS(R 标）》j/z 为 57，184。
1.3试验方法
称取甲磺酸伊马替尼样品25 m g置于20 mL 顶空瓶中，加人溶液A及内标溶液各0.5 m L，密封，混匀，按仪器工作条件进行测定。 i w L.J^
1I I I I I
2 4 6 8 10 12
f/m in
(a)系统空白2结果与讨论
2.1谱行为
分别移取系统空白和10.0 yg •L-1甲磺酸甲 酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液（0.5 m L混合标准溶液中加人0.5 m L溶液A)置于顶空瓶中，密封，按仪 器工作条件进行测定，其谱图见图1。
按试验方法对空白样品和加标后的空白样品进
内标
MMS
EMS脚踏式垃圾桶
X k J__________________i,________________
I I I I I I2
2 4 6 8 10 12
f/m in
(b)混合标准溶液
MMS
EMS
2 4 61012
f/m in
Cc)空白样品
加热膜
4 6 8
f/m in
10 12
(d)加标后的空白样品
图1谱图
Fig. 1Chrom atogram s
行分析，其谱图见图1。
由图1可知：系统空白和空白样品中目标物均未检出，处理过程未引人污染；混合标准溶液和加标 后的空白样品中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯及甲磺酸丁酯的衍生物峰能实现良好分离。
2.2标准曲线和检出限
分别移取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液系列各0.5 m L，加人0.5 m L溶液A后置于顶空 瓶中，密封，按仪器工作条件进行测定，并绘制标准 曲线。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的线性范围、线性回 归方程和相关系数见表1。
分别移取0.50,2.00 L—1甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液各0.5 m L，加人0.5 m L溶液 A后置于
顶空瓶中，密封，按仪器工作条件进行测定，记录谱图和峰面积。0.50 //g •I，1甲磺酸甲 酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液的谱图中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的衍生物峰的信噪比分别为4.3, 4.5，均在3〜5之间；2.00 /ug •L_1甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液的谱图中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的衍生物峰的信噪比分别为10.8,10.1，均 在10〜15之间。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯的检出限 (3S/N)和测定下限（10S/N)见表1。
2.3精密度和回收试验
分别移取10.0,50.0,200.0叫•L—1的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液0.5 m L，加人0.5 m L溶液A后置于顶空瓶中，密封，按仪器工作条件进行测定，平行测定5次，甲磺酸甲酯、甲磺酸 乙酯测定值的相对标准偏差（RSD)见表2。
•1342 •
騸-圯莩分冊_________________________张莉莉，等：顶空-气相谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中2种甲磺酸烷酯的含量
表1线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和测定下限
Tab. 1Linearity ranges, linear regression equations, correlation coefficients, detection limits and lowe哺乳外衣
r limits of determ ination
化合物线性范围以
(p g• L-1)
线性回归方程相关系数
检出限!〇/
(fxg • L-1)
测定下限^/
(fxg•L~l)
MMS10.0〜200.0^=8.500X1〇-3jc+2.714X1〇-10.999 00.50 2.00 EMS10.0〜200.0：y=9.100X10-3x+9.230X10—20.998 00.50 2.00
表2精密度试验结果（n=5)
仿古建筑施工
Tab. 2 Results of test for precision (/i = 5)
化合物
已知值<〇/
(fig •L-1)
测定值V
(fig •L_1)
RSD/
°/o
MMS10.010.1 1.9
50.049.5 1.5
200.0198.7 1.0 EMS10.09.90.80
50.049.80.60
200.0200.00.60
按试验方法对空白甲磺酸伊马替尼样品进行加 标回收试验，计算回收率，结果见表3。
表3 回收试验结果
Tab. 3 Results of test for recovery
化合物加标量/〇/
(fJL g •L_ 1)
回收量p/
(/zg • L""1)
回收率/
%
MMS9.389.2898.9
18.818.598.4
46.942.891.3
EM S10.510.398.1
21.020.396.7
52.648.391.8
2.4耐用性试验
移取200.0 • L—1甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯混合标准溶液0.5 m L，加入0.5 m L溶液A后置于顶 空瓶中，密封，分别调整程序升温中初始温度、载气 流量等条件，按仪器工作条件进行测定，考察甲磺酸 甲酯、甲磺酸乙酯衍生物峰分离度。结果表明：柱升 温程序初始温度依次为35,45 °C时，分离度依次为 4.67,4.10；载气流量依次为 0.5,0.7,0.9 m L •min-1时，分离度依次为5.08,3.83,3.84。可以看 出：柱升温程序中初始温度、载气流量在确认的耐用 性范围内变动时，对目标物的测定无影响，说明该方 法耐用性良好。
2.5样品分析
按试验方法对某药物研究院提供的5批甲磺酸 伊马替尼样品进行分析，结果见表4。
表4样品分析结果
Tab. 4 Analytical results of the samples mg • kg.
化合物样品1样品2样品3样品4样品5
MMS
EM S
:
0.57
0.58 1.280.36
由表4可知：本方法能较好地应用于甲磺酸伊马替尼中甲磺酸烷酯的测定。
2006年欧洲药品评价局颁布了《基因毒性杂质限度指南》，引人毒理学关注阈值（T T C)的概念，以
此作为药物中基因毒性杂质控制的限度。之后美国 食品药品监督管理局和人用药品注册技术要求国际 协调会也颁布了相关的指南对基因毒性杂质进行质 量控制。根据T T C规定，对于甲磺酸伊马替尼来说，按其每日最大服用量800 m g计算，基因毒性杂 质质量分数不得超过1.875 m g • kg^1，本工作中甲 磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的测定下限均为2.00 f x g •L^1，按取样量25 m g计算，相应质量分数为0.04 m g •kg—1，完全符合T T C所规定的限量要求。
本工作采用顶空-气相谱-质谱法测定甲磺酸 伊马替尼中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的含量，方法 专属性强、灵敏度高，满足相关残留测定的要求，可 作为甲磺酸伊马替尼中基因毒性杂质的质量控制方法。
参考文献：
[1]赵瑾，姜达.甲磺酸伊马替尼耐药机制及其逆转研究进
展[J].癌症进展，2009,7(2) ,158-165.
[2] DAGHER R, COHEN M, WILLIAMS G, et al. Ap-
proval summary：Imatinibmesylate in the treatment of
metastatic and/or unresectable malignant gastrointesti
nal stromal tumors [J].Clinical Cancer Research»
2002,8(10)：3034-3038.
[3] GICHNER T. Differential genotoxicity of ethyl meth-
anesulphonate，N-ethyl-N-nitrosourea and maleic hy-
drazide in tobacco seedlings based on data of the comet
assay and two recombination assays[J]. Mutation Re
search/ G enetic Toxicology and Environmental Muta-
• 1343 •
张莉莉，等：顶空-气相谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中2种甲磺酸烷酯的含量
genesis, 2003,538(1/2) ： 171-179.
[4] STOPPER H, LUTZ W K. Induction of micronuclei
in human cell lines and primary cells by combination treatment with /-radiation and ethyl methanesulfonate [J]. Mutagenesis, 2002,17(2) ： 177-181.
[5] 刘俊华，钟雅妮，熊渊，等丄C-MS 测定甲磺酸伊马替尼
中基因毒性杂质的含量[J ].药物分析杂志，2013,33
(7)：1168-1170.
[6] 冯慧敏，杭太俊，高新桃，等丄C-MS 法同时检测甲磺酸
伊马替尼中3个磺酸酯基因毒杂质[J ].药物分析杂 志，2014,34(12) :2202-2206.
[7] 王康林，孙月婷.液相谱-质谱-衍生化测定伊马替尼
中甲磺酸乙酯基因毒性杂质[J ].广东化工，2017,44
(20)：210-211.
[8] 连小刚，李孝壁，程红艳.衍生气相谱法测定甲磺酸
伊马替尼中甲磺酸烷基酯类[J ].中国医药科学，2013,
3(17)：128-130.
[9] 张倩颖，冯芳.GC-ECD 法检测甲磺酸伊马替尼中甲磺
酸烷基酯[J 1广州化工，2018,46(9) :66-68.
[10] 孙琳，马平平，牛妍姘，等.气相-质谱联用法测定甲磺
酸伊马替尼中的甲磺酸烷酯类[J ].中南药学，2017,
15(9)：1293-1295.
• 1344
•
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议